隨著社會(huì)的發(fā)展和物質(zhì)文化水平的提高，人們對(duì)自身的外表形象日益關(guān)注。然而，色素性疾病的發(fā)生使皮膚顏色不均勻一致，造成美容問題，往往給患者精神上帶來極大的煩惱。色素性疾病的發(fā)生往往是由于表皮中黑素細(xì)胞的活性、黑素體的大小、黑素體內(nèi)合成黑素的多少、以及黑素顆粒在角質(zhì)形成細(xì)胞內(nèi)分布等各種因素中一個(gè)或多個(gè)因素出現(xiàn)問題所導(dǎo)致。因此，關(guān)于黑素細(xì)胞及黑素生物合成的調(diào)控問題的研究成為研究熱點(diǎn)。黑素的生物合成是一個(gè)由酪氨酸酶催化體內(nèi)酪氨酸羥化而啟動(dòng)的一系列生化反應(yīng)過程，酪氨酸酶是黑素生成的限速酶。在黑素細(xì)胞及黑素生物合成的研究中，研究者多把酪氨酸酶的表達(dá)與活性作為一項(xiàng)重要的研究指標(biāo)。 維甲酸類藥物具有多種復(fù)雜的藥理作用，臨床上外用維甲酸可以治療痤瘡、光老化和多種角化性皮膚病。在外用該藥的過程中，一些醫(yī)生發(fā)現(xiàn)它對(duì)患者局部的皮膚顏色有一定的影響。國(guó)外學(xué)者試圖通過實(shí)驗(yàn)來弄清維甲酸類藥物改變膚色的作用機(jī)制，從而為應(yīng)用維甲酸類藥物治療色素性疾病提供可靠的理論依據(jù)。1982年正常人黑素細(xì)胞體外純培養(yǎng)的成功以及眾多鼠黑素瘤細(xì)胞系的建立，為從細(xì)胞和蛋白分子水平研究維甲酸類藥物對(duì)黑素細(xì)胞及黑素合成的影響奠定了基礎(chǔ)。國(guó)外學(xué)者發(fā)現(xiàn)維甲酸對(duì)于酪氨酸酶活性、黑素含量以及黑素細(xì)胞增殖率均有不同程度的影響作用。近年來隨著分子生物學(xué)技術(shù)發(fā)展的日新月異，使這項(xiàng)研究由分子水平逐漸進(jìn)展至基因水平。 在本實(shí)驗(yàn)中我們主要通過應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT—PCR)技術(shù)在基因水平檢測(cè)維甲酸、氫醌等藥物對(duì)B16F10小鼠黑素瘤細(xì)胞酪氨酸酶mRNA表達(dá)的調(diào)控作用，并探討其可能的作用機(jī)制。首先根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)要求將B16F10細(xì)胞在加有不同濃度藥物的新鮮培養(yǎng)基中培養(yǎng)一定時(shí)間后，消化收集細(xì)胞；用TRIzol試劑盒抽提細(xì)胞總RNA，然后將細(xì)胞總RNA逆轉(zhuǎn)錄為DNA；再以所得DNA為模板，采用PCR技術(shù)進(jìn)行核酸擴(kuò)增；擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行凝膠電泳， 醫(yī)學(xué)系2001級(jí)碩士研究生學(xué)位論文中文摘要 通過凝膠掃描儀將電泳所得擴(kuò)增條帶掃入計(jì)算機(jī)并分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:維甲酸對(duì)Bl 6F10細(xì)胞酪氨酸醉.砂認(rèn)表達(dá)確有影響， 它能夠下調(diào)B16F10細(xì)胞酪氨酸酶mRNA的表達(dá);而且因維甲酸濃度、作用時(shí) 間的不同，這種下調(diào)作用亦有所不同。隨著藥物濃度的加大、作用時(shí)間的延 長(zhǎng)，B16F10細(xì)胞酪氨酸酶mRNA的表達(dá)具有逐漸減弱的趨勢(shì)。維甲酸濃度為 100 p mol/L、作用時(shí)間為72小時(shí)，酩氨酸酶耐州A的表達(dá)下調(diào)30.13%。而 氫酪無論是單獨(dú)作用，還是與維甲酸聯(lián)合作用對(duì)酪氨酸酶.兄認(rèn)的表達(dá)均無 顯著影響。通過實(shí)驗(yàn)我們發(fā)現(xiàn)維甲酸類藥物抑制黑素細(xì)胞生成黑素作用的主 要機(jī)制是它能夠在基因轉(zhuǎn)錄水平抑制酪氨酸酶mRNA的表達(dá)。在實(shí)驗(yàn)中我獷} 同時(shí)發(fā)現(xiàn)維甲酸對(duì)霍亂毒素誘導(dǎo)的酪氨酸酶mRNA表達(dá)上調(diào)具有抑制作用。 這說明維甲酸也可以通過cA知P/PKA途徑調(diào)節(jié)酪氨酸醉基因表達(dá)，從而對(duì)黑 素的合成產(chǎn)生影響。可見，維甲酸除直接作用于酪氨酸酶基因轉(zhuǎn)錄外，還能- 夠通過其它途徑間接影響酪氨酸酶基因轉(zhuǎn)錄。 本實(shí)驗(yàn)結(jié)果為臨床應(yīng)用維甲酸類藥物治療色素性疾病提供了理論依據(jù)， 而且實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)對(duì)臨床配制相關(guān)外用藥物的濃度亦具有一定的指導(dǎo)意義。- 關(guān)于維甲酸抑制酷氨酸酶基因轉(zhuǎn)錄作用的具體細(xì)節(jié)還有待于進(jìn)一步的研究。
【學(xué)位單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2004
【中圖分類】：R739.5
【文章目錄】：
英文縮略語表
中文摘要
英文摘要
前言
材料和方法
結(jié)果
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
綜述

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 崔鳳霞;海參膠原蛋白生化性質(zhì)及膠原肽活性研究[D];中國(guó)海洋大學(xué);2007年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前2條

1 吳瓊;何首烏水提物對(duì)小鼠黑素瘤細(xì)胞黑色素生成影響的研究[D];華中科技大學(xué);2009年

2 姜寧;絨泡菌目黏菌主要代表種化學(xué)成分及活性研究[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

本文編號(hào)：2851822