研究背景外胚葉發(fā)育不良(Ectodermal dysplasias,EDs)是一種以指(趾)甲、毛發(fā)、牙齒、汗腺等外胚層起源的組織發(fā)育缺陷為主要特征的遺傳性疾病。迄今為止,有200多種外胚葉發(fā)育不良疾病被報道,約有30多種通過在分子水平鑒定其致病基因而被確診,而只涉及指(趾)甲和毛發(fā)損害的外胚葉發(fā)育不良是非常罕見的。外胚葉發(fā)育不良可以僅累及外胚層組織單獨發(fā)生,也可以成為某些遺傳性疾病的一個重要臨床特征。由于其臨床表現(xiàn)復(fù)雜多變,故當(dāng)某種綜合征表現(xiàn)不全或與其他綜合征存在癥狀重疊時,不同類型的外胚葉發(fā)育不良疾病一時很難準(zhǔn)確診斷。 目的對一個僅有甲和毛發(fā)損害的外胚葉發(fā)育不良家系進行基因突變研究,篩查導(dǎo)致相關(guān)臨床表型的候選基因,以期發(fā)現(xiàn)該家系的致病基因,明確臨床診斷。 方法收集該家系7例患者及15例正常家系成員外周血,常規(guī)酚—氯仿法提取基因組DNA,采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴增候選基因K16、K17、K6a、K6b和GJB6基因的整個編碼區(qū)序列,然后用SAP、ExonⅠ純化PCR產(chǎn)物,采用3700 DNA自動測序儀直接測序,明確具體的突變位置和方式。提取先證者病變皮膚組織RNA,通過逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)在mRNA水平驗證該家系的致病基因。 結(jié)果PCR產(chǎn)物測序結(jié)果顯示,4個角蛋白基因(K16、K17、K6a和K6b)未檢測到任何致病突變。該家系所有患者GJB6基因均存在一個雜合錯義突變31G→A,導(dǎo)致N-末端區(qū)域第11位甘氨酸被精氨酸替代(即G11R),而家系中的15例正常人DNA測序結(jié)果均未發(fā)現(xiàn)此突變。來源于先證者皮損組織的cDNA測序結(jié)果亦證實存在該突變。 結(jié)論該家系患者均存在GJB6基因突變(G11R),此基因為已知的有汗性外胚葉發(fā)育不良(hidrotic ectodermal dysplasia,HED)的致病基因。本研究通過基因突變檢測,在分子水平確診該家系患者為有汗性外胚葉發(fā)育不良,同時進一步支持GJB6基因G11R突變?yōu)閷?dǎo)致HED的主要原因。
【學(xué)位單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2009
【中圖分類】：R758.7
【部分圖文】：

一10:指甲增厚，甲下充滿角質(zhì)物，類似先天性厚甲

圖6n一9:腋毛完全缺乏。(3)皮膚組織病理切片:無菌條件下切取先證者左腋下皮膚組織，所取的標(biāo)本一份置于10%的甲醛溶液固定4h以上，經(jīng)過脫水、常規(guī)石蠟包埋、脫蠟、H一E染色，光鏡下觀察。另一份置入Znil凍存管中，放入液氮中，以備皮膚組織總RNA的抽提。(4)采集血樣:在征得所有個體知情同意后，采取7例患者及15例家系正常人外周血各sml，加lm12%EDTA抗凝劑，混勻。2、基因組DNA的抽提(1)裂解紅細(xì)胞:抗凝血6ml(5ml血，1ml抗凝劑)加入巧ml塑料離心管中，加入gml預(yù)冷的溶血試劑，上下顛倒10次左右，冰浴10分鐘，4℃下8000rpm離心10分鐘，棄上清。重復(fù)上述步驟1次。(2)裂解白細(xì)胞:加入3ml核懸液，輕輕混勻，加入50拼150OC預(yù)熱的10%SDS，

山東大學(xué)碩士學(xué)位論文結(jié)果一、組織病理表皮大致正常。真皮下部及皮下脂肪組織交界處可見結(jié)構(gòu)正常的小汗分泌腺及導(dǎo)管。其中分泌腺有兩層細(xì)胞組成，內(nèi)層為錐體形的分泌上皮細(xì)胞，外層為梭形的肌上皮細(xì)胞;導(dǎo)管由兩層立方形上皮細(xì)胞組成，胞體小、胞漿嗜堿性，管腔內(nèi)襯嗜堿性小皮的環(huán)。真皮內(nèi)稀疏分布毛囊樣結(jié)構(gòu)，中央未見毛干組織。皮膚全層未見明顯炎細(xì)胞浸潤。(圖7、8)
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本文編號：2853063