【摘要】： 研究目的: 1.研究一株野生型B16-F10細(xì)胞單克隆化后,獲得的亞克隆細(xì)胞株的生物學(xué)特性(細(xì)胞形態(tài)、增殖曲線、細(xì)胞周期、成瘤性等)與親代野生型B16-F10細(xì)胞相比的異同。 2.與空間誘變的結(jié)果做比較,研究空間環(huán)境對(duì)黑色素瘤B16-F10細(xì)胞的生物學(xué)特性產(chǎn)生的影響。 研究方法: 將野生型B16-F10細(xì)胞用有限稀釋法進(jìn)行單克隆,共獲得104株亞克隆細(xì)胞株。隨機(jī)選取十株亞單克隆細(xì)胞株作為實(shí)驗(yàn)組,編號(hào)為2#、3#、9#、32#、45#、50#、69#、74#、83#和99#,對(duì)照組為親代野生型B16-F10細(xì)胞。 1.體外實(shí)驗(yàn) 利用倒置相差顯微鏡(Phasecontrast Microscope,PCM)觀察對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組B16-F10細(xì)胞形態(tài);通過(guò)四甲基偶氮唑鹽[3(4,5dimethylthiazol2y1)2,5diphenyltetrazolium bromide,MTT]比色法檢測(cè)對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組B16-F10細(xì)胞增殖情況;利用流式細(xì)胞術(shù)(Flow Cytometry,FCM)檢測(cè)對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組B16-F10細(xì)胞周期情況。 2.體內(nèi)實(shí)驗(yàn) 將對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組B16-F10細(xì)胞接種于C57BL/6J小鼠,每株細(xì)胞接種20只小鼠,10只為1組,共分2組,其中1組接種于腹腔,觀察荷瘤小鼠生存期,另1組接種于小鼠右側(cè)胸脅部皮下,記錄腫瘤組織直徑生長(zhǎng)至3mm時(shí)所需時(shí)間,記為出瘤時(shí)間,待小鼠生長(zhǎng)至2周時(shí),處死,分離荷瘤小鼠腫瘤組織、胸腺和脾臟。稱重荷瘤小鼠腫瘤組織,觀察對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組B16-F10細(xì)胞的成瘤性;稱重荷瘤小鼠的胸腺和脾臟,計(jì)算胸腺系數(shù)和脾系數(shù),觀察小鼠免疫系統(tǒng)的變化;利用H.E染色法進(jìn)行瘤體的病理學(xué)檢測(cè)。 3.分析結(jié)果與空間誘變的結(jié)果做比較 研究結(jié)果: 1.體外實(shí)驗(yàn): 光學(xué)倒置顯微鏡下,對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞株分布均勻,大多呈現(xiàn)不規(guī)則型。與對(duì)照組相比,實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞株的形態(tài)未見(jiàn)明顯差異。MTT檢測(cè)結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞株的增殖速度呈多向性變異。09#、32#細(xì)胞株增殖速率均快于對(duì)照組,69#、02#和50#細(xì)胞株增殖速率均慢于對(duì)照組,其他實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞株的生長(zhǎng)趨勢(shì)與對(duì)照組基本一致。FCM檢測(cè)結(jié)果表明:與對(duì)照組相比,32#細(xì)胞株G0/G1期減少不明顯,而09#細(xì)胞株G0/G1期細(xì)胞明顯減少,S期細(xì)胞增多,69#、02#和50#細(xì)胞株G0/G1期明顯增多,G2/M期、S期減少,與各對(duì)應(yīng)細(xì)胞增殖速度趨勢(shì)一致。 2.體內(nèi)實(shí)驗(yàn) 與對(duì)照組相比,69#、50#、02#、83#細(xì)胞株所致荷瘤小鼠的出瘤時(shí)間延長(zhǎng)、生存時(shí)間延長(zhǎng)、腫瘤組織重量明顯減少、脾系數(shù)明顯增加;09#、32#細(xì)胞株所致荷瘤小鼠的腫瘤組織重量明顯增加、生存時(shí)間明顯縮短、胸腺系數(shù)和脾系數(shù)減小,其它實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞株所致荷瘤小鼠未見(jiàn)明顯差異。腫瘤組織切片H.E染色結(jié)果顯示:對(duì)照組和32#細(xì)胞株所致荷瘤小鼠的腫瘤組織壞死組織較多,69#和50#腫瘤組織內(nèi)壞死組織較少。 3.篩選出一株細(xì)胞增殖速度明顯減慢,出瘤時(shí)間延長(zhǎng),瘤體重量減小,生存時(shí)間延長(zhǎng),編號(hào)為69#。此株成瘤性減弱的細(xì)胞與空間誘變獲得的免疫原性增強(qiáng)的細(xì)胞株做比較,研究空間環(huán)境對(duì)黑色素瘤細(xì)胞的影響。 4.與對(duì)照組69#細(xì)胞相比,空間組11#細(xì)胞形態(tài)有較大改變,細(xì)胞體積增大,突起增加。MTT檢測(cè)結(jié)果顯示,空間組11#細(xì)胞增殖速度明顯減慢。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,空間組11#細(xì)胞荷瘤小鼠的瘤體重量明顯減小、生存期延長(zhǎng)。腫瘤組織切片H.E染色結(jié)果顯示,空間組11#細(xì)胞腫瘤組織內(nèi)可見(jiàn)淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。 結(jié)論: 1.野生型B16-F10細(xì)胞單克隆化后,其亞克隆細(xì)胞株的生物學(xué)性狀(細(xì)胞形態(tài)、增殖曲線、細(xì)胞周期、成瘤性等)與親代B16-F10細(xì)胞相比呈現(xiàn)多向性變異。 2.與對(duì)照組69#細(xì)胞相比,空間環(huán)境對(duì)小鼠黑色素瘤B16-F10細(xì)胞的生物學(xué)特性能夠產(chǎn)生較強(qiáng)的誘變作用。
【學(xué)位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R739.5
【圖文】：

圖1對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組 a:對(duì)照組(野生型B16一F10)b:實(shí)驗(yàn)組02f:實(shí)驗(yàn)組45#9:實(shí)驗(yàn)組50#h:實(shí)驗(yàn)組99#3.對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞株的增殖曲線MTT檢測(cè)結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，實(shí)隨機(jī)抽取的10株亞克隆細(xì)胞中有5株細(xì)32#細(xì)胞株增殖速率均快于對(duì)照組，69#、他亞克隆細(xì)胞株的生長(zhǎng)趨勢(shì)與對(duì)照組基本1。8 1.6 1.4 1.2 861100樹丫巴 0.40。2

99#3.對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞株的增殖曲線MTT檢測(cè)結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞株的增殖速度呈多向性變異(圖2)。隨機(jī)抽取的10株亞克隆細(xì)胞中有5株細(xì)胞生長(zhǎng)速度與對(duì)照組比較有明顯差異，09#、32#細(xì)胞株增殖速率均快于對(duì)照組，69#、02#和50#細(xì)胞株增殖速率均慢于對(duì)照組，其他亞克隆細(xì)胞株的生長(zhǎng)趨勢(shì)與對(duì)照組基本一致。1。8 1.6 1.4 1.2，69#-刁卜-B1602#99#74#3#—32#—09#83#50#一一45# 861100樹丫巴 0.40。2時(shí)間(d)圖2:對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞株的增殖曲線4.對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞株的周期分布FCM檢測(cè) B16一F10細(xì)胞DNA含量，判斷其細(xì)胞周期分布，結(jié)果表明:與對(duì)照組相比，32#細(xì)胞株GO/Gl期減少不明顯，而09#細(xì)胞株Go/Gl期細(xì)胞明顯減少

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2738852