【摘要】：目的:血管內(nèi)皮生長因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)又名血管通透因子(Vascular permeability factor,VPF),主要由角質(zhì)形成細胞(keratinocyte,KC)產(chǎn)生,是目前發(fā)現(xiàn)的作用最強、特異性最高的促血管生成因子,具有血管生成、增加血管通透性的活性,對血管內(nèi)皮細胞具有特異性。VEGF主要有VEGF121、VEGF145、VEGF148、VEGF165、VEGF165b、VEGF183、VEGF189、VEGF206,8種亞型。正常成人皮膚組織中VEGF有維持真皮原有微血管密度和維持血管運輸營養(yǎng)物質(zhì)所需通透性等自身穩(wěn)定方面的生理學作用。許多炎癥性皮膚病有共同的病理特征:真皮乳頭層微血管增生、擴張且管壁增厚。有日本學者研究發(fā)現(xiàn),異位性皮炎的皮損中,血管內(nèi)皮生長因子的水平較非皮損區(qū)及健康人的皮膚明顯增高,亞型分析顯示,主要是VEGF 121和VEGF 165,因此考慮VEGF 121和VEGF 165和異位性皮炎的發(fā)病有關(guān),但作用機制不明。 本實驗旨在研究不同亞型血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)是通過激活何種生物信號轉(zhuǎn)導途徑而引起生物學效應,進一步闡明血管內(nèi)皮生長因子與異位性皮炎的發(fā)生發(fā)展的關(guān)系,為異位性皮炎的臨床預防和治療的新靶點提供理論依據(jù),也為最終闡明異位性皮炎等多種疾病的發(fā)生和發(fā)展的分子機制奠定基礎。 方法: 1體外培養(yǎng)人類臍靜脈血管內(nèi)皮細胞。 2 VEGF165或VEGF121對血管內(nèi)皮細胞分別刺激,不同時間后對細胞進行回收。 3采用蛋白印跡Western Blot方法對血管內(nèi)皮細胞中的FAK信號轉(zhuǎn)導通路中的FAK和磷酸化FAK的相對定量檢測,分析其磷酸化FAK陽性表達變化。 4同樣采用蛋白印跡Western Blot方法,對Akt信號轉(zhuǎn)導通路中Akt和磷酸化Akt進行檢測,分析磷酸化的Akt陽性表達及其變化。 5運用統(tǒng)計軟件SPSS13.0對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析。 結(jié)果: 1 VEGF121及VEGF165促人臍靜脈內(nèi)皮細胞FAK磷酸化的能力分析 1.1VEGF121促人臍靜脈內(nèi)皮細胞FAK磷酸化能力的分析經(jīng)VEGF121刺激的血管內(nèi)皮細胞,磷酸化FAK占總FAK的百分比在刺激30分鐘內(nèi)變化有時間依賴性,隨時間變化迅速升高,5分鐘時為0.893±0.048,30分鐘時達峰值1.192±0.151,60分鐘時水平已下降為0.966±0.069,不同刺激時相之間磷酸化FAK的百分比之間存顯著差異, P0.05。 1.2VEGF165促人臍靜脈內(nèi)皮細胞FAK磷酸化能力的分析經(jīng)VEGF165刺激的血管內(nèi)皮細胞,磷酸化FAK占總FAK的百分比在刺激10分鐘內(nèi)變化有時間依賴性,隨時間變化逐漸升高,5分鐘時為0.469±0.042,10分鐘時達峰值1.015±0.120,不同刺激時相之間磷酸化FAK的百分比之間存顯著差異, P0.05。 1.3VEGF121和VEGF165促人臍靜脈內(nèi)皮細胞FAK磷酸化能力的比較分析 VEGF121與VEGF165相比,磷酸化FAK百分比的變化趨勢在統(tǒng)計學上存在顯著差異(P0.05),經(jīng)VEGF121刺激的血管內(nèi)皮細胞FAK迅速磷酸化,且磷酸化FAK的含量較高。 2 VEGF121及VEGF165促人臍靜脈內(nèi)皮細胞Akt磷酸化的能力分析 2.1 VEGF121促人臍靜脈內(nèi)皮細胞Akt磷酸化能力的分析經(jīng)VEGF121刺激的血管內(nèi)皮細胞,磷酸化Akt占總Akt的百分比隨時間變化明顯改變,經(jīng)統(tǒng)計學分析不同刺激時相之間磷酸化Akt的百分比有顯著差異,P0.05。 2.2 VEGF165促人臍靜脈內(nèi)皮細胞Akt磷酸化能力的分析經(jīng)VEGF165刺激的血管內(nèi)皮細胞,磷酸化Akt占總Akt的百分比隨時間變化明顯改變,經(jīng)統(tǒng)計學分析不同刺激時相之間磷酸化Akt的百分比有顯著差異,P0.05。 2.3VEGF121和VEGF165促人臍靜脈內(nèi)皮細胞Akt磷酸化能力的比較分析 VEGF121與VEGF165相比,磷酸化Akt百分比的變化趨勢在統(tǒng)計學上無顯著差異(P0.05)。(以上結(jié)論滿足協(xié)方差矩陣對稱條件,P0.05) 結(jié)論: 1 VEGF 121和VEGF 165均能激活FAK信號傳導通路,但是VEGF 121較VEGF165的作用明顯且迅速; 2 VEGF 121和VEGF 165均能激活Akt信號傳導通路,但兩者就該能力而言無顯著差異; 3結(jié)合以往研究得出:VEGF 121之所以較VEGF165易引起血管通透性增加,很可能是其通過優(yōu)勢促進FAK及Src信號通路蛋白的磷酸化而實現(xiàn)的。
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R758.2

【共引文獻】

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8 劉玲;可溶性血管內(nèi)皮生長因子受體-1與子癇前期發(fā)病關(guān)系的研究[D];青島大學;2006年

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10 梁雄安;血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）及受體flt-1和KDR在SLE皮損中的表達及意義[D];山西醫(yī)科大學;2008年

本文編號：2745439