【摘要】：背景和目的脫發(fā)是一種多基因疾病,其不僅受機體內(nèi)部基因調(diào)控,同時也受外部環(huán)境因素影響。氧化應(yīng)激在雄激素禿發(fā)疾病機制中扮演著重要的作用,尤其是男性模式禿發(fā)患者。毛乳頭細胞(demal papilla cells,DPCs)具有誘導毛囊形成和調(diào)控毛發(fā)生長關(guān)鍵作用。氧化應(yīng)激中將導致毛乳頭細胞增殖減少以及毛發(fā)生長抑制因子分泌增加。自噬作為真核生物重要的生理過程,能通過降解氧化應(yīng)激損傷蛋白維持機體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定。在脫發(fā)疾病中,自噬通過阻止毛囊干細胞耗竭被認為重要的毛囊細胞保護機制。輕基酪醇(Hydroxytyrosol,HT)是橄欖油主要的抗氧化成分,可激活自噬緩解氧化應(yīng)激炎性損傷。臨床研究表明,地中海飲食有助于降低雄性激素禿發(fā)風險。羥基酪醇作為地中海飲食豐富的來源之一,其是否能保護毛囊細胞促進毛發(fā)生長是個值得探討的環(huán)節(jié)。因此本實驗將觀察羥基酪醇對過氧化氫(H_20_2)處理的DPCs作用。該研究結(jié)果將為脫發(fā)防治提出了新策略,同時也為地中海飲食有益于毛發(fā)生長作出新解釋。方法1.HT對氧化應(yīng)激誘導的小鼠來源DPCs生物學研究原代分離培養(yǎng)鼠觸須墊毛乳頭細胞,取第三代細胞加入不同濃度H_2O_2(50,100,200,400umol/ml)處理后24小時,用CCK-8測量細胞的增殖活性。接下來用100 umol/ml H-2O2處理毛乳頭細胞2小時,DCFH-DA熒光探針檢測細胞內(nèi)ROS表達量。以上判斷H_2O_2處理后氧化應(yīng)激對DPCs損傷。為進一步觀察HT對DPCs保護作用,采用HT 75μM預處理DPCs 30分鐘,使用PCR,ELISA,DCFH-DA技術(shù)檢測HT對H_2O_2處理后的DPCs生物學活性和特性的影響。2.HT對氧化應(yīng)激誘導的小鼠來源DPCs作用機制研究采用 100umol/ml H_2O_2和 100umol/ml H_2O_2+75umol/ml HT處理DPCs 2小時,用Western Blot和PCR檢測細胞自噬相關(guān)蛋白LC3和基因Beclin-1。為進一步明確調(diào)控自噬對于HT保護DPCs作用機制,使用自噬抑制劑氯喹(chloroquine,CQ),再進行相關(guān)的生物學活性和特性的檢測。結(jié)果1.HT對小鼠來源DPCs氧化應(yīng)激中的生物學研究CCK-8結(jié)果顯示,與空白對照組相比,H_2O_2對細胞的活性下降呈濃度依賴性。H_20_2處理后ROS水平以及炎性因子(IL-6,TNF-α)明顯升高,毛發(fā)生長因子(FGF,PDGF,VEGF)分泌降低。由此可見,H_2O_2對DPCs具有細胞毒性。相反,使用HT預處理的DPCs明顯改善了 H_2O_2.對細胞的氧化應(yīng)激損害。2.HT對小鼠來源的DPCs氧化應(yīng)激中機制研究H_2O_2處理后的DPCs明顯降低了細胞LC3和Beclin-1表達,提示H_2O_2抑制自噬的表達。相反HT預處理的DPCs逆轉(zhuǎn)了這一趨勢,明顯增強了自噬的表達。加入自噬抑制劑氯喹,HT所介導的氧化應(yīng)激中DPCs保護作用被明顯逆轉(zhuǎn),進一步論證調(diào)節(jié)自噬是HT保護DPCs免受氧化應(yīng)激損傷的重要機制。結(jié)論HT通過增強自噬保護DPCs,緩解氧化應(yīng)激誘導的炎性損傷,促進毛發(fā)生長因子分泌。
【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R758.71
【圖文】：

果逡逑．邐Ｈ２0２介導的氧化應(yīng)激損傷導致ＤＰＣｓ細胞活性降低逡逑將ＤＰＣｓ暴露于不同濃度的Ｈ２０２加藥處理２４ｈ，ＣＣＫ－８細胞活性結(jié)果顯示：逡逑對照組相比，暴露于不同濃度５０，１００，邋２００和４００邋ｕｍｏｌ／ｍｌＨ２０２后ＤＰＣｓ細逡逑活性明顯降低，并呈濃度依賴性。由此可見，Ｈ２０２對ＤＰＣｓ具有細胞毒性。逡逑（詳見ｆｉｇｕｒｅｌ）為了更好地觀察后續(xù)實驗以及文獻查閱，我們選用了濃度適中逡逑００邋ｕｍｏｌ／ｍｌ邋Ｈ２０２進行后續(xù)實驗。逡逑．邐ＨＴ提高氧化應(yīng)激狀態(tài)下ＤＰＣｓ細胞活性逡逑上述結(jié)果表明，Ｈ２０２處理后ＤＰＣｓ的ＤＰＣｓ生存活性明顯降低。接下來，逡逑用ＨＴ預敷ＤＰＣｓ邋３０ｍｉｎ，然后再加入不同濃度Ｈ２０２，我們可以觀察到不同濃逡逑下ＨＴ＋Ｈ２０２組相對于單獨Ｈ２０２組生存活性明顯升高。據(jù)此，我們初步得出逡逑Ｔ可以緩解ＤＰＣｓ氧化應(yīng)激損傷增強細胞活性。（詳見ｆｉｇｕｒｅｌ－１）逡逑２．0ｎ逡逑

圖１－３使用ＨＴ邋（７５｜ＩＭ）孵育１小時，加入Ｈ２０２刺激２４小時

圖１－４使用ＨＴ邋（７５［ｉＭ）孵育１小時，加入Ｈ２0２刺激２４小時

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本文編號：2765210