第一部分武漢地區(qū)淋球菌對6種抗菌藥物敏感性的監(jiān)測 目的了解武漢地區(qū)淋球菌對6種抗菌藥物耐藥發(fā)生率及耐藥趨勢的變化,為臨床用藥提供依據(jù),同時(shí)為進(jìn)一步研究淋球菌多傳遞耐藥系統(tǒng)(mtr)耐藥機(jī)制中反向重復(fù)序列(IR區(qū))的作用收集臨床標(biāo)本。 方法臨床分離76株淋球菌,采用瓊脂稀釋法測定淋球菌對于青霉素、四環(huán)素、阿奇霉素、環(huán)丙沙星、頭孢曲松、大觀霉素的最小抑菌濃度(MIC);根據(jù)相關(guān)耐藥標(biāo)準(zhǔn)判定菌株的耐藥性。 結(jié)果2004年4月～2004年12月從臨床淋病患者共分離培養(yǎng)鑒定76株淋球菌,其中β-內(nèi)酰胺酶試驗(yàn)陽性者共6株,約占7.89%。β-內(nèi)酰胺酶試驗(yàn)陰性者耐青霉素、四環(huán)素、阿奇霉素、環(huán)丙沙星的菌株分別占60.00%(42)、71.42%(50)、37.14%(26)、54.28%(38),同時(shí)耐2種及以上抗菌藥物的交叉多重耐藥率為80%(56);未發(fā)現(xiàn)耐大觀霉素、頭孢曲松的菌株。 結(jié)論武漢地區(qū)淋球菌環(huán)丙沙星耐藥率、交叉多重耐藥率均增長迅速;頭孢曲松、大觀霉素尚未發(fā)現(xiàn)耐藥菌株,與1996年～1998年相比耐藥率基本無變化,仍可以作為武漢地區(qū)治療淋病的首選藥物;其余4種不作為首選。 第二部分淋球菌mtr系統(tǒng)的IR區(qū)基因突變與其耐藥性的關(guān)系 目的探討mtr系統(tǒng)IR區(qū)基因點(diǎn)突變與淋球菌耐藥性的關(guān)系;耐單一種類抗生素和耐兩種或以上類型抗生素的耐藥株的IR區(qū)點(diǎn)突變的差異;實(shí)驗(yàn)室誘導(dǎo)耐藥株與自然耐藥株之間IR區(qū)點(diǎn)突變的差異。 方法臨床分離淋球菌以瓊脂稀釋法進(jìn)行藥敏試驗(yàn),測定其MIC;以次抑菌耐藥濃度方法對臨床分離敏感菌株進(jìn)行藥物誘導(dǎo)篩選,直至誘導(dǎo)篩選出耐不同藥物菌株;對兩種來源的菌株標(biāo)本以聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴(kuò)增包含IR區(qū)在內(nèi)的目的基因,對擴(kuò)增產(chǎn)物測序;比較IR區(qū)基因序列。 結(jié)果臨床分離組中:敏感株及僅耐青霉素菌株無IR區(qū)基因突變,交叉多重耐藥菌株中IR區(qū)除1株為堿基A/T插入外均有堿基A/T缺失;由實(shí)驗(yàn)室誘導(dǎo)的耐藥菌株中:所有僅耐1種藥物菌株及1株多重耐藥株無IR區(qū)基因突變,7株交叉多重耐藥菌株IR區(qū)有堿基A/T缺失;交叉多重耐藥株堿基點(diǎn)突變可能有兩種形式即單個(gè)堿基A/T的缺失和插入。 結(jié)論淋球菌敏感株及僅耐1種抗生素耐藥株的IR區(qū)無點(diǎn)突變;淋球菌交叉多重耐藥株存在IR區(qū)點(diǎn)突變,可能有兩種形式即單個(gè)堿基A/T的缺失和插入。IR區(qū)點(diǎn)突變會(huì)引起淋球菌交叉多重耐藥株的產(chǎn)生,增加淋球菌對抗生素的抗性。 第三部分淋球菌株IR基因突變與mtrC基因表達(dá)的關(guān)系 目的研究不同來源不同耐藥性淋球菌株mtrC蛋白產(chǎn)物表達(dá)差異及mtr系統(tǒng)的IR區(qū)基因點(diǎn)突變與mtrC基因轉(zhuǎn)錄和蛋白表達(dá)水平的關(guān)系,進(jìn)一步探索mtr系統(tǒng)的非mtrR依賴調(diào)節(jié)機(jī)制。 方法瓊脂稀釋法測定抗生素對不同菌株MIC,以次抑菌耐藥濃度方法對臨床分離的敏感菌株進(jìn)行藥物誘導(dǎo)篩選,直至誘導(dǎo)篩選出耐不同藥物的菌株;采用RT-PCR檢測mtrC的mRNA表達(dá)水平變化,Western blot檢測mtrC蛋白表達(dá)狀況;將實(shí)驗(yàn)室誘導(dǎo)所得耐藥菌株與臨床分離自然耐藥株mtrC轉(zhuǎn)錄及蛋白表達(dá)水平進(jìn)行比較,對其IR區(qū)基因點(diǎn)突變與MtrC蛋白的表達(dá)作相關(guān)性分析。 結(jié)果臨床分離組中:敏感株及僅耐青霉素菌株無IR區(qū)基因突變,但兩者之間mtrC轉(zhuǎn)錄水平及蛋白表達(dá)水平有差異(P0.05);而耐藥組中交叉多重耐藥菌株組(IR區(qū)堿基突變組)則顯著高于僅耐青霉素菌株(無突變組)(P0.05),不同耐藥性交叉多重耐藥菌株組之間則無顯著差異(P0.05)。實(shí)驗(yàn)室誘導(dǎo)篩選組中:在敏感株及僅耐1種藥物菌株組中,耐1種藥物的菌株mtrC轉(zhuǎn)錄及蛋白表達(dá)水平顯著高于敏感組菌株(P0.05),耐1種藥物的菌株不同組別之間無顯著的差異(P0.05);在耐藥組中,交叉多重耐藥菌株組(突變組)顯著高于耐1種藥物菌株組(無突變組)(P0.05)。臨床分離組與實(shí)驗(yàn)組相比較,交叉多重耐藥菌株組mtrC轉(zhuǎn)錄水平及蛋白表達(dá)水平無顯著性差異(P0.05)。 結(jié)論淋球菌mtr系統(tǒng)存在非mtrR依賴調(diào)節(jié)機(jī)制;mtr系統(tǒng)的IR區(qū)點(diǎn)突變可能和其它耐藥機(jī)制協(xié)同作用引起mtrC基因轉(zhuǎn)錄及蛋白表達(dá)增加進(jìn)而提高淋球菌的耐藥性;淋球菌產(chǎn)生耐藥的過程中可能首先發(fā)生的是mtrR基因突變,產(chǎn)生低中度耐藥,隨后IR區(qū)基因突變產(chǎn)生,中高度耐藥。
【學(xué)位單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2007
【中圖分類】：R759.2

【參考文獻(xiàn)】

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1 陳宏翔,涂亞庭,林能興,黃長征,張麗霞;淋球菌多重耐藥性與mtrR基因點(diǎn)突變的關(guān)系[J];華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2005年05期

2 涂亞庭,劉志香,劉厚君,黃長征,馮愛平,李家文;淋球菌對六種抗菌藥物敏感性的測定[J];醫(yī)藥導(dǎo)報(bào);2001年06期

3 張錫寶,韓爾陽,曹文苓,湯少開;廣州地區(qū)淋球菌耐藥趨勢的研究[J];中國皮膚性病學(xué)雜志;2003年02期

4 潘煒華,廖萬清,李志剛;淋球菌染色體mtrR基因突變對淋球菌多重耐藥性的影響[J];中華皮膚科雜志;1999年03期

5 蘇曉紅,戴秀芹,孫厚華,葉順章;1999-2002年南京地區(qū)淋球菌分離株抗生素敏感性監(jiān)測[J];中華皮膚科雜志;2004年05期

6 陳宏翔;林能興;黃長征;李家文;劉厚君;涂亞庭;;淋病奈瑟菌mtrC膜蛋白基因的克隆和表達(dá)[J];中華皮膚科雜志;2005年11期

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1 陳宏翔;涂亞庭;林能興;黃長征;張麗霞;嚴(yán)小楓;;淋球菌MtrC融合蛋白單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株建立和特性鑒定[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十二次全國皮膚性病學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2006年

本文編號：2812895