【摘要】：研究目的惡性黑色素瘤（malignant melanoma，MM）是來(lái)源于神經(jīng)嵴的黑色素細(xì)胞在多種因素共同作用下形成的惡性腫瘤。惡性黑色素瘤是一種惡性程度非常高但相對(duì)較少見(jiàn)的腫瘤，在所有的原發(fā)于皮膚的惡性腫瘤中皮膚惡性黑色素瘤只占4％，但其致死率卻占79％。惡性黑色素瘤患者的發(fā)病年齡多在40歲左右。轉(zhuǎn)移性MM患者的中位生存期僅為6-8個(gè)月,5年生存率在5%以下。傳統(tǒng)的手術(shù)、化療、放療三大腫瘤治療方法對(duì)于MM的治療效果并不理想，MM的治療被認(rèn)為是最具挑戰(zhàn)性的惡性腫瘤。1991年Schmidt等發(fā)現(xiàn)了CIK細(xì)胞，它是一群增殖效率氋并具有抗腫瘤活性的異質(zhì)性細(xì)胞，在腫瘤微環(huán)境或病毒感染后，通過(guò)其表面的自然殺傷細(xì)胞受體識(shí)別表達(dá)MICA和MICB的細(xì)胞并進(jìn)行殺傷，目前被廣為應(yīng)用的殺傷活性較強(qiáng)的腫瘤生物治療效應(yīng)細(xì)胞，CIK細(xì)胞是體外擴(kuò)增出的以CD3+CD56+、CD3+CD8+為主的異質(zhì)性細(xì)胞群，該細(xì)胞群是從外周血、骨髓或臍血中分離出的單個(gè)核細(xì)胞，在多種細(xì)胞因子并存的情況下，經(jīng)過(guò)一定時(shí)間培養(yǎng)而獲得的一群免疫活性細(xì)胞，能分泌多種細(xì)胞因子，具有強(qiáng)大的腫瘤殺傷活性。髓系來(lái)源抑制性細(xì)胞（myeloid-derived suppressor cells,MDSC）是骨髓來(lái)源的抑制性細(xì)胞，是一種異質(zhì)的細(xì)胞群，為未成熟的髓系細(xì)胞，多數(shù)存在于正常人的骨髓中，正常情況下MDSC會(huì)分化為樹(shù)突樣細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，而在腫瘤分泌的細(xì)胞因子作用下則分化為未成熟的髓樣細(xì)胞。MDSC在腫瘤患者中外周血中高表達(dá)CD11b和CD33，在惡性腫瘤中發(fā)揮免疫抑制作用。研究表明MDSC主要通過(guò)抑制T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞的功能同時(shí)可以誘導(dǎo)Treg細(xì)胞的產(chǎn)生而產(chǎn)生免疫抑制。通過(guò)研究還發(fā)現(xiàn)，MDSC通過(guò)抑制T細(xì)胞促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)，對(duì)靜止T細(xì)胞無(wú)作用，對(duì)激活的T細(xì)胞則有抑制作用。MDSC可通過(guò)抑制細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(cytotoxic T lymphocyte，CTL)，調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Regulartory T Cells，Treg)，自然殺傷細(xì)胞（natural killer cell，NK）等多種途徑抑制免疫系統(tǒng)，從而促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)，導(dǎo)致免疫治療腫瘤的失敗。因此，通過(guò)CIK細(xì)胞治療逆轉(zhuǎn)MDSC的抑制作用，重建機(jī)體抗腫瘤免疫機(jī)制對(duì)惡性黑色素瘤的治療將會(huì)有至關(guān)重要的意義。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)分析MDSC在惡性黑色素瘤發(fā)病機(jī)制的作用及CIK對(duì)MDSC、多種細(xì)胞因子表達(dá)的影響，目的有以下3點(diǎn)：1、觀察CIK細(xì)胞治療MM患者的臨床療效；2、分析MDSC與MM患者臨床療效的相關(guān)性；3、研究CIK對(duì)MM患者外周血MDSC的影響；這可以為MM患者的治療提供新的思路和方法。方法：入組2009.6月-2011.10月就診于鄭州大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院（原河南省腫瘤醫(yī)院）生物治療科的復(fù)發(fā)、難治性惡性黑色素瘤中國(guó)患者43例（治療組），中位年齡56歲（29歲-78歲），除3例患者乙肝表面抗原陽(yáng)性外，余患者乙肝、、丙肝、艾滋、梅毒均陰性。其中III期患者13例，IV期患者30例，均有可測(cè)量病灶，預(yù)計(jì)生存期≥4個(gè)月；Karnofsky評(píng)分≥60，血常規(guī)正常（白細(xì)胞計(jì)數(shù)≥4.0×109/L，淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)≥0.8×109/L，血紅蛋白≥100g/L，血小板計(jì)數(shù)≥100×109/L），心、肺、肝、腎功能正常，無(wú)嚴(yán)重伴隨疾病。所有入組患者均接受至少4周期CIK細(xì)胞治療。此外入組40例健康志愿者（健康對(duì)照組），均身體健康，既往無(wú)腫瘤相關(guān)疾病，近期無(wú)外傷、感染性疾病。健康對(duì)照組年齡、性別與惡性黑色素瘤組患者相匹配。入組患者和健康志愿者均簽署知情同意書(shū)，并獲得本單位倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。具體步驟如下：1、抽取所有入組惡性黑色素瘤患者CIK細(xì)胞治療前外周血、健康志愿者外周血以及惡性黑色素瘤患者經(jīng)過(guò)CIK細(xì)胞治療至少4周期后的外周血。2、流式細(xì)胞儀分別檢測(cè)各組MDSC表達(dá)量的高低以及細(xì)胞因子的表達(dá)量的高低。3、計(jì)算惡性黑色素瘤患者從隨訪(fǎng)開(kāi)始至隨訪(fǎng)終止的生存期。4、應(yīng)用SPSS17.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，具體方法是應(yīng)用單個(gè)樣本t檢驗(yàn)、獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)、kaplan-meier生存分析處理數(shù)據(jù)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，p＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果：1、惡性黑色素瘤患者CIK細(xì)胞治療前的MDSC（CD11b+CD33++、CD11b+CD33+）水平（7.372±3.4104、51.149±14.1659）顯著高于健康志愿者組（1.05±0.34、13.14±4.99，p＜0.05）。2、惡性黑色素瘤患者經(jīng)CIK細(xì)胞治療后MDSC （CD11b+CD33++、 CD11b+CD33+）水平（4.702±1.8798、42.188±17.0488）與CIK治療前（7.372±3.4104、51.149±14.1659，p＜0.05）比顯著降低，但仍顯著高于健康志愿者組。3、惡性黑色素瘤患者的T、B細(xì)胞免疫功能（4.605±4.8968、2.902±9.2897）顯著低于健康志愿者組（6.078±3.7605、7.710±0.8655，p＜0.05），但經(jīng)CIK細(xì)胞治療后患者的T、B細(xì)胞的免疫功能顯著提高（6.481±7.2186、7.693±9.5124，p＜0.05），與健康志愿者無(wú)明顯差異。4、經(jīng)CIK細(xì)胞治療后的復(fù)發(fā)、難治性惡性黑色素瘤患者的mOS是11.8個(gè)月，顯著高于相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道的轉(zhuǎn)移性惡黑患者中位生存期10.1個(gè)月。5、CIK細(xì)胞治療前細(xì)胞因子（IL-2、IFN-γ）數(shù)值（1698.0±4.7、1470±31.7）低于CIK細(xì)胞治療后的數(shù)值（2460±4.5、1569±34.9，p＜0.05）。結(jié)論：1、CIK細(xì)胞治療MM臨床療效確切，有望成為復(fù)發(fā)、難治性中國(guó)MM患者的新的治療方法；2、CIK細(xì)胞的療效與MDSC有相關(guān)性。3、經(jīng)CIK治療后的MM患者外周血MDSC水平顯著降低，而T、B細(xì)胞的免疫功能顯著提高。
【學(xué)位授予單位】：河南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類(lèi)號(hào)】：R739.5

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 撒亞蓮;華映坤;嚴(yán)新民;賈玲;納智明;宋建新;;惡性實(shí)體瘤患者自體CIK細(xì)胞的體外擴(kuò)增及初步臨床應(yīng)用[J];實(shí)用癌癥雜志;2006年01期

2 柴琴;安東建;;CIK細(xì)胞治療晚期惡性腫瘤療效分析[J];實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué);2010年12期

本文編號(hào)：2792289