【摘要】：背景與目的： miRNA(microRNA)是一類長度為20～25個核苷酸的非編碼小分子RNA，通過影響其靶基因的穩(wěn)定性或抑制其翻譯轉(zhuǎn)錄水平來調(diào)控細(xì)胞的分化、增殖和凋亡。目前現(xiàn)有的研究資料已證明miRNA在某些皮膚病的發(fā)生、發(fā)展起著重要作用，但是對其在特應(yīng)性皮炎發(fā)病機(jī)制中所起作用的研究很少。本課題采用Exiqon公司的miRCURYLNATM芯片技術(shù)篩選特應(yīng)性皮炎(Atopic dermatitis，AD)患者和正常人血漿差異表達(dá)的miRNA；然后通過RT-qPCR驗(yàn)證芯片檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，尋找與AD相關(guān)的血漿中特異性miRNA，冀望作為AD疾病診斷的標(biāo)志物，研究結(jié)果為探明miRNAs調(diào)控特應(yīng)性皮炎發(fā)生的機(jī)制，及今后研究其臨床診斷、病情評估、治療評價提供理論指導(dǎo)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 材料與方法： 收集9例AD患者及6例正常人外周靜脈血5ml，無酶污染條件下提取總RNA，利用Exiqon公司的miRCUPY LNATM基因芯片對血漿中的miRNA進(jìn)行篩查、分析。對特應(yīng)性皮炎中的差異表達(dá)miRNA進(jìn)行篩選，初步建立特應(yīng)性皮炎患者miRNA異常表達(dá)譜，找出明顯上調(diào)或下調(diào)表達(dá)的miRNA進(jìn)行進(jìn)一步的PCR驗(yàn)證和分析。 結(jié)果： 1．在特應(yīng)性皮炎患者血漿中篩選出上調(diào)表達(dá)的miRNA基因105個，下調(diào)表達(dá)的miRNA基因225個。 2．其中Fold chang上調(diào)大于2倍的為61個，上調(diào)大于3倍小于5倍為17個，上調(diào)大于5倍的為5個; Fold chang下調(diào)小于0.5倍的為170個（P＜0.05）。 結(jié)論： 1．初步建立特應(yīng)性皮炎患者血漿中的miRNA基因的異常表達(dá)譜，與正常健康人比較，初步篩選出61個上調(diào)表達(dá)的miRNA基因和170個下調(diào)表達(dá)的miRNA基因。 2．通過查閱文獻(xiàn)結(jié)合本研究實(shí)驗(yàn)，最后選取在特應(yīng)性皮炎血漿中顯著性差異表達(dá)的miR-142-5p、miR-1237-3p和miR-4275、miR-5047進(jìn)行后續(xù)RT-qPCR驗(yàn)證、分析。
【學(xué)位授予單位】：瀘州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R751
【圖文】：

樣品 1、2 的電泳圖RNA electrophoresis of example1 anp ND-1000 驗(yàn)證的 RNA 質(zhì)量與數(shù)量報(bào)告單le 1 sample quality control data260/230atioConc(ng/μl)Volum(μl)Quantity(ng)QCpas．65 40．35 10 403．50 pas．76 49．13 10 490．31 pas．84 41．07 10 410．70 pas．70 64．45 10 644．50 pas．65 32．66 10 326．60 pas．76 46．66 10 466．60 pas．68 47．28 10 472．80 pas

45a1 1．78 1．77 43．28 10 432．80 pass47a1 1．82 1．81 45．09 10 450．90 pass2 miRNA 的數(shù)據(jù)分析首先我們選取一批次實(shí)驗(yàn)中在每張芯片上修正值都>=30 的非control 探針做標(biāo)準(zhǔn)化，以這部分探針中值（median）作為標(biāo)準(zhǔn)化因子對整張芯片的點(diǎn)做標(biāo)準(zhǔn)化處理，即各個 miRNA 修正值/median＝Normalized Data（標(biāo)準(zhǔn)值）。

23圖 3 樣品散點(diǎn)圖Fig 3 scatter-plots備注：scatter plot 以圖形方式，表明了 2 樣本之間 miRNA 表達(dá)差別。2 樣本差異越大，其散點(diǎn)圖距離 X=Y 這條直線越遠(yuǎn)，分散程度越大。

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