發(fā)布時(shí)間：2020-09-05 07:02

　　 目的:黑素瘤是世界范圍內(nèi)死亡率最高的皮膚腫瘤,侵襲轉(zhuǎn)移是黑素瘤死亡率偏高的主要因素。黑素瘤侵襲轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制是一直以來的研究熱點(diǎn)和難點(diǎn)。神經(jīng)引導(dǎo)蛋白NAV2促進(jìn)多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展。但是NAV2在黑素瘤中發(fā)揮的作用尚未有研究闡明。方法:本研究通過對腫瘤相關(guān)數(shù)據(jù)庫的生信分析和免疫組織化學(xué)法分析了NAV2在黑素瘤組織中的表達(dá)水平以及其表達(dá)和臨床預(yù)后的關(guān)系;成功建立過表達(dá)和敲除NAV2的黑素瘤細(xì)胞系,通過GO分析、Pathway分析、劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell實(shí)驗(yàn)、CCK-8實(shí)驗(yàn)、EdU實(shí)驗(yàn)、裸鼠遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和皮下成瘤模型探究NAV2對黑素瘤細(xì)胞生物學(xué)功能的影響;通過建立上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化細(xì)胞模型和拯救實(shí)驗(yàn)、相關(guān)性分析、建立shSNAI2細(xì)胞系,采用qRT-PCR、WB、蛋白質(zhì)互作分析檢測NAV2與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化之間的關(guān)系和GSK-3β/β-catenin-SNAI2通路的變化,以探索NAV2在黑素瘤中潛在機(jī)制。結(jié)果:NAV2在黑素瘤組織中表達(dá)增多,且表達(dá)水平越高黑素瘤患者總生存周期越短。GO分析和Pathway分析結(jié)果顯示NAV2參與了多個(gè)重要生物學(xué)過程,如細(xì)胞遷移、細(xì)胞粘附和細(xì)胞增殖。隨后的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和動物實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)敲除NAV2可抑制黑素瘤增殖、侵襲、遷移和上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的過程。這些研究結(jié)果表明NAV2主要是通過增強(qiáng)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化從而促進(jìn)黑素瘤發(fā)生發(fā)展。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)NAV2和SNAI2這一上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化調(diào)節(jié)分子正相關(guān),SNAI2也和黑素瘤患者預(yù)后不良相關(guān)。敲除SNAI2后可抑制黑素瘤細(xì)胞增殖、遷移和侵襲,間質(zhì)標(biāo)志物(N-cadherin和vimentin)表達(dá)下降,上皮標(biāo)志物(N-cadherin)表達(dá)增加。蛋白質(zhì)互作分析結(jié)果顯示CTNNB1(即β-catenin)是連接度排名第一的樞紐蛋白,并且它和SNAI2具有較高的互作綜合評分。隨后結(jié)果證實(shí)NAV2是通過激活GSK-3β/β-catenin通路上調(diào)SNAI2表達(dá),來促進(jìn)黑素瘤細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化。結(jié)論:總而言之,我們通過一系列實(shí)驗(yàn)證實(shí)NAV2通過GSK-3β/β-catenin通路上調(diào)了SNAI2表達(dá),促進(jìn)黑素瘤細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化,進(jìn)而增強(qiáng)了黑素瘤細(xì)胞增殖、遷移和侵襲能力。我們關(guān)于NAV2相關(guān)的黑素瘤分子機(jī)制的研究可能為黑素瘤靶向治療治療提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
【學(xué)位單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R739.5
【部分圖文】：

華 中 科 技 大 學(xué) 博 士 學(xué) 位 論 文結(jié)果1. 皮膚黑素瘤組織和正常皮膚組織中 NAV2 表達(dá)情況將 TCGA、 GTEx 數(shù)據(jù)庫中數(shù)據(jù)處理后顯示，皮膚黑素瘤組織中 NAV2 表達(dá)水平普遍高于正常皮膚組織（圖 1A）。GSE3189 芯片數(shù)據(jù)結(jié)果與 TCGA、GTEx 結(jié)果一致，且皮膚黑素瘤組織中 NAV2 水平也明顯高于色素痣組織（圖 1B）。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，與原發(fā)性黑素瘤組織相比，NAV2 在轉(zhuǎn)移性黑素瘤組織中表達(dá)增多（圖 1C）。免疫組化染色結(jié)果證實(shí)，皮膚黑素瘤組織較正常皮膚組織中 NAV2 表達(dá)增多（圖 1D）。NAV2在正常組織中免疫組化染色評判得分普遍低于其在黑素瘤組織中的得分（圖 1E）。

華 中 科 技 大 學(xué) 博 士 學(xué) 位 論 文的免疫組化染色評判得分。*表示 P＜0.05,**表示 P＜0.01，***表示 P＜0.001。2. 黑素瘤組織中 NAV2 表達(dá)水平與黑素瘤患者預(yù)后生存分析由于 GSE3189 芯片數(shù)據(jù)缺乏臨床預(yù)后相關(guān)資料，我們僅將 TCGA 和 GSE8401 中NAV2 表達(dá)數(shù)值取中位值，根據(jù)中位值分別將兩個(gè)數(shù)據(jù)中黑素瘤患者分為 NAV2 高表達(dá)組和 NAV2 低表達(dá)組。TCGA 數(shù)據(jù)庫中 NAV2 低表達(dá)組 228 人，NAV2 高表達(dá)組229 人；GSE8401 中 NAV2 低表達(dá)組 34 人，NAV2 高表達(dá)組 35 人。根據(jù) Kaplan-Meier法處理黑素瘤患者 NAV2 表達(dá)和預(yù)后資料，log-rank 檢驗(yàn)后發(fā)現(xiàn)高表達(dá) NAV2 的患者總生存周期短于低表達(dá) NAV2 的黑素瘤患者（圖 2）。

華 中 科 技 大 學(xué) 博 士 學(xué) 位 論 文結(jié)果1. NAV2 及其相關(guān)基因的 GO 分析和 Pathway 分析結(jié)果根據(jù) GSE8401 中 NAV2 及其相關(guān)基因 GO 分析和 Pathway 分析預(yù)測結(jié)果，我們可以得出：NAV2 可能在黑素瘤中參與了許多重要的生物學(xué)過程，例如調(diào)控細(xì)胞粘附過程、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞遷移、調(diào)控細(xì)胞死亡、細(xì)胞增殖和細(xì)胞間連接等（圖 3A）。同時(shí)也和許多信號通路有關(guān)聯(lián)，比如粘附連接信號通路、癌癥相關(guān)信號通路和黑素瘤信號通路等（圖 3B）。

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4 方險(xiǎn)峰;張序心;李家文;;孕激素對無經(jīng)典孕激素核受體黑素瘤細(xì)胞體外生長的影響[J];中國皮膚性病學(xué)雜志;2010年05期

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8 李東升;王瑋蓁;童中勝;張良;高云;黃茜;段逸群;;白藜蘆醇對黑素瘤細(xì)胞周期的影響[J];臨床皮膚科雜志;2009年09期

9 陳雪琴;陳永艷;袁偉;;肢端黑素瘤1例[J];中國皮膚性病學(xué)雜志;2018年07期

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10 涂彩霞;張榮鑫;金宛宛;劉敏;林玲;;葡萄糖胺對小鼠B16黑素瘤細(xì)胞黑素生成的影響[A];2009全國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2009年

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本文編號：2812708