背景與目的：銀屑病是一種原因未明的疾病，有多種原因可誘發(fā)，現(xiàn)多認(rèn)為點(diǎn)滴型銀屑病是由T細(xì)胞介導(dǎo)的與A族β溶血性鏈球菌感染有關(guān)的炎癥性皮膚病。有人提出鏈球菌M6蛋白作為一種細(xì)菌性超抗原在點(diǎn)滴型銀屑病發(fā)病過程中發(fā)揮著重要作用。超抗原是一類具有強(qiáng)烈刺激T細(xì)胞增殖潛能的微生物蛋白家族，研究認(rèn)為超抗原在其作用中是通過刺激T淋巴細(xì)胞大量增殖，繼而釋放大量細(xì)胞因子而發(fā)揮作用的。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)鏈球菌M6蛋白與人類50KDI型角蛋白存在高度的氨基酸同源系列，這些同源序列主要包括構(gòu)成α-螺旋結(jié)構(gòu)的七肽重復(fù)序列。在以往的研究中，我們從點(diǎn)滴型銀屑病患者咽部感染菌群中分離出β溶血性鏈球菌，從中鑒定培養(yǎng)并提純了M6蛋白，并發(fā)現(xiàn)點(diǎn)滴型銀屑病患者血清中M6蛋白抗體滴度明顯高于斑塊型銀屑病患者和正常人，初步證實(shí)點(diǎn)滴型銀屑病與鏈球菌M6蛋白可能相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)?zāi)康臑檫M(jìn)一步研究探討A族β溶血性鏈球菌M6蛋白在點(diǎn)滴型銀屑病發(fā)病中是否具有細(xì)菌超抗原作用機(jī)制。 方法：1．應(yīng)用已提純的M6蛋白，刺激點(diǎn)滴型銀屑病患者外周血單一核細(xì)胞(PBMC)，觀察PBMC對極微量M6蛋白(100ng)的增殖反應(yīng)，并與斑塊型和正常人群進(jìn)行對照；同時(shí)采用目前公認(rèn)并研究較多的葡萄球菌腸毒素B(SEB)作為超抗原對照，以破傷風(fēng)類毒素(TT)作為普通抗原對照，以RPMI-1640作為空白對照。具體如下：收集確診的點(diǎn)滴型、斑塊型銀屑病病例各30例及正常體檢人員30名，各抽取靜脈血4mL，采用密度梯度離心法分離得到PBMC，用RPMI-1640培養(yǎng)液配制成1×10~9／L細(xì)胞懸液，每孔100μL加入40孔細(xì)胞培養(yǎng)板，分別加入濃度為1mg／L的M6蛋白、SEB、TT、RPMI-1640 第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文 各100pL，37℃、5％CO。飽和濕度下培養(yǎng)6d，于培養(yǎng)結(jié)束前4h，每孔加入MTT 20pL，培養(yǎng)結(jié)束后加入甲蹦50卜L，應(yīng)用自動(dòng)酶標(biāo)儀壩定雙波長（570urn，455urn） 光密度值。同時(shí)觀察了其中 12例點(diǎn)滴型銀屑病患者應(yīng)用不同濃度門 mg／L。 Zing／L、4mg／L、sing／L）M6蛋白、SEB引起 PBMC增殖反應(yīng)的變化。2．檢壩g 20例點(diǎn)滴型銀屑病患者PBMC經(jīng)M6蛋白刺激72h培養(yǎng)上清中IFN－Y及IL4 含量變化。具體方法為：點(diǎn)滴型銀屑病患者 20例，將所得細(xì)胞懸液，每孔 lmL 加入 24孔細(xì)胞培養(yǎng)板，分別加入 M6蛋白、RPMIq（空白對照）各 100pL， 收集培養(yǎng)72h上清液300HL，離心后毛0C凍存待測。檢測采用雙抗夾心 ABC＊LISA法，嚴(yán)格按照試劑盒要求進(jìn)行操作。 結(jié)果：1．濃度 ling／L的 M6蛋白 100pL（100n）可引起點(diǎn)滴型銀屑病 患者P＊＊C明顯增殖，與＊T對比差異非常顯著（平均光密度值分別為0二3土0．05、 0．IO士0刀3，P（0刀01），而＊T與空白對照組間無顯著性差異；P＊＊C對＊6蛋 白的反應(yīng)在點(diǎn)滴型銀屑病與斑塊型銀屑病及正常對照組差異非常顯著（分別為 0．2310．05與0．1510．06、0．1710．04，P（0．001）。SEB弓起點(diǎn)滴型及斑塊型銀屑 病組PBMC的增殖反應(yīng)與正常對照組比較差異顯著；M6蛋白和SEB引起點(diǎn)滴 型銀屑病患者PBMC的增殖反應(yīng)不因其濃度的增加而增強(qiáng)。二．點(diǎn)滴型銀屑病患 者PBMC經(jīng)M6蛋白刺激培養(yǎng)72h后IFN－Y明顯增加，與空白對照組相比差異 非常顯著（A4。。分另為0．7310．33、0．24f0．16，P（0刀of）。M6蛋白束激組及空 白對照組培養(yǎng)72h后IL－4含量無明顯變化。 結(jié)論：1．極微量M6蛋白可致使點(diǎn)滴型銀屑病患者PBMC明顯增殖，而相 同量的普通抗原未能出現(xiàn)同樣結(jié)果；這種增殖反應(yīng)不因M6蛋白濃度增加而增 強(qiáng)。在點(diǎn)滴型銀屑病發(fā)病中溶血性鏈球菌M6蛋白可能是作為細(xì)菌性超抗原刺 激T細(xì)胞大量增殖而發(fā)揮作用。2．M6蛋白刺激點(diǎn)滴型銀屑病患者PBMC增殖 后引起了 TM細(xì)胞因子 IFN－Y含量明顯增加，而 ThZ細(xì)胞因子巳－4無變化。 M6蛋白的作用可能是作為細(xì)菌性超抗原刺激淋巴細(xì)胞大量增殖并產(chǎn)生Thl細(xì) 5 第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文 胞因子而發(fā)揮作用的。 我們的研究顯示：從點(diǎn)滴型銀屑病患者咽部菌群中分離提純的鏈球菌M6 蛋白與點(diǎn)滴型銀屑病關(guān)系密切，其作用機(jī)制可能是作為一種細(xì)菌性超抗原刺激 點(diǎn)滴型銀屑病患者淋巴細(xì)胞大量增殖并產(chǎn)生 IFN1等 Th細(xì)胞因子，破壞機(jī)體 Th／ThZ平衡而發(fā)揮作用的。
【學(xué)位單位】：中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2003
【中圖分類】：R758.63
【文章目錄】：
英文縮略語表
主要技術(shù)路線
中文摘要
英文摘要
文獻(xiàn)回顧
前言
第一部分 銀屑病患者PBMC對溶血性鏈球菌M6蛋白增殖反應(yīng)的研究
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
    結(jié)論
第二部分 鏈球菌M6蛋白刺激引起點(diǎn)滴型銀屑病患者PBMC細(xì)胞因子改變的研究
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
    結(jié)論
總結(jié)
參考文獻(xiàn)
綜述
參考文獻(xiàn)
致謝

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前6條

1 趙廣,馮曉玲,那愛華,蔡瑞康,杜孝元,梅英杰;點(diǎn)滴狀銀屑病患者咽部菌群調(diào)查及鏈球菌抗體的研究[J];臨床皮膚科雜志;1999年05期

2 趙廣,馮曉玲,江永強(qiáng),蔡慶,那愛華,蔡瑞康,杜孝元,梅英杰;聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測銀屑病患者咽部菌群中M6蛋白[J];臨床皮膚科雜志;2000年02期

3 趙廣,馮曉玲,那愛華,曹晉桂,劉文華;銀屑病患者血清中鏈球菌M6蛋白抗體的檢測[J];臨床皮膚科雜志;2002年04期

4 張理濤,陳學(xué)榮,殷金珠;β溶血型鏈球菌誘發(fā)點(diǎn)滴型銀屑病發(fā)病機(jī)制的研究[J];中華皮膚科雜志;1999年02期

5 張峻嶺,陳學(xué)榮,殷金珠;銀屑病患者淋巴細(xì)胞對葡萄球菌和鏈球菌超抗原刺激的增殖反應(yīng)[J];中華皮膚科雜志;1999年02期

6 張理濤,高興華,陳洪鐸,呂克己,陳學(xué)榮,殷金珠;鏈球菌抗原刺激的銀屑病患者外周血單一核細(xì)胞培養(yǎng)上清液中TNF-α和IL-6的檢測[J];中華皮膚科雜志;2000年05期

本文編號：2848801