目的:分泌型卷曲相關蛋白5(SFRP5)在多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用。然而,SFRP5在黑色素瘤中的作用尚不清楚。本實驗旨在探討SFRP5對黑色素瘤細胞生物學特征的影響并闡明具體機制。方法:分別使用免疫組織化學和Western blot檢測SFRP5在黑色素瘤組織和黑色素細胞中的表達量。在體外,利用MTT實驗、集落形成實驗檢測SFRP5對黑色素瘤細胞增殖的影響;流式實驗檢測SFRP5對黑色素瘤細胞凋亡的影響;劃痕愈合實驗和Tanswell遷移實驗檢測SFRP5對黑色素瘤細胞遷移的影響;Tanswell侵襲實驗檢測SFRP5對黑色素瘤細胞侵襲的影響。機制方面,利用Western blot探討SFRP5在黑色素瘤細胞中對Wnt信號通路的調控;Western blot和qRT-PCR檢測SFRP5對上皮間葉轉化(EMT)以及基質金屬蛋白酶2/9(MMP2/9)的影響。在體內,將處理后的黑色素瘤細胞接種于裸鼠皮下,觀察SFRP5對黑色素瘤生長的影響;免疫組化、Western blot和qRT-PCR檢測SFRP5對血管生成的影響;HE染色觀察SFRP5對黑色素瘤肺轉移的作用;免疫組織化學檢測瘤體內EMT和MMP2/9的表達情況。結果:我們發(fā)現SFRP5在黑色素瘤組織和黑色素瘤細胞中表達明顯減少。在體外,過表達SFRP5對黑色素瘤細胞的增殖和凋亡沒有影響,但明顯抑制黑色素瘤細胞遷移和侵襲。機制方面,過表達SFRP5通過Wnt信號通路抑制EMT和減少MMP2/9表達,從而抑制黑色素瘤細胞遷移和侵襲。在裸鼠體內,過表達SFRP5通過減少血管生成抑制黑色素瘤生長以及減少肺轉移。結論:SFRP5抑制黑色素瘤細胞遷移與侵襲,其機制可能與Wnt信號通路有關。
【學位單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：R739.5
【部分圖文】：

圖 1.1 SFRP5 在黑色素瘤組織中表達下調Figure1.1 SFRP5 expression was downregulated in melanoma tissuesA: SFRP5 在黑色素瘤組織和正常皮膚組織中的免疫組化結果；B：SFRP5 陰性表達率和陽性表達率；C：GEPIA 數據庫中 SFRP5 在正常皮膚組織和黑色素瘤組織中的表達量。A: Representative immunohistochemical staining of SFRP5 in normal skin and melanoma

圖 1.2 SFRP5 在黑色素瘤細胞中表達下調 1.2 SFRP5 expression was downregulated in melanoma析 SFRP5 在人黑色素細胞和黑色素瘤細胞株中的表達sion in human epidermal melanocytes cell line and meln blot analysis. ***P＜0.001

結果顯示過表達 SFRP5 對 A375 細胞和 GLL-19 細胞的凋亡沒有影響（圖2.1D）。圖 2.1 過表達 SFRP5 對黑色素瘤細胞增殖和凋亡的影響Figure 2.1 The effect of SFRP5 overexpression on proliferation and apoptosisA：Western blot 分析 A375 細胞和 GLL-19 細胞轉染 AdSFRP5 后 SFRP5 的表達量；B：

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本文編號：2824929