發(fā)布時(shí)間：2020-08-28 03:53

【摘要】： 目的:兒童白癬發(fā)病呈世界范圍性分布,因地理位置、氣候環(huán)境、生活習(xí)慣等的不同,發(fā)病率也存在差異。近期研究顯示在歐洲大部分地區(qū)[1-3]和我國(guó)內(nèi)陸[4-15](除新疆外)其致病菌種主要為犬小孢子菌。治療犬小孢子菌引起的頭癬,有效藥物包括灰黃霉素、伊曲康唑和特比萘芬等,各種藥物治療療程和療效報(bào)道不一[16-19]。為降低傳統(tǒng)藥物的毒副作用,提高療效,國(guó)內(nèi)外學(xué)者多主張采用聯(lián)合用藥。徐錚等人[20]報(bào)道小檗堿與氟康唑、酮康唑、咪康唑等抗真菌藥合用,能不同程度地提高真菌感染的治療效果,并能使抗真菌藥物恢復(fù)對(duì)耐藥真菌的作用,因此可用作抗真菌藥物的增效劑。已有學(xué)者[32,33]報(bào)道應(yīng)用粗提鹽酸小檗堿有抗皮膚癬菌的作用,但應(yīng)用鹽酸小檗堿純品聯(lián)合抗真菌藥對(duì)犬小孢子菌進(jìn)行體外抗菌活性研究至今尚未見(jiàn)報(bào)道。 到目前為止,對(duì)于皮膚癬菌的藥敏標(biāo)準(zhǔn)方案和對(duì)結(jié)果耐藥及敏感標(biāo)準(zhǔn)的界定尚無(wú)統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)[21]。本次實(shí)驗(yàn)參照美國(guó)國(guó)家臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化研究所(CLSI)推薦的《產(chǎn)孢豐富絲狀真菌微量液基稀釋法抗真菌藥敏試驗(yàn)方案》(M38-A)和相關(guān)文獻(xiàn)[21,23-25],采用微量稀釋法測(cè)定鹽酸小檗堿單獨(dú)及聯(lián)合應(yīng)用臨床常用的三種抗真菌藥物對(duì)從臨床分離的30株犬小孢子菌進(jìn)行體外藥敏試驗(yàn),并對(duì)不同濃度聯(lián)合應(yīng)用的抗真菌活性進(jìn)行比較,以進(jìn)一步探討最優(yōu)聯(lián)合方案。 方法: 1菌種分離、培養(yǎng)及鑒定:菌株分離自2007年9月至2008年10月就診于河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院皮膚科門(mén)診的頭癬患者。用鑷子拔除病發(fā)和周邊鱗屑,若真菌鏡檢陽(yáng)性,同時(shí)做培養(yǎng)。接種于含氯霉素的沙氏葡萄糖蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基,每例標(biāo)本同時(shí)作2管培養(yǎng),(25-27)℃培養(yǎng)(2-4)周;觀察菌落生長(zhǎng)情況并涂片鏡檢為皮膚癬菌時(shí),轉(zhuǎn)種于米飯培養(yǎng)基上,同時(shí)做小培養(yǎng)以鑒定菌種。 2體外藥敏實(shí)驗(yàn) 2.1單獨(dú)抗真菌藥物藥敏實(shí)驗(yàn): 用移液器將2倍藥物終濃度抗真菌藥物倍比稀釋液依次加入96孔細(xì)胞培養(yǎng)板的每行第1至第10列孔中,每孔加入100uL,第11列和第12列加入RPMI1640培養(yǎng)基100uL。將菌懸液用RPMI-1640液體培養(yǎng)基稀釋50倍,得到(0.4～5 )×104 CFU/ mL的2倍終濃度的菌懸液。96孔細(xì)胞培養(yǎng)板的每行第1至第11列孔中加入100uL菌懸液,第12列加入100uL培養(yǎng)基。28℃恒溫培養(yǎng),于第5天判讀結(jié)果。 2.2鹽酸小檗堿等量聯(lián)合抗真菌藥物藥敏實(shí)驗(yàn): 上述濃度的鹽酸小檗堿和抗真菌藥物各50uL加入96孔細(xì)胞培養(yǎng)板第1至10列。余操作同單獨(dú)藥敏實(shí)驗(yàn)。28℃恒溫培養(yǎng),于第5天進(jìn)行結(jié)果判讀。 2.3鹽酸小檗堿交叉聯(lián)合抗真菌藥物藥敏實(shí)驗(yàn): 用微量移液器將藥物加入96孔細(xì)胞培養(yǎng)板內(nèi),其中第1至第8行的第1列(孔)至第10列(孔),從高濃度到低濃度,依次加入鹽酸小檗堿系列藥液各50μL;第1列至第10列的第1行(孔)至第8行(孔)為抗真菌藥物第3至第10個(gè)倍比稀釋濃度的系列藥物各50μL,余同單獨(dú)抗真菌藥物藥敏實(shí)驗(yàn)。28℃恒溫培養(yǎng),培養(yǎng)5天判讀結(jié)果。 3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:所得數(shù)據(jù)經(jīng)SPSS11.5軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。不同抗真菌藥物MIC值比較經(jīng)秩轉(zhuǎn)換后用單因素方差分析;鹽酸小檗堿和抗真菌藥物聯(lián)合抗菌FIC值用χ2檢驗(yàn);進(jìn)一步兩兩比較用χ2分割法檢驗(yàn)。P0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果: 1四種藥物對(duì)犬小孢子菌體外藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果:灰黃霉素、伊曲康唑、特比萘芬、鹽酸小檗堿最低抑菌濃度(MIC)值幾何均數(shù)依次為: 0.9117ug/ml,0.5236ug/ml,0.0050 ug/ml,4.5920ug/ml,四種抗真菌藥物MIC值比較經(jīng)秩轉(zhuǎn)換后用單因素方差分析, P0.05,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(Table.1) 2鹽酸小檗堿分別與灰黃霉素、伊曲康唑、特比萘芬等量聯(lián)合FIC值結(jié)果:FIC1所占比例分別為26.7%(8/30)、46.7%(14/30)、43.3%(13/30);1≤FIC2所占比例分別為33.3%(10/30)、20.0%(6/30)、23.3%(7/30);FIC≥2所占比例分別為40.0%(12/30)、33.3%(10/30)、33.3%(10/30),總體比較經(jīng)χ2檢驗(yàn),P0.05,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(Table.2) 3鹽酸小檗堿和三種抗真菌藥物交叉聯(lián)合抗菌FIC結(jié)果: 3.1不同濃度鹽酸小檗堿和灰黃霉素聯(lián)合抗菌結(jié)果:鹽酸小檗堿各濃度分別和8ug/ml、4ug/ml、2ug/ml、1ug/ml、0.5ug/ml、0.25ug/ml灰黃霉素交叉聯(lián)合所得FIC1所占比例分別為: 3.3%(1/30)、20.0%(6/30)、40.0%(12/30)、50.0%(15/30)、43.3%(13/30)、50.0%(15/30); 1≤FIC2所占比例分別為: 20.0%(6/30)、36.7%(11/30)、33.3% (10/30)、33.3%(10/30)、40.0%(12/30)、33.3%(10/30);FIC≥2所占比例分別為: 76.7%(23/30)、43.3%(13/30)、26.7%(8/30)、16.7%(5/30)、16.7%(5/30)、16.7%(5/30);經(jīng)χ2檢驗(yàn),P 0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。進(jìn)一步兩兩比較結(jié)果為:灰黃霉素8ug/ml組分別和2ug/ml、1ug/ml、0.5ug/ml、0.25ug/ml組比較P0.0031,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。其余任何兩組比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。(Table.5) 3.2不同濃度鹽酸小檗堿和伊曲康唑聯(lián)合抗菌結(jié)果:鹽酸小檗堿各濃度分別和2ug/ml、1ug/ml、0.5ug/ml、0.25ug/ml、0.125ug/ml、0.0625ug/ml伊曲康唑交叉聯(lián)合所得FIC1所占比例分別為: 33.3%(10/30)、50.0%(15/30)、60.0%(18/30)、60.0%(18/30)、53.3%(16/30)、56.7% (17/30);1≤FIC2所占比例分別為: 26.7%(8/30)、36.7%(11/30)、26.7%(8/30)、30.0%(9/30)、33.3%(10/30)、36.7%(11/30);FIC≥2所占比例依次為: 40.0%(12/30)、13.3%(4/30)、13.3%(4/30)、10.0%(3/30)、13.3%(4/30)、6.7%(2/30);經(jīng)χ2檢驗(yàn), P0.05,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(Table.4) 3.3不同濃度鹽酸小檗堿和特比萘芬聯(lián)合抗菌結(jié)果:鹽酸小檗堿各濃度分別和特比萘芬0.04ug/ml0.02ug/ml0.01ug/ml0.005ug/ml0.0025ug/ml0.00125ug/ml0.000625ug/ml0.000313ug/ml濃度組交叉聯(lián)合實(shí)驗(yàn)所得FIC1所占比例依次為10.0%(3/30)、30.0%(9/30)、36.7%(11/30)、40.0%(12/30)、50.0%(15/30)、40.0% (12/30), 33.3%(10/30)、40.0%(12/30);1≤FIC2所占比例依次為26.7%(8/30)、20.0%(6/30)、33.3%(10/30)、30.0%(9/30)、33.3%(10/30)、30.0%(9/30), 36.7%(11/30)、30.0%(9/30); FIC≥2所占比例依次為63.3%(19/30)、50.0%(15/30)、30.0%(9/30)、30.0%(9/30)、16.7%(5/30)、30.0%(9/30), 30.0%(9/30)、30.0%(9/30)。經(jīng)χ2檢驗(yàn),P0.05,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(Table.3) 結(jié)論: 1鹽酸小檗堿、灰黃霉素、特比萘芬、伊曲康唑?qū)εR床分離犬小孢子菌都有很好的體外抗菌活性。 2鹽酸小檗堿聯(lián)合應(yīng)用灰黃霉素、特比萘芬、伊曲康唑體外有協(xié)同抗犬小孢子菌活性作用,協(xié)同作用與聯(lián)合濃度有關(guān)。鹽酸小檗堿與低濃度灰黃霉素、特比萘芬聯(lián)合協(xié)同作用較強(qiáng)。 3鹽酸小檗堿與伊曲康唑聯(lián)合協(xié)同作用最強(qiáng),鹽酸小檗堿與灰黃霉素聯(lián)合協(xié)同作用最弱。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類(lèi)號(hào)】：R756

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2807066