【摘要】：背景和目的近年來(lái)人們的脫發(fā)發(fā)病率逐漸增長(zhǎng),嚴(yán)重影響患者的身心健康。治療脫發(fā)方法包括自體毛囊移植術(shù)、口服非那雄胺、外用米諾地爾等,但存在副作用、停藥后脫發(fā)進(jìn)程會(huì)繼續(xù),因此探索新的有效的方法有必要。關(guān)于其實(shí)驗(yàn)研究包括組織工程毛囊重建、毛囊細(xì)胞克隆、毛囊細(xì)胞移植療法等,其中得益于組織工程研究發(fā)展迅猛,毛囊重建在治療脫發(fā)的研究中較有前景。毛囊的重建需要大量及具有生物學(xué)活性的種子細(xì)胞,包含有毛囊干細(xì)胞(hair follicle stem cells,HFSC)及毛乳頭細(xì)胞(dermal papilla cells,DPC)。毛囊是皮膚附屬器的器官,由真皮組分和表皮組分組成。DPC聚集在毛乳頭(DP)內(nèi),DP在毛球部被毛母質(zhì)細(xì)胞等包繞。HFSC與DPC相互作用形成新的毛囊,DPC被認(rèn)為是毛囊形態(tài)發(fā)生和周期性生長(zhǎng)必需的。但DPC在體外經(jīng)過(guò)多次擴(kuò)增培養(yǎng),它的生物學(xué)活性逐漸消失,因此,改善或維持DPC在體外培育擴(kuò)增后的誘導(dǎo)活性,是組織工程毛囊重建中重要一步。外泌體,為來(lái)源細(xì)胞通過(guò)旁分泌細(xì)胞外排形成的囊泡,直徑約為30-150nm,其內(nèi)攜帶有來(lái)源細(xì)胞的DNA、RNA、多種蛋白質(zhì)等物質(zhì),可存在于細(xì)胞培養(yǎng)上清液、血液等。因此我們?cè)诒緦?shí)驗(yàn)中通過(guò)使用低代數(shù)DPC來(lái)源的外泌體培養(yǎng)高代數(shù)DPC,嘗試以其改善DPC的生物學(xué)活性,為毛囊重建提供有效的種子細(xì)胞,為脫發(fā)治療提供新的研究思路。方法:1.鼠觸須墊DPC的分離培養(yǎng)及外泌體的提取與鑒定通過(guò)顯微解剖+酶消化法獲取小鼠觸須墊的DP,觀察其形態(tài)、貼壁和遷出情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代培養(yǎng)擴(kuò)增。收集低代數(shù)DPC的培養(yǎng)上清液并通過(guò)超速離心法提取外泌體,并采用粒徑檢測(cè)、電鏡觀察和外泌體表面標(biāo)志蛋白檢測(cè)鑒定。2.外泌體培養(yǎng)DPC對(duì)其生物學(xué)活性的檢測(cè)通過(guò)添加外泌體培養(yǎng)第3代(P3)和第8代(P8)的DPC,并通過(guò)CCK8、qRT-PCR、WB檢測(cè)其生物學(xué)活性。3.經(jīng)外泌體培養(yǎng)的DPC誘導(dǎo)毛囊再生的研究使用外泌體培養(yǎng)后的DPC及新生鼠的上皮細(xì)胞通過(guò)注射法進(jìn)行毛囊重建,通過(guò)體視鏡、組織切片HE染色觀察情況。結(jié)果:1.通過(guò)顯微解剖+酶消化法能獲取小鼠觸須墊的DP,細(xì)胞正常遷出,擴(kuò)增培養(yǎng)后DPC呈聚集性生長(zhǎng),但隨著傳代次數(shù)的增加,DPC逐漸失去聚集性生長(zhǎng)的特性,且細(xì)胞增殖能力減弱。通過(guò)超速離心法能提取出直徑30-150nm、表達(dá)特異性標(biāo)志蛋白的外泌體。2.添加外泌體培養(yǎng)不同代數(shù)的DPC結(jié)果顯示P3、P8實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞增殖能量較對(duì)照組高,P3、P8實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的相對(duì)特異性標(biāo)記物也較對(duì)照組的表達(dá)水平高。3.使用外泌體培養(yǎng)的P3和P8的DPC用于毛囊重建,可見(jiàn)P3實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組均能誘導(dǎo)毛囊再生,而P8組僅實(shí)驗(yàn)組能誘導(dǎo)毛囊重建,且再生毛囊數(shù)量少。結(jié)論:1.通過(guò)顯微解剖+酶消化法可獲取小鼠觸須墊的DP,并未影響細(xì)胞遷出及DPC的形態(tài)、生長(zhǎng)特性和增殖活性。通過(guò)粒徑檢測(cè)、電鏡觀察和外泌體表面標(biāo)志蛋白檢測(cè)鑒定使用超速離心法可提取出較純豐富的外泌體。2.添加外泌體培養(yǎng)不同代數(shù)的DPC,可部分改善DPC的生物學(xué)活性。3.使用外泌體培養(yǎng)的高代數(shù)DPC仍能誘導(dǎo)毛囊再生。
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：R758.71
【圖文】：

邐第一章邋Ｃ５７ＢＬ／６小鼠觸須墊毛乳頭細(xì)胞來(lái)源的外泌體的提取及鑒定邐逡逑ｍｕｍ邋ｍｍ逡逑圖１－１邋Ｃ５７ＢＬ／６小鼠觸須墊原代毛乳頭培養(yǎng)及觀察。Ａ．顯微解剖＋酶消化法獲得的鼠毛逡逑乳頭（２００Ｘ）；邋Ｂ．原代毛乳頭接種貼壁１天后（４０Ｘ）；邋Ｃ．原代毛乳頭家中貼壁５天后（４０逡逑Ｘ）；邋Ｄ．原代毛乳頭家中貼壁５天后（４０Ｘ）。比例尺＝５００邋ｕｍ。逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１－１邋Ｔｈｅ邋ｉｓｏｌａｔｉｏｎ邋ａｎｄ邋ｃｕｌｔｕｒｅ邋ｏｆ邋ｔｈｅ邋ｐｒｉｍａｒｙ邋ｄｅｒｍａｌ邋ｐａｐｉｌｌａｅ邋ｏｆ邋ｍｏｕｓｅ邋ｔｅｎｔａｃｌｅ邋ｐａｄ邋ｉｎ逡逑ｖｉｔｒｏ．邋Ａ．ｔｈｅ邋ｉｓｏｌａｔｉｏｎ邋ＤＰ，邋ｍａｇｎｉｆｉｃａｔｉｏｎ邋Ｘ２００邋ｔｉｍｅｓ邋；Ｂ．邋ｔｈｅ邋ｃｕｌｔｕｒｅ邋ＤＰ邋ａｆｔｅｒ邋１逡逑ｄａｙ，邋ｍａｇｎｉｆｉｃａｔｉｏｎ邋Ｘ４０邋ｔｉｍｅｓ；邋Ｃ．邋ｔｈｅ邋ｃｕｌｔｕｒｅ邋ＤＰ邋ａｆｔｅｒ邋５邋ｄａｙｓ，邋ｍａｇｎｉｆｉｃａｔｉｏｎ邋Ｘ４０邋ｔｉｍｅｓ；逡逑Ｄ．邋ｔｈｅ邋ｃｕｌｔｕｒｅ邋ＤＰ邋ａｆｔｅｒ邋７邋ｄａｙｓ，邋ｍａｇｎｉｆｉｃａｔｉｏｎ邋Ｘ４０邋ｔｉｍｅｓ，邋ｓｃａｌｅ邋ｂａｒｓ：邋５００叫ｎ．逡逑

■■■■■■逡逑ｆ逡逑■逡逑圖１－２Ｃ５７ＢＬ／６小鼠觸須墊各代數(shù)毛乳頭細(xì)胞體外培養(yǎng)及生長(zhǎng)特性觀察。Ａ．Ｐｌ－ＤＰＣ，可逡逑見(jiàn)明顯的細(xì)胞聚集性生長(zhǎng)；Ｂ．Ｐ３－ＤＰＣ，亦可見(jiàn)細(xì)胞聚集性生長(zhǎng)；Ｃ．Ｐ５－ＤＰＣ，細(xì)胞仍呈聚集性逡逑生長(zhǎng)；Ｄ．Ｐ６－ＤＰＣ，細(xì)胞聚集性生長(zhǎng)現(xiàn)象較低代數(shù)的明顯減少；Ｅ．Ｐ８－ＤＰＣ，無(wú)明顯的細(xì)胞聚集；逡逑Ｆ．Ｐ１０－ＤＰＣ，未見(jiàn)細(xì)胞聚集，且細(xì)胞呈衰老現(xiàn)象。（１００Ｘ）比例尺＝２００邋ｕｍ。逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１－１邋Ｔｈｅ邋ｃｕｌｔｕｒｅ邋ａｎｄ邋ｇｒｏｗｔｈ邋ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ邋ｏｆ邋ｍｏｕｓｅ邋ＤＰＣ邋ｅａｃｈ邋ｐａｓｓａｇｅｓ邋ｉｎ邋ｖｉｔｒｏ．邋Ａ．ＰＩ逡逑１４逡逑

圖１－４外泌體的鑒定

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 南韋肖;張海華;司華哲;李光玉;婁玉杰;;蛋氨酸對(duì)水貂毛乳頭細(xì)胞生長(zhǎng)的影響[J];中國(guó)獸醫(yī)雜志;2017年02期

2 李東海;陳羅娣;齊慶;李勇;查旭山;;補(bǔ)發(fā)I號(hào)方促毛乳頭細(xì)胞增殖及其分子機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究[J];中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2012年31期

3 李明;薛宏斌;楊喜明;;不同濃度胰島素對(duì)毛乳頭細(xì)胞的生物學(xué)作用的研究[J];中國(guó)美容醫(yī)學(xué);2010年08期

4 張國(guó)強(qiáng);程毅;李玲;高順強(qiáng);;胰島素樣生長(zhǎng)因子1和成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子7與毛乳頭細(xì)胞的生長(zhǎng)[J];中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù);2010年50期

5 王繼文;宋志強(qiáng);陳麗軍;鄧永鍵;楊希川;郝飛;;毛乳頭細(xì)胞分離與培養(yǎng)的改良研究[J];中國(guó)麻風(fēng)皮膚病雜志;2006年01期

6 祁少海;劉坡;謝舉臨;徐盈斌;盛蹼義;舒斌;利天增;;胎兒毛乳頭細(xì)胞分化為類(lèi)成骨細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[J];中華顯微外科雜志;2006年01期

7 李宇;李國(guó)強(qiáng);蔡湘娜;林常敏;;微囊化人頭皮毛乳頭細(xì)胞移植誘導(dǎo)毛發(fā)形成[J];中華醫(yī)學(xué)美學(xué)美容雜志;2006年06期

8 潘佩英,程波,姜曉勇,何勤,廖躍;層粘連蛋白、纖維粘連蛋白在體外傳代的毛乳頭細(xì)胞中表達(dá)的研究[J];貴州醫(yī)藥;2005年10期

9 李宇,林常敏,蔡湘娜,李國(guó)強(qiáng);微囊法體外重建人頭皮毛乳頭誘導(dǎo)毛囊再生功能的評(píng)價(jià)[J];中國(guó)臨床康復(fù);2005年06期

10 蔡湘娜;毛乳頭細(xì)胞在毛囊生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中的核心作用[J];中國(guó)美容醫(yī)學(xué);2004年03期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 莊曉晟;范衛(wèi)新;;適合特殊部位毛乳頭細(xì)胞的分離培養(yǎng)法[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十八次全國(guó)皮膚性病學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2012年

2 伍津津;;誘導(dǎo)毛乳頭細(xì)胞凝集性生長(zhǎng)的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十八次全國(guó)皮膚性病學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2012年

3 宋志強(qiáng);郝飛;刁慶春;鐘白玉;楊衛(wèi)兵;麥躍;葉慶佾;;毛乳頭細(xì)胞凝集性生長(zhǎng)差異表達(dá)基因的篩選及分析[A];2003中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2003年

4 鐘白玉;楊衛(wèi)兵;楊希川;郝飛;伍津津;;二步酶消化法分離人頭皮毛乳頭細(xì)胞[A];2003中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2003年

5 白莉雅;孫海濤;呼紅梅;楊麗萍;高淑霞;邵丹;姜文學(xué);;長(zhǎng)毛兔毛乳頭細(xì)胞分離鑒定及生長(zhǎng)特性研究[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)養(yǎng)兔學(xué)分會(huì)第二屆學(xué)術(shù)交流大會(huì)論文集[C];2018年

6 祁少海;劉坡;謝舉臨;徐盈斌;盛蹼義;舒斌;利天增;;胎兒毛乳頭細(xì)胞分化為類(lèi)成骨細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[A];第八屆全國(guó)燒傷外科學(xué)年會(huì)論文匯編[C];2007年

7 李中明;范衛(wèi)新;;采用體外培養(yǎng)毛乳頭細(xì)胞誘導(dǎo)毛囊再生的動(dòng)物模型概況[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十五次全國(guó)皮膚性病學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2009年

8 楊希川;;毛乳頭在毛發(fā)生長(zhǎng)、再生中的重要作用（英文）[A];2015全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2015年

9 �？�;鄭國(guó)璽;朱珠;夏翠;;大鼠毛乳頭細(xì)胞高效分離培養(yǎng)方法及成神經(jīng)分化潛能探索[A];全國(guó)耳鼻咽喉頭頸外科中青年學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2012年

10 鄭敏;呂中法;吳賢杰;;培養(yǎng)毛乳頭細(xì)胞生物學(xué)特性和毛囊重建的研究[A];2006年浙江省整形外科與醫(yī)學(xué)美容學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前9條

1 張獻(xiàn)懷;拔胡須 小毛病危害大健康[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2003年

2 記者 吳仲?lài)?guó);手腕上長(zhǎng)出頭發(fā)來(lái)[N];科技日?qǐng)?bào);2001年

3 蔣曉梅;“吃”出一頭秀發(fā)[N];經(jīng)濟(jì)消息報(bào);2000年

4 浙江省人民醫(yī)院皮膚科主任醫(yī)師 潘衛(wèi)利邋宋黎勝 整理;樹(shù)葉落了防脫發(fā)[N];健康報(bào);2007年

5 山東萊州 郭旭光;青少年白發(fā)咋回事[N];上海中醫(yī)藥報(bào);2013年

6 周璇;克隆法治脫發(fā),有點(diǎn)像種高產(chǎn)田[N];新華每日電訊;2008年

7 呂乃群;禿頂——男人的煩惱[N];衛(wèi)生與生活報(bào);2006年

8 陳晨;美容“他”時(shí)代的誤區(qū)[N];衛(wèi)生與生活報(bào);2007年

9 徐寶德;男人的胡須不該拔[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2006年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 劉秉承;基于仿生策略的新型生物材料制備及其用于毛乳頭細(xì)胞培養(yǎng)和毛囊重建的研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2019年

2 陳宇新;低代毛乳頭細(xì)胞來(lái)源外泌體對(duì)毛囊再生及毛囊周期的影響及其機(jī)制的研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2019年

3 肖順娥;富含血小板血漿對(duì)毛乳頭細(xì)胞生物學(xué)的影響及用于毛囊重建的研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2018年

4 楊希川;毛囊生長(zhǎng)期毛乳頭細(xì)胞差異表達(dá)基因文庫(kù)的構(gòu)建及篩選[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2004年

5 羅洋;人毛乳頭細(xì)胞生長(zhǎng)相關(guān)蛋白生物學(xué)活性的初步研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2004年

6 王繼文;毛乳頭細(xì)胞HSPC016基因的全長(zhǎng)cDNA克隆及功能分析[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2004年

7 楊斌;MRPS17蛋白在人毛囊毛乳頭細(xì)胞中的表達(dá)及其意義[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2006年

8 朱兵;內(nèi)蒙古絨山羊皮膚毛囊毛乳頭細(xì)胞系的建立及其基因表達(dá)譜型的研究[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2014年

9 李美英;大鼠觸須毛乳頭細(xì)胞生物學(xué)特性分析及其促脊髓損傷修復(fù)潛能研究[D];吉林大學(xué);2014年

10 楊亞?wèn)|;Versican基因?qū)γ轭^細(xì)胞凝集性生長(zhǎng)的作用研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2008年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 王瑛敏;SPP1和HGF基因?qū)Π柊退菇q山羊毛乳頭細(xì)胞增殖調(diào)控作用的研究[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2019年

2 陳倩;羥基酪醇調(diào)控自噬緩解毛乳頭細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷機(jī)制研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2019年

3 曹丹霞;外泌體對(duì)毛乳頭細(xì)胞生物學(xué)活性的影響[D];南方醫(yī)科大學(xué);2019年

4 高雯;miR-148a和miR-10a的靶基因驗(yàn)證及在湖羊毛乳頭細(xì)胞中的功能初步研究[D];揚(yáng)州大學(xué);2018年

5 郭曉東;Dlx3基因在阿爾巴斯絨山羊毛乳頭細(xì)胞增殖中的調(diào)控作用[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2018年

6 周雅婷;絨山羊初級(jí)毛囊毛乳頭細(xì)胞減血清培養(yǎng)條件的建立及BIO對(duì)毛乳頭細(xì)胞誘導(dǎo)能力的影響[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2018年

7 劉小敏;脫細(xì)胞真皮三維培養(yǎng)高代毛乳頭細(xì)胞模型的構(gòu)建及評(píng)價(jià)[D];南方醫(yī)科大學(xué);2018年

8 宗興龍;綿羊毛用性能評(píng)價(jià)與毛乳頭細(xì)胞培養(yǎng)[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2018年

9 閆瑋;Lef1和Msx2基因在阿爾巴斯絨山羊毛乳頭細(xì)胞增殖中的調(diào)控作用[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2017年

10 姜衛(wèi);成年鼠背毛毛乳頭細(xì)胞分離方法的建立與評(píng)價(jià)[D];南方醫(yī)科大學(xué);2017年

本文編號(hào)：2772632