【摘要】：目的:通過細(xì)胞實驗過表達(dá)或者抑制MicroRNA-203a-5p的表達(dá),分析它對HaCaT細(xì)胞中IL-6、TNF-α及IL-1β等細(xì)胞因子的影響,鑒定miR-203a-5p對三者是否存在靶向調(diào)控作用。再結(jié)合特應(yīng)性皮炎患者皮屑中miR-203a-5p、IL-6、TNF-α及IL-1β的表達(dá)情況進(jìn)一步驗證它們之間的相互關(guān)系,并分析其在特應(yīng)性皮炎發(fā)病機(jī)制中的作用,為以miR-203a-5p及其下游靶基因為主的靶向治療提供一定的理論依據(jù),為特應(yīng)性皮炎的治療研究提供新思路。方法:1.通過體外培養(yǎng)HaCaT細(xì)胞系,分為4組進(jìn)行轉(zhuǎn)染:miR-203a-5p模擬物組(mimics組)、模擬物陰性對照組(mimics NC組)、miR-203a-5p抑制物組(inhibitor組)、抑制物陰性對照組(inhibitor NC組)。轉(zhuǎn)染后采用qPCR方法進(jìn)一步檢測miR-203a-5p及各組IL-6、TNF-α及I L-1β的表達(dá)水平。2.臨床收集特應(yīng)性皮炎患者及正常對照組皮屑組織,經(jīng)過速凍后液氮研磨,Trizol法提取兩組皮屑的總RNA,用qPCR方法檢測兩組皮屑中miR-203a-5p、IL-6、TNF-α及IL-1β的表達(dá)水平。結(jié)果:1.細(xì)胞實驗情況將miR-203a-5p模擬物組、抑制物組及兩組陰性對照組等4組樣品共轉(zhuǎn)染HaCat細(xì)胞。結(jié)果顯示:轉(zhuǎn)染miR-203a-5p mimics后,與其陰性對照組相比,miR-203a-5p的表達(dá)水平明顯增高(P0.01),證明轉(zhuǎn)染成功。HaCat細(xì)胞中TNF-α及IL-6的mRNA表達(dá)水平與對照組相比明顯降低(P0.01),IL-1βmRNA表達(dá)水平增高(P0.05)。轉(zhuǎn)染miR-203a-5p inhibitor后,HaCat細(xì)胞中TNF-αmRNA表達(dá)水平增高,I L-6及IL-1β的mRNA表達(dá)水平降低(P0.05)。2.臨床標(biāo)本檢測情況qPCR檢測結(jié)果表明,特應(yīng)性皮炎患者的皮屑中mi R-203a-5p、IL-6、TNF-α的mRNA表達(dá)量高于正常對照組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01),IL-1β表達(dá)量略高于正常對照組水平,差異不具統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);再進(jìn)行Spearman相關(guān)性分析時發(fā)現(xiàn)miR-203a-5p與TNF-α、IL-6、IL-1β的表達(dá)量無相關(guān)性(r分別0.26、0.15、0.18,P0.05)結(jié)論:(1)AD患者皮屑中miR-203a-5p、TNF-α、IL-6及IL-1β的mRNA表達(dá)增加,提示miR-203a-5p、TNF-α、IL-6及IL-1β共同參與了AD的發(fā)生及發(fā)展。(2)在HaCat細(xì)胞中miR-203a-5p可以抑制TNF-α、IL-6的表達(dá),促進(jìn)IL-1β的表達(dá)。但在對AD患者皮屑的研究中,TNF-α、IL-6、IL-1β異常表達(dá)增高,未發(fā)現(xiàn)miR-203a-5P對TNF-α、IL-6、IL-1β有效的直接的調(diào)控作用,其他的調(diào)控方式尚未可知。推測其原因可能是由于特應(yīng)性皮炎時表皮屏障功能障礙或者表皮重塑,在炎癥反應(yīng)階段,miR-203a-5P的調(diào)控作用被改變或抑制。(3)本研究暫通過在細(xì)胞實驗水平上驗證了miR-203a-5P對TNF-α、IL-6、IL-1β的靶向調(diào)控作用,同時結(jié)合AD皮屑組織及正常皮膚組織中四者的表達(dá)情況,初步探討了miR-203a-5P在AD的發(fā)生及發(fā)展中可能存在的發(fā)病機(jī)制及調(diào)控通路,在基因水平研究了miR-203a-5P對TNF-α、IL-6、IL-1β的調(diào)控作用,從miRNA-通路-炎癥因子-疾病的相關(guān)角度揭示AD可能的發(fā)病機(jī)制,但尚未對特異性miRNAs與其相關(guān)易感基因調(diào)控功能、細(xì)胞因子等方面進(jìn)行深入的研究,下一步我們將進(jìn)一步從蛋白水平研究他們的表達(dá)及其相互間的作用,對miR-203a-5P在AD發(fā)病中的分子機(jī)制作用及涉及的細(xì)胞通路進(jìn)行更為深入的研究,探討miR-203a-5P作為AD的診斷、治療和預(yù)后分析的靶點及整個網(wǎng)絡(luò)調(diào)控系統(tǒng)在AD的發(fā)病、病情演變形成過程中所扮演的角色,為AD的靶向治療及今后高效抑制劑的設(shè)計提供一定理論依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：廣西中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R758.2
【圖文】：

3.2 miR-203a-5p 對 TNF-α、IL-6、及 IL-1βmRNA 的表達(dá)以 HaCat 細(xì)胞為模型，分別加入 miR-203a-5p mimicsp inhibitor 及其無關(guān)序列的陰性對照組，miR-203a-5p 對6、及 IL-1βmRNA 的表達(dá)水平的影響見圖 7-10。

轉(zhuǎn)染后 miR-203a-5p 的相對表達(dá)水平加入 miR-203a-5p mimics 后，與 NC 組相比較，HaCat 03a-5p 的表達(dá)水平增高（P<0.01），加入 miR-203a-5p inh與 NC 組相比較，HaCat 細(xì)胞中 miR-203a-5p 的表達(dá)水平降低

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本文編號：2741989