一、研究背景與目的 白癜風(fēng)是皮膚科常見的一種獲得性色素脫失性皮膚病,發(fā)病率約為0.5～1%,其發(fā)病率無性別差異。確切的發(fā)病機制目前仍不清楚,可能與遺傳、神經(jīng)、精神、自身免疫等多種因素有關(guān)。目前的治療手段主要包括:外用補骨脂素類藥物、糖皮質(zhì)激素、免疫調(diào)節(jié)劑,自體表皮移植,局部光療或光化學(xué)療法:窄譜中波紫外線、準(zhǔn)分子激光及準(zhǔn)分子光,中醫(yī)中藥等,但目前白癜風(fēng)的治療尚無特效療法,個體對不同療法的療效差異很大,往往療程較長且易出現(xiàn)不良反應(yīng)。 近年來臨床上嘗試使用他卡西醇[1,24(OH)2D3,商品名萌爾夫,上海百潤]局部外用治療白癜風(fēng),取得了一定療效。他卡西醇是活性維生素D3衍生物,文獻(xiàn)報道活性維生素D3對角質(zhì)形成細(xì)胞具有增殖抑制、誘導(dǎo)分化的作用,最初應(yīng)用于治療銀屑病。1998年Glaser等報道兩例銀屑病患者在采用局部外用卡(鈣)泊三醇(維生素D3衍生物)聯(lián)合光療后出現(xiàn)色素沉著現(xiàn)象。隨后國內(nèi)外的臨床醫(yī)生嘗試將其單獨局部外用或聯(lián)合光療、激素等治療白癜風(fēng),均取得了很好的臨床療效。但也有研究報道鈣泊三醇聯(lián)合UVB不能提高白癜風(fēng)復(fù)色。由于該療法應(yīng)用于治療白癜風(fēng)的時間尚短,目前關(guān)于活性維生素D3衍生物治療引起白癜風(fēng)皮損區(qū)復(fù)色的機制研究較少。Ranson等報道1α-25,二羥維生素D3可以提高酪氨酸酶活性,Watabe等1α- 25 ,二羥維生素D3誘導(dǎo)小鼠前黑素細(xì)胞的分化與刺激內(nèi)皮素B受體的表達(dá),而國內(nèi)徐前喜等報道1α,25-二羥維生素D3和UVB能促進(jìn)黑素細(xì)胞增殖及黑素合成。關(guān)于他卡西醇治療白癜風(fēng)的作用機制國內(nèi)外研究較少,國外Katayama等報道聯(lián)合應(yīng)用他卡西醇和日照可以引起體外培養(yǎng)黑素細(xì)胞的c-Kit mRNA表達(dá)上調(diào),目前國內(nèi)尚未見實驗室研究方面的報道。 我們推測,他卡西醇治療白癜風(fēng)有可能是通過直接或間接作用于黑素細(xì)胞促進(jìn)復(fù)色,但目前尚未有實驗研究證實,為了初步研究他卡西醇治療白癜風(fēng)的作用機制,我們觀察了他卡西醇對體外培養(yǎng)人黑素細(xì)胞生物學(xué)性狀的影響。 二、方法與結(jié)果 1.體外黑素細(xì)胞培養(yǎng),給予不同濃度他卡西醇處理,采用MTT法測定細(xì)胞增殖,堿裂解法測定黑素合成,多巴氧化法檢測酪氨酸酶活性。結(jié)果:10-8 mol/L他卡西醇能刺激黑素細(xì)胞增殖,10-8和10-9mol/L能促進(jìn)黑素合成, 10-9～10-6 mol/L的他卡西醇能顯著增強正常人黑素細(xì)胞酪氨酸酶活性。 2.運用半定量RT-PCR法檢測TYR、TRP-1 mRNA的表達(dá)。結(jié)果:10-9～10-6 mol/L的他卡西醇能顯著上調(diào)TYR、TRP-1 mRNA的表達(dá)。 三、結(jié)論 他卡西醇可促進(jìn)黑素細(xì)胞增殖,并提示該藥物可能通過上調(diào)酪氨酸酶家族中關(guān)鍵基因TYR、TRP-1 mRNA的表達(dá)來提高酪氨酸酶活性,最終增加黑素合成。 通過以上實驗,為研究他卡西醇促進(jìn)白癜風(fēng)皮損區(qū)復(fù)色中的作用機制提供了初步的實驗基礎(chǔ)。
【學(xué)位單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2009
【中圖分類】：R758.41
【部分圖文】：

(4) 加入 0.1 % L-DOPA 溶液 10 μl/孔，37℃反應(yīng) 2 h；(5) 選擇 490 nm 波長，在酶聯(lián)免疫檢測儀上測定各孔光吸收值(A)。三、統(tǒng)計學(xué)分析數(shù)據(jù)以x±s 表示，應(yīng)用 SPSS13.0 軟件，進(jìn)行配對 t 檢驗，P < 0.05 為差異有計學(xué)意義。實驗結(jié)果一、正常人黑素細(xì)胞的培養(yǎng)和鑒定細(xì)胞接種后 24～48 h 即可貼壁，起初細(xì)胞呈梭形，兩端各有一個相對稱的起，隨著細(xì)胞的增殖，突起增多并更加明顯。培養(yǎng)初期可見混雜生長的角質(zhì)和成纖維細(xì)胞，3 周后可獲得大量純化的黑色素細(xì)胞。(圖 1)

件進(jìn)行電泳條帶半定量分析：積分光密度(integrated optical density，IOD)表示，積分泳條帶面積的乘積。計算各目的條帶與 β-actin 條帶 IO達(dá)量。積分光密度測定時注意去除背景。，應(yīng)用 SPSS13.0 軟件，進(jìn)行配對 t 檢驗，P < 0.05 為差結(jié) 果完整性：RNA 樣品經(jīng) 1%瓊脂糖凝膠電泳后，在紫外燈條清晰的 RNA 條帶，電泳結(jié)果(圖 6)。1 2 3 456

RT-PCR檢測TYRmRNA的表達(dá)
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前7條

1 徐前喜,杜娟,何培英,張建中,朱鐵君;1α,25-二羥維生素D_3和中波紫外線對正常人黑素細(xì)胞增殖及黑素合成的影響[J];北京大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2004年05期

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本文編號：2847240