第一部分淋球菌的基因分型、毒力島分類及與女性無癥狀感染關(guān)系的研究 目的評價Opa分型及NG-MAST對淋球菌分離株進行基因分型的能力及性伴侶分離淋球菌基因型別之間的關(guān)系，研究淋球菌不同基因型別的毒力島類型及其所引起女性無癥狀感染關(guān)系。 方法12對性接觸者淋球菌分離株培養(yǎng)鑒定后Opa基因以HpaⅡ酶切及聚丙烯酰胺凝膠電泳銀染顯色分析；12株男性標(biāo)本和81株女性標(biāo)本PCR擴增por和tbpB后測序用NG-MAST方法從分子水平上進行基因分型，并用ClustalX軟件做進化樹分析；并對毒力島分類與女性無癥狀感染關(guān)系進行了研究。 結(jié)果12對性接觸患者分離株中，NG-MAST區(qū)分出10種ST型，而使用Opa分型則呈現(xiàn)12種OT型；新發(fā)現(xiàn)的ST(217-679)是國內(nèi)特有的流行株。武漢地區(qū)女性感染的81株野生株中，GGI陽性菌株占了64株(80．43％)；無癥狀組有GGI陽性株也有GGI陰性株，有癥狀組也是如此。 結(jié)論患者-性伴組除了45／46之外每對菌株的ST型及OT型均相同，表明患者與性伴相互接觸傳染。Opa-typing及NG-MAST可區(qū)分性關(guān)系網(wǎng)中的淋球菌菌株，二種方法分型結(jié)果總的趨向一致。Opa分型能力高于NG-MAST，ST型別可進一步的分成opa-types(OT)亞型。GGI毒力島與女性癥狀感染之間并無明顯的相關(guān)性，即女性有膿性分泌物感染并不是感染了強毒力的菌株所致。 第二部分衣原體感染、性激素水平等因素與女性無癥狀感染關(guān)系的研究 目的探討女性淋球菌感染癥狀與衣原體感染及體內(nèi)性激素水平等因素之間的關(guān)系。 方法選擇136例無明顯癥狀女性淋病患者為觀察組，45例有癥狀者為對照組，檢測宮頸分泌物衣原體及淋球菌DNA；放射免疫法測定E2和P濃度；用RT-PCR和ELISA的方法在mRNA水平和蛋白水平檢測炎癥因子TNF-α、IL-1β的表達(dá)。用SPSS12．0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析。 結(jié)果淋病的無明顯癥狀感染與衣原體感染無顯著相關(guān)性，但其炎癥因子TNF-α、IL-1β減少與血清孕激素水平升高的相關(guān)性具有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)論女性淋病患者體內(nèi)孕激素水平的增高可能是導(dǎo)致無癥狀感染的重要原因。 第三部分孕激素體外調(diào)節(jié)Ngo-PMNs炎癥反應(yīng)的作用機制研究 目的選擇了有癥狀組和無癥狀組的非獨特NG-MAST亞型各3種菌株，進一步研究孕激素在這些淋球菌野生株引起的中性粒細(xì)胞炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)作用，探討其作用差異及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的可能機制。 方法分離人外周血中性粒細(xì)胞(PMNs)，用免疫熒光和RT-PCR檢測PMNs上PR的表達(dá)：細(xì)胞維持在含10％熱滅活胎牛血清的RPMI培養(yǎng)液中，細(xì)胞濃度為5×10~6，淋球菌培養(yǎng)過夜后重懸在PBS中調(diào)整為OD_(600)=0．15(～10~8 gonococci ml~(-1))，感染復(fù)數(shù)(MOI)為10 bacteria／cell，在孕激素作用的不同時段用熒光定量PCR的方法檢測iNOS，eNOS，TNF-a和IL-1β的變化，用Western Blot測定iNOS，eNOS，Akt和p-Akt(Ser473)蛋白水平，比較分析其差異。 結(jié)果我們通過RT-PCR和免疫熒光的方法發(fā)現(xiàn)人的外周中性粒細(xì)胞并不表達(dá)經(jīng)典的PR受體；孕激素能抑制iNOS，TNF-α和IL-1β的mRNA表達(dá)，在有癥狀組NgoST2951、ST735、ST436和無癥狀組ST809、ST369、ST2948中并沒有顯著差別；孕激素顯著下調(diào)了iNOS蛋白的表達(dá)水平，然而eNOS蛋白沒有檢測到顯著的改變；在孕激素處理前后沒有能觀察到磷酸化的Akt蛋白，總的Akt也沒有改變。 結(jié)論孕激素的壓力導(dǎo)致PMNs中加劇iNOS表達(dá)的抑制和PMNs前炎癥因子的下調(diào)，而這種作用是不依賴于PR介導(dǎo)受體途徑和Akt信號通路。 第四部分孕激素體外調(diào)節(jié)Ngo-PMNs呼吸爆發(fā)、凋亡應(yīng)答的機制研究 目的研究孕激素體外調(diào)節(jié)淋球菌引起的中性粒細(xì)胞呼吸爆發(fā)和凋亡的作用。 方法分離人外周血中性粒細(xì)胞，分別用孕激素和十字孢堿處理，十字孢堿作為陽性對照。在0，3，8，12小時等時段用熒光定量RT-PCR分別測定各組中性粒細(xì)胞中凋亡抑制蛋白cIAP2和XIAP的表達(dá)水平；同時用流式細(xì)胞儀檢測PMNs凋亡，用魯米諾化學(xué)發(fā)光法檢測淋球菌ST2951株刺激PMNs后呼吸爆發(fā)。 結(jié)果cIAP2在孕激素處理3h后顯著上調(diào)而XIAP和ST2951+medium組相比上調(diào)輕微；cIAP2在十字孢堿組是下調(diào)的。此外，我們發(fā)現(xiàn)孕激素對淋球菌ST2951刺激后的中性粒細(xì)胞有明顯的延遲凋亡作用，尤其是在12h的時候；10ng／mL的孕激素對中性粒細(xì)胞的呼吸爆發(fā)并沒有顯著的影響，而十字孢堿加強了淋球菌刺激后中性粒細(xì)胞超氧負(fù)離子的產(chǎn)生。 結(jié)論孕激素對淋球菌引起的中性粒細(xì)胞炎癥反應(yīng)有很重要的調(diào)節(jié)作用，孕激素介導(dǎo)的延遲感染了淋球菌的中性粒細(xì)胞凋亡可能是其逃避天然免疫和建立女性生殖道長期的低水平感染的重要機制，可能在女性無癥狀感染中起重要作用。
【學(xué)位單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2009
【中圖分類】：R759
【部分圖文】：

徽硼堿癱警趁黯;圖2一1圖2一3淋球菌株基因以HPan酶切后聚丙烯酞胺凝膠電泳銀染顯色分析馨2麟圖以三、GGI毒力島分類的結(jié)果有癥狀組和無癥狀組的有意思的是新發(fā)現(xiàn)的基因型集于患者月經(jīng)周期的黃體期NG一MAST分型結(jié)果和GGI毒力島對應(yīng)列在表1中，非常ST2951(n二8)是例數(shù)最多的無癥狀組三年流行株，均收，GGI毒力島均為陽性，見圖3。ST2951(217一679)PortbPBLIST0fALLEL〔SFORPORlnFASTAt偽知口tL簇ST仗ALLELESFORT日PB酌陰〔GAIOImatH叻口呀扭閃.{下虧面訴閃i勺rrr~’--一一~.~甲~..一’ ’ ’lll;弓l:一二二一一二二舀~;飛二乙 :::::…… … … … … .........卜卜礴礴.二廣甩戈戶傀二立牛佗介幾戶一二二 二 二 llld，，陌一“‘“‘曰、 -.....尸尸~一~‘一‘.-..-一-一~一‘~一 一 一...，一弋一幾爪二-一一~，佗一岌飛兩一1~1勺二二 二oue

NG一MAST分型結(jié)果和GGI毒力島對應(yīng)列在表1中，非常ST2951(n二8)是例數(shù)最多的無癥狀組三年流行株，均收，GGI毒力島均為陽性，見圖3。ST2951(217一679)PortbPBLIST0fALLEL〔SFORPORlnFASTAt偽知口tL簇ST仗ALLELESFORT日PB酌陰〔GAIOImatH叻口呀扭閃.{下虧面訴閃i勺rrr~’--一一~.~甲~..一’ ’ ’lll;弓l:一二二一一二二舀~;飛二乙 :::::…… … … … … .........卜卜礴礴.二廣甩戈戶傀二立牛佗介幾戶一二二 二 二 llld，，陌一“‘“‘曰、 -.....尸尸~一~‘一‘.-..-一-一~一‘~一 一 一...，一弋一幾爪二-一一~，佗一岌飛兩一1~1勺二二 二oue， ygloba!seq一 enc.andSTda協(xié)base Querygloba!seq‘月enc。{Pleas.:hoo，e一， a.ldSTd舀t已b舀se PleaseChOO弓e28

華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文結(jié)果1份女性患者分泌物培養(yǎng)及淋球菌、衣原體的PCR鑒定:181名患者分為兩組，45癥狀組和136例無癥狀組，共分離出淋球菌菌株62株(部分做NG一MAST基因分型，發(fā)表)。181名患者中淋球菌PeR結(jié)果176例165rRNA基因陽性、173例eppB基因，有4例165rRNA和eppB基因均為陰性但培養(yǎng)陽性;衣原體PeR結(jié)果39例陽性，中29份是無癥狀組，10份是有癥狀組;7例標(biāo)本衣原體(1131bP)、淋球菌cPpB和pCR結(jié)果如圖1所示。第2到s泳道為165的pCR結(jié)果，9到15泳道為cppB，而16到2為衣原體。呷z結(jié)果。Maker為DLZ000，7例標(biāo)本分別為N3、N4、N7、N13、N98、9和N181。

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 祁文瑾,石一復(fù);妊娠與念珠菌性外陰陰道炎[J];國外醫(yī)學(xué).婦幼保健分冊;2003年06期

本文編號：2815812