【摘要】：研究目的 1．探討端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶基因反義寡核苷酸(hTERT-ASODN)對(duì)皮膚T細(xì)胞淋巴瘤(cutaneous T cell lymphoma，CTCL)細(xì)胞株Hut78端粒酶活性、基因表達(dá)及細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。 2．研究紫杉醇對(duì)Hut78細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制及凋亡誘導(dǎo)作用，并探討其誘導(dǎo)凋亡作用的機(jī)制。 3．研究hTERT-ASODN與紫杉醇之間的聯(lián)合抗腫瘤效應(yīng)及hTERT-ASODN能否增加Hut78細(xì)胞對(duì)化療藥物紫杉醇的敏感性。 4．通過(guò)體外轉(zhuǎn)錄法合成hTERT-siRNA，建立體外siRNA(small interfering RNA)的合成制備方法，并對(duì)合成的條件進(jìn)行優(yōu)化，為RNA干擾(RNA interference，RNAi)的進(jìn)一步研究提供技術(shù)平臺(tái)；同時(shí)采用基因轉(zhuǎn)染技術(shù)將siRNA轉(zhuǎn)入Hut78細(xì)胞，觀察端粒酶RNAi效應(yīng)對(duì)端粒酶基因表達(dá)、端粒酶活性及細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用，探索皮膚T細(xì)胞淋巴瘤基因治療的新途徑。 研究方法 1．hTERT寡核苷酸(hTERT-ODNs)的設(shè)計(jì)、合成及細(xì)胞基因轉(zhuǎn)染根據(jù)hTERT基因的cDNA序列分析，設(shè)計(jì)出一條互補(bǔ)于起始密碼區(qū)的18個(gè)堿基長(zhǎng)度的反義片段和相應(yīng)的正義片段，并進(jìn)行全程硫代修飾；采用脂質(zhì)體介導(dǎo)的細(xì)胞基因轉(zhuǎn)染技術(shù)將不同濃度(10μmol／L、20μmol／L、30μmol／L)的寡核苷酸分別導(dǎo)入Hut78細(xì)胞中。 2．檢測(cè)hTERT-ODNs對(duì)Hut78細(xì)胞端粒酶活性、基因表達(dá)及細(xì)胞生長(zhǎng)的影響分別于轉(zhuǎn)染后的不同時(shí)間，應(yīng)用端粒酶重復(fù)序列擴(kuò)增及酶聯(lián)免疫吸附方法
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號(hào)】：R739.5

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本文編號(hào)：2800565