目的:1.比較白癜風患者血清中谷氨酸及胱氨酸含量與健康人的差異,為深入探討其與該病的關系提供依據(jù)。2.探討肌球蛋白Ⅹ對人角質形成細胞偽足的影響。方法:1.選取34例白癜風患者為病例組及31例健康人做對照,應用高效液相色譜法測定血清中谷氨酸及胱氨酸含量并進行比較。2.借助小干擾RNA(small interfering RNA,siRNA)介導的RNA干擾(RNA interference,RNAi)技術,采用MyoⅩ基因siRNA轉染處理HaCaT細胞,以RT-PCR的方法在mRNA水平上篩選有效下調MyoⅩ的siRNA序列。3.根據(jù)所篩選出的RNA序列,構建重組慢病毒shRNA載體,即MyoⅩ-GFP-shRNA,同時構建不針對該細胞任何基因的陰性對照序列,即NCGFP-shRNA。將構建的重組慢病毒轉染處理HaCaT細胞,建立穩(wěn)定的細胞系,采用RT-PCR及Western Blot方法檢測轉染處理前后HaCaT細胞中MyoⅩ基因的mRNA及蛋白水平的變化。4.掃描電鏡觀察MyoⅩ-shRNA轉染處理前后HaCaT細胞偽足的形態(tài)變化。5.流式細胞術檢測慢病毒轉染處理前后HaCaT細胞吞噬微球能力的變化。6.激光共聚焦顯微鏡檢測慢病毒轉染處理前后HaCaT細胞吞噬微球的數(shù)量變化。結果：1.白癜風患者血清中谷氨酸和胱氨酸水平均有明顯的變化,其中谷氨酸水平與對照組相比明顯降低,而胱氨酸水平卻明顯升高,兩組差異經(jīng)統(tǒng)計學檢驗均有顯著性意義(P0.05)。2.在不同性別、年齡、期別的白癜風患者血清中谷氨酸及胱氨酸含量均無明顯差異(P0.05)。3.所設計的MyoⅩ基因重組慢病毒能有效下調MyoⅩ基因mRNA及蛋白表達水平。4.掃描電鏡觀察MyoⅩ基因重組慢病毒轉染后HaCaT細胞偽足數(shù)量減少。5.流式細胞術檢測MyoⅩ基因重組慢病毒轉染處理后HaCaT細胞吞噬微球能力降低。6.共聚焦顯微鏡檢測MyoⅩ基因重組慢病毒轉染處理后HaCaT細胞吞噬微球的數(shù)量的減少。結論:1.白癜風患者谷氨酸及胱氨酸代謝異常,提示應關注其對患者療效的影響。2.MyoⅩ影響HaCaT細胞偽足的形成,下調MyoⅩ在HaCaT細胞中的表達,可以減少HaCaT偽足的形成,并能夠降低其吞噬功能。
【學位單位】：大連醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2015
【中圖分類】：R758.41
【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
第一部分 白癜風患者血清氨基酸水平分析
    （一）前言
    （二）材料與方法
    （三）結果
    （四）討論
    （五）結論
第二部分 肌球蛋白Ⅹ對人Ha Ca T細胞偽足的影響
    （一）前言
    （二）材料與方法
    （三）結果
    （四）討論
    （五）結論
參考文獻
綜述
    參考文獻
致謝

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本文編號：2846863