發(fā)布時(shí)間：2020-07-06 18:31

【摘要】： 第一部分Toll樣受體2及相關(guān)因子在銀屑病患者皮損中的表達(dá)目的:探討TLR2、信號(hào)途徑下游分子NF-κBp65,以及可能的效應(yīng)分子TGF-α在銀屑病患者皮損中的表達(dá)及其與銀屑病嚴(yán)重程度的關(guān)系。方法:采用EliVision免疫組化法檢測(cè)40例銀屑病患者進(jìn)行期皮損、11例非皮損區(qū)及15例正常人皮膚中TLR2、NF-κBp65、TGF-α的表達(dá),對(duì)其在皮損中的表達(dá)進(jìn)行相關(guān)性分析,并將結(jié)果與PASI評(píng)分進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果:與正常人皮膚及銀屑病患者非皮損區(qū)相比,銀屑病患者皮損表皮中TLR2、NF-κBp65、TGF-α的表達(dá)明顯上調(diào),而非皮損區(qū)TLR2的表達(dá)也高于正常人皮膚,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。銀屑病患者皮損表皮中TLR2、NF-κBp65的表達(dá)水平與PASI評(píng)分之間存在正相關(guān)(P＜0.05)。銀屑病患者皮損表皮中TLR2與NF-κBp65、TLR2與TGF-α、NF-κBp65與TGF-α表達(dá)水平之間均存在正相關(guān)(P＜0.05)。結(jié)論:TLR2、NF-κBp65、TGF-α在銀屑病中表達(dá)異常,可能共同參與了銀屑病的發(fā)病過(guò)程。 第二部分Toll樣受體2對(duì)人角質(zhì)形成細(xì)胞增殖的影響 目的:探討TLR2對(duì)體外培養(yǎng)的人角質(zhì)形成細(xì)胞增殖的影響。方法:應(yīng)用天然配體肽聚糖(PGN)體外活化人角質(zhì)形成細(xì)胞TLR2,用MTT法檢測(cè)PGN對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞體外增殖的影響,確定最適作用濃度;用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法和Western-blot方法分別檢測(cè)角質(zhì)形成細(xì)胞TLR2、細(xì)胞增殖標(biāo)記Ki67基因轉(zhuǎn)錄和蛋白的表達(dá)水平;采用抗體封閉實(shí)驗(yàn)分析封閉TLR2對(duì)PGN誘導(dǎo)角質(zhì)形成細(xì)胞表達(dá)TLR2、Ki67的影響。結(jié)果:不同濃度的PGN處理角質(zhì)形成細(xì)胞后24小時(shí),在1.25、2.5、5ug/mL的濃度下細(xì)胞出現(xiàn)明顯增殖(P＜0.05)。1.25ug/mL PGN作用后12小時(shí)和24小時(shí)角質(zhì)形成細(xì)胞TLR2 mRNA的表達(dá)明顯增高,24小時(shí)和48小時(shí)Ki67 mRNA的表達(dá)明顯增高;1.25、2.5和5ug/mL PGN作用后24小時(shí),各濃度組角質(zhì)形成細(xì)胞TLR2 mRNA和蛋白的表達(dá)均增加,其中1.25和2.5ug/mL濃度下Ki67 mRNA的表達(dá)明顯增加,各濃度組Ki67蛋白合成均增加(P＜0.05)。以抗人TLR2單克隆阻斷性抗體封閉TLR2后,PGN誘導(dǎo)的角質(zhì)形成細(xì)胞TLR2、Ki67 mRNA和蛋白表達(dá)的上調(diào)均受到明顯抑制(P＜0.05)。結(jié)論:角質(zhì)形成細(xì)胞TLR2信號(hào)途徑的活化可促進(jìn)角質(zhì)形成細(xì)胞的增殖,這一過(guò)程可能參與了銀屑病的發(fā)病。 第三部分Toll樣受體2在人角質(zhì)形成細(xì)胞增殖中的作用機(jī)制探討 目的:研究TLR2對(duì)體外培養(yǎng)的人角質(zhì)形成細(xì)胞NF-κB活化及TGF-α表達(dá)的影響,以探討TLR2在人角質(zhì)形成細(xì)胞增殖中的可能作用機(jī)制。方法:應(yīng)用天然配體肽聚糖(PGN)體外活化人角質(zhì)形成細(xì)胞TLR2,用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)角質(zhì)形成細(xì)胞NF-κBp65、TGF-αmRNA的表達(dá),用Western-blot方法檢測(cè)核內(nèi)NF-κBp65和細(xì)胞TGF-α蛋白的表達(dá);采用抗體封閉實(shí)驗(yàn)分析封閉TLR2對(duì)PGN誘導(dǎo)角質(zhì)形成細(xì)胞NF-κB活化和TGF-α表達(dá)的影響。結(jié)果:1.25ug/mLPGN作用后24小時(shí)角質(zhì)形成細(xì)胞NF-κBp65 mRNA的表達(dá)明顯增高,6小時(shí)和24小時(shí)TGF-αmRNA的表達(dá)明顯增高;1.25、2.5和5ug/mL PGN作用后24小時(shí),各濃度組角質(zhì)形成細(xì)胞核內(nèi)NF-κBp65蛋白合成均增加,其中1.25和5ug/mL濃度下TGF-αmRNA和蛋白表達(dá)均明顯增加(P＜0.05)。以抗人TLR2單克隆阻斷性抗體封閉TLR2后,PGN誘導(dǎo)的角質(zhì)形成細(xì)胞NF-κB活化及TGF-α表達(dá)上調(diào)均受到明顯抑制(P＜0.05)。結(jié)論:角質(zhì)形成細(xì)胞TLR2經(jīng)PGN誘導(dǎo)活化后,可能通過(guò)促進(jìn)NF-κB活化及TGF-α表達(dá)而導(dǎo)致角質(zhì)形成細(xì)胞的異常增殖。
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R758.63
【圖文】：

飛;戳/，:·價(jià)矛卜氣產(chǎn)愉獷才聲氣圖1一 1TLRZ在正常皮膚、銀屑病非皮損區(qū)和皮損區(qū)表皮中的表達(dá)(EliVision法 X100)a:TLRZ在正常皮膚表皮角質(zhì)形成細(xì)胞中的弱表達(dá);b:TLRZ在銀屑病外觀正常的非皮損區(qū)表皮中基底層和表皮上層表達(dá)上調(diào);。:TLRZ在銀屑病皮損區(qū)表皮全層旱強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)

嘴‘飛圖1一 2NF一 KBp65在正常皮膚、銀屑病非皮損區(qū)和皮損區(qū)表皮中的表達(dá)(Elivision法X100)a:NF一 KBP65在正常皮膚表皮角質(zhì)形成細(xì)胞中的弱表達(dá);b:NF一 KBp65在銀屑病外觀正常的非皮損區(qū)表皮中基底層和棘層細(xì)胞中表達(dá)增加;C:NF一 KBp65在銀屑病皮損區(qū)表皮全層表達(dá)，胞核可見(jiàn)較深的表達(dá)

嘴‘飛圖1一 2NF一 KBp65在正常皮膚、銀屑病非皮損區(qū)和皮損區(qū)表皮中的表達(dá)(Elivision法X100)a:NF一 KBP65在正常皮膚表皮角質(zhì)形成細(xì)胞中的弱表達(dá);b:NF一 KBp65在銀屑病外觀正常的非皮損區(qū)表皮中基底層和棘層細(xì)胞中表達(dá)增加;C:NF一 KBp65在銀屑病皮損區(qū)表皮全層表達(dá)，胞核可見(jiàn)較深的表達(dá)

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前2條

1 閔倩;TLR2在口腔粘膜下纖維性變組織中表達(dá)的研究[D];中南大學(xué);2011年

2 鄭景文;消銀洗劑治療尋常型銀屑病的臨床研究及實(shí)驗(yàn)研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2013年

本文編號(hào)：2743980