【摘要】： 目的:兒童白癬發(fā)病呈世界范圍性分布,因地理位置、氣候環(huán)境、生活習慣等的不同,發(fā)病率也存在差異。近期研究顯示在歐洲大部分地區(qū)[1-3]和我國內(nèi)陸[4-15](除新疆外)其致病菌種主要為犬小孢子菌。治療犬小孢子菌引起的頭癬,有效藥物包括灰黃霉素、伊曲康唑和特比萘芬等,各種藥物治療療程和療效報道不一[16-19]。為降低傳統(tǒng)藥物的毒副作用,提高療效,國內(nèi)外學者多主張采用聯(lián)合用藥。徐錚等人[20]報道小檗堿與氟康唑、酮康唑、咪康唑等抗真菌藥合用,能不同程度地提高真菌感染的治療效果,并能使抗真菌藥物恢復對耐藥真菌的作用,因此可用作抗真菌藥物的增效劑。已有學者[32,33]報道應用粗提鹽酸小檗堿有抗皮膚癬菌的作用,但應用鹽酸小檗堿純品聯(lián)合抗真菌藥對犬小孢子菌進行體外抗菌活性研究至今尚未見報道。 到目前為止,對于皮膚癬菌的藥敏標準方案和對結果耐藥及敏感標準的界定尚無統(tǒng)一標準[21]。本次實驗參照美國國家臨床和實驗室標準化研究所(CLSI)推薦的《產(chǎn)孢豐富絲狀真菌微量液基稀釋法抗真菌藥敏試驗方案》(M38-A)和相關文獻[21,23-25],采用微量稀釋法測定鹽酸小檗堿單獨及聯(lián)合應用臨床常用的三種抗真菌藥物對從臨床分離的30株犬小孢子菌進行體外藥敏試驗,并對不同濃度聯(lián)合應用的抗真菌活性進行比較,以進一步探討最優(yōu)聯(lián)合方案。 方法: 1菌種分離、培養(yǎng)及鑒定:菌株分離自2007年9月至2008年10月就診于河北醫(yī)科大學第二醫(yī)院皮膚科門診的頭癬患者。用鑷子拔除病發(fā)和周邊鱗屑,若真菌鏡檢陽性,同時做培養(yǎng)。接種于含氯霉素的沙氏葡萄糖蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基,每例標本同時作2管培養(yǎng),(25-27)℃培養(yǎng)(2-4)周;觀察菌落生長情況并涂片鏡檢為皮膚癬菌時,轉種于米飯培養(yǎng)基上,同時做小培養(yǎng)以鑒定菌種。 2體外藥敏實驗 2.1單獨抗真菌藥物藥敏實驗: 用移液器將2倍藥物終濃度抗真菌藥物倍比稀釋液依次加入96孔細胞培養(yǎng)板的每行第1至第10列孔中,每孔加入100uL,第11列和第12列加入RPMI1640培養(yǎng)基100uL。將菌懸液用RPMI-1640液體培養(yǎng)基稀釋50倍,得到(0.4～5 )×104 CFU/ mL的2倍終濃度的菌懸液。96孔細胞培養(yǎng)板的每行第1至第11列孔中加入100uL菌懸液,第12列加入100uL培養(yǎng)基。28℃恒溫培養(yǎng),于第5天判讀結果。 2.2鹽酸小檗堿等量聯(lián)合抗真菌藥物藥敏實驗: 上述濃度的鹽酸小檗堿和抗真菌藥物各50uL加入96孔細胞培養(yǎng)板第1至10列。余操作同單獨藥敏實驗。28℃恒溫培養(yǎng),于第5天進行結果判讀。 2.3鹽酸小檗堿交叉聯(lián)合抗真菌藥物藥敏實驗: 用微量移液器將藥物加入96孔細胞培養(yǎng)板內(nèi),其中第1至第8行的第1列(孔)至第10列(孔),從高濃度到低濃度,依次加入鹽酸小檗堿系列藥液各50μL;第1列至第10列的第1行(孔)至第8行(孔)為抗真菌藥物第3至第10個倍比稀釋濃度的系列藥物各50μL,余同單獨抗真菌藥物藥敏實驗。28℃恒溫培養(yǎng),培養(yǎng)5天判讀結果。 3統(tǒng)計學方法:所得數(shù)據(jù)經(jīng)SPSS11.5軟件進行統(tǒng)計學處理。不同抗真菌藥物MIC值比較經(jīng)秩轉換后用單因素方差分析;鹽酸小檗堿和抗真菌藥物聯(lián)合抗菌FIC值用χ2檢驗;進一步兩兩比較用χ2分割法檢驗。P0.05有統(tǒng)計學意義。 結果: 1四種藥物對犬小孢子菌體外藥敏實驗結果:灰黃霉素、伊曲康唑、特比萘芬、鹽酸小檗堿最低抑菌濃度(MIC)值幾何均數(shù)依次為: 0.9117ug/ml,0.5236ug/ml,0.0050 ug/ml,4.5920ug/ml,四種抗真菌藥物MIC值比較經(jīng)秩轉換后用單因素方差分析, P0.05,差異無統(tǒng)計學意義。(Table.1) 2鹽酸小檗堿分別與灰黃霉素、伊曲康唑、特比萘芬等量聯(lián)合FIC值結果:FIC1所占比例分別為26.7%(8/30)、46.7%(14/30)、43.3%(13/30);1≤FIC2所占比例分別為33.3%(10/30)、20.0%(6/30)、23.3%(7/30);FIC≥2所占比例分別為40.0%(12/30)、33.3%(10/30)、33.3%(10/30),總體比較經(jīng)χ2檢驗,P0.05,差異無統(tǒng)計學意義。(Table.2) 3鹽酸小檗堿和三種抗真菌藥物交叉聯(lián)合抗菌FIC結果: 3.1不同濃度鹽酸小檗堿和灰黃霉素聯(lián)合抗菌結果:鹽酸小檗堿各濃度分別和8ug/ml、4ug/ml、2ug/ml、1ug/ml、0.5ug/ml、0.25ug/ml灰黃霉素交叉聯(lián)合所得FIC1所占比例分別為: 3.3%(1/30)、20.0%(6/30)、40.0%(12/30)、50.0%(15/30)、43.3%(13/30)、50.0%(15/30); 1≤FIC2所占比例分別為: 20.0%(6/30)、36.7%(11/30)、33.3% (10/30)、33.3%(10/30)、40.0%(12/30)、33.3%(10/30);FIC≥2所占比例分別為: 76.7%(23/30)、43.3%(13/30)、26.7%(8/30)、16.7%(5/30)、16.7%(5/30)、16.7%(5/30);經(jīng)χ2檢驗,P 0.05,差異有統(tǒng)計學意義。進一步兩兩比較結果為:灰黃霉素8ug/ml組分別和2ug/ml、1ug/ml、0.5ug/ml、0.25ug/ml組比較P0.0031,差異均有統(tǒng)計學意義。其余任何兩組比較均無統(tǒng)計學差異。(Table.5) 3.2不同濃度鹽酸小檗堿和伊曲康唑聯(lián)合抗菌結果:鹽酸小檗堿各濃度分別和2ug/ml、1ug/ml、0.5ug/ml、0.25ug/ml、0.125ug/ml、0.0625ug/ml伊曲康唑交叉聯(lián)合所得FIC1所占比例分別為: 33.3%(10/30)、50.0%(15/30)、60.0%(18/30)、60.0%(18/30)、53.3%(16/30)、56.7% (17/30);1≤FIC2所占比例分別為: 26.7%(8/30)、36.7%(11/30)、26.7%(8/30)、30.0%(9/30)、33.3%(10/30)、36.7%(11/30);FIC≥2所占比例依次為: 40.0%(12/30)、13.3%(4/30)、13.3%(4/30)、10.0%(3/30)、13.3%(4/30)、6.7%(2/30);經(jīng)χ2檢驗, P0.05,差異無統(tǒng)計學意義。(Table.4) 3.3不同濃度鹽酸小檗堿和特比萘芬聯(lián)合抗菌結果:鹽酸小檗堿各濃度分別和特比萘芬0.04ug/ml0.02ug/ml0.01ug/ml0.005ug/ml0.0025ug/ml0.00125ug/ml0.000625ug/ml0.000313ug/ml濃度組交叉聯(lián)合實驗所得FIC1所占比例依次為10.0%(3/30)、30.0%(9/30)、36.7%(11/30)、40.0%(12/30)、50.0%(15/30)、40.0% (12/30), 33.3%(10/30)、40.0%(12/30);1≤FIC2所占比例依次為26.7%(8/30)、20.0%(6/30)、33.3%(10/30)、30.0%(9/30)、33.3%(10/30)、30.0%(9/30), 36.7%(11/30)、30.0%(9/30); FIC≥2所占比例依次為63.3%(19/30)、50.0%(15/30)、30.0%(9/30)、30.0%(9/30)、16.7%(5/30)、30.0%(9/30), 30.0%(9/30)、30.0%(9/30)。經(jīng)χ2檢驗,P0.05,差異無統(tǒng)計學意義。(Table.3) 結論: 1鹽酸小檗堿、灰黃霉素、特比萘芬、伊曲康唑對臨床分離犬小孢子菌都有很好的體外抗菌活性。 2鹽酸小檗堿聯(lián)合應用灰黃霉素、特比萘芬、伊曲康唑體外有協(xié)同抗犬小孢子菌活性作用,協(xié)同作用與聯(lián)合濃度有關。鹽酸小檗堿與低濃度灰黃霉素、特比萘芬聯(lián)合協(xié)同作用較強。 3鹽酸小檗堿與伊曲康唑聯(lián)合協(xié)同作用最強,鹽酸小檗堿與灰黃霉素聯(lián)合協(xié)同作用最弱。
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2009
【分類號】：R756

【參考文獻】

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本文編號：2807066