【摘要】： 目的:了解山西省晉中地區(qū)淋球菌對4種抗生素的耐藥率及耐藥特點;分析淋球菌對青霉素,頭孢曲松,氟喹諾酮類藥物耐藥的分子機制;淋球菌MtrRCDE排出系統(tǒng)與多重耐藥的關系及其在淋球菌對氟喹諾酮,青霉素和頭孢類抗生素不同程度耐藥中的作用。 方法:(1)采用紙片擴散法對山西晉中地區(qū)30株淋球菌臨床分離株進行青霉素,四環(huán)素,環(huán)丙沙星,頭孢曲松四種藥物敏感性測定。E試驗對30株淋球菌進行四種抗生素的MICs測定。(2)紙片碘量法對產(chǎn)青霉素酶淋球菌(PPNG)進行檢測。(3)PCR法擴增gyrA、parC、penA、ponA、porB基因和mtrR啟動子區(qū)域的13bp回文序列。(4)基因測序法對目的基因進行測序分析。 結果:(1)淋球菌對青霉素、四環(huán)素、環(huán)丙沙星、頭孢曲松的耐藥率分別為93.3%、80.0%、96.7%、0.0%,同時耐2種及以上抗菌藥物的多重耐藥率為83.3%。(2)30株淋球菌中28株對青霉素耐藥,其中β-內(nèi)酰胺酶陽性菌株(PPNG)共13株(46.4%),陰性菌株15株(54.6%)。(3)15株β-內(nèi)酰胺酶陰性,且對青霉素敏感性降低的淋球菌(CMRNG株)在penA基因的鑲嵌狀區(qū)域沒有發(fā)現(xiàn)突變,但在mtrR啟動子區(qū)發(fā)生A/T堿基缺失,還有2株存在penB基因區(qū)的雙位點突變Gly-101-Asp,Ala-102-Asp。5株高水平耐青霉素株(MIC8ug/mL)均存在ponA基因單位點的突變Leu-421-Pro。(4)本次試驗中,我們發(fā)現(xiàn)一株對頭孢曲松低敏且具有多重耐藥表型的菌株,PCR擴增測序后發(fā)現(xiàn)其存在mtrR、ponA、penB及gyrA和parC基因的突變。(5)30株耐氟喹諾酮類藥物淋球菌均存在gyrA基因單或雙位點突變,突變形式主要是Ser—91—Phe和Asp-95-Gly.20株高水平耐氟喹諾酮菌株(MIC大于等于4mg/L)存在gyrA基因雙位點和parC基因單或多位點突變。ParC基因最多見的突變類型是Ser-87-Arg和Tyr-104-Tyr的雙位點突變。(6)20株多重耐藥株中20株的啟動子區(qū)域發(fā)生了突變,并且突變類型一致,在第13個堿基的回文序列中發(fā)生了單個A/T堿基的缺失。 結論:(1)山西晉中地區(qū)淋球菌對環(huán)丙沙星耐藥已經(jīng)很普遍,對青霉素,四環(huán)素的耐藥率保持在較高水平,頭孢曲松仍可作為本地區(qū)治療淋病的首選藥物,研究還發(fā)現(xiàn)本地區(qū)淋球菌的多重耐藥現(xiàn)象十分嚴重。(2)本研究penA、ponA和penB基因突變與染色體介導的青霉素耐藥密切相關,其中ponA基因突變與高水平染色體介導的青霉素耐藥有關。(3)本次實驗表明,淋球菌對頭孢曲松類耐藥與mtrR、penB及gyrA和parC這些基因位點突變相關,與penA基因無關。(4)淋球菌gyrA和parC基因突變在氟喹諾酮類耐藥中起著重要作用,parC基因突變是導致淋球菌對環(huán)丙沙星高水平耐藥的重要原因。(5)mtrR啟動子區(qū)域基因突變引起淋球菌對青霉素、頭孢曲松、氟喹諾酮的低水平耐藥。(6)氟喹諾酮靶酶和MtrRCDE排出系統(tǒng)同時突變是淋球菌對氟喹諾酮類藥物耐藥的重要機制。
【學位授予單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2009
【分類號】：R759.2
【圖文】：

ponA基因1217bp片段凝膠電泳結果

ponA 基因 1217bp 片段凝膠電泳結果M: DNA marker, 第一道：ATCC19424，第 2-6 道：臨床分離株，第 7 道：陰性對照-200bp-500bp-750bp-1000b-2000b

圖 3 ponA 突變株可變區(qū)基因序列(其中箭頭所指為突變堿基)7 6 5 4 3 2 1 M-100bp-200bp-500bp-750bp-1000bp-2000bp

【參考文獻】

相關期刊論文 前2條

1 劉曉斌,任小蓉,劉永仙,田紅英,符兆英,王亞萍;淋球菌43株對環(huán)丙沙星的耐藥性及gyrA和parC基因突變的檢測[J];第四軍醫(yī)大學學報;2004年11期

2 鄒明祥,夏忠弟,陳淑貞,唐銀,劉海連,張國強;淋球菌gyrA和parC基因突變與氟喹諾酮類藥物關系的研究[J];中華皮膚科雜志;2002年03期

本文編號：2765038