【摘要】： 研究目的: 1.研究一株野生型B16-F10細胞單克隆化后,獲得的亞克隆細胞株的生物學特性(細胞形態(tài)、增殖曲線、細胞周期、成瘤性等)與親代野生型B16-F10細胞相比的異同。 2.與空間誘變的結果做比較,研究空間環(huán)境對黑色素瘤B16-F10細胞的生物學特性產生的影響。 研究方法: 將野生型B16-F10細胞用有限稀釋法進行單克隆,共獲得104株亞克隆細胞株。隨機選取十株亞單克隆細胞株作為實驗組,編號為2#、3#、9#、32#、45#、50#、69#、74#、83#和99#,對照組為親代野生型B16-F10細胞。 1.體外實驗 利用倒置相差顯微鏡(Phasecontrast Microscope,PCM)觀察對照組和實驗組B16-F10細胞形態(tài);通過四甲基偶氮唑鹽[3(4,5dimethylthiazol2y1)2,5diphenyltetrazolium bromide,MTT]比色法檢測對照組和實驗組B16-F10細胞增殖情況;利用流式細胞術(Flow Cytometry,FCM)檢測對照組和實驗組B16-F10細胞周期情況。 2.體內實驗 將對照組和實驗組B16-F10細胞接種于C57BL/6J小鼠,每株細胞接種20只小鼠,10只為1組,共分2組,其中1組接種于腹腔,觀察荷瘤小鼠生存期,另1組接種于小鼠右側胸脅部皮下,記錄腫瘤組織直徑生長至3mm時所需時間,記為出瘤時間,待小鼠生長至2周時,處死,分離荷瘤小鼠腫瘤組織、胸腺和脾臟。稱重荷瘤小鼠腫瘤組織,觀察對照組和實驗組B16-F10細胞的成瘤性;稱重荷瘤小鼠的胸腺和脾臟,計算胸腺系數(shù)和脾系數(shù),觀察小鼠免疫系統(tǒng)的變化;利用H.E染色法進行瘤體的病理學檢測。 3.分析結果與空間誘變的結果做比較 研究結果: 1.體外實驗: 光學倒置顯微鏡下,對照組和實驗組細胞株分布均勻,大多呈現(xiàn)不規(guī)則型。與對照組相比,實驗組細胞株的形態(tài)未見明顯差異。MTT檢測結果顯示,與對照組相比,實驗組細胞株的增殖速度呈多向性變異。09#、32#細胞株增殖速率均快于對照組,69#、02#和50#細胞株增殖速率均慢于對照組,其他實驗組細胞株的生長趨勢與對照組基本一致。FCM檢測結果表明:與對照組相比,32#細胞株G0/G1期減少不明顯,而09#細胞株G0/G1期細胞明顯減少,S期細胞增多,69#、02#和50#細胞株G0/G1期明顯增多,G2/M期、S期減少,與各對應細胞增殖速度趨勢一致。 2.體內實驗 與對照組相比,69#、50#、02#、83#細胞株所致荷瘤小鼠的出瘤時間延長、生存時間延長、腫瘤組織重量明顯減少、脾系數(shù)明顯增加;09#、32#細胞株所致荷瘤小鼠的腫瘤組織重量明顯增加、生存時間明顯縮短、胸腺系數(shù)和脾系數(shù)減小,其它實驗組細胞株所致荷瘤小鼠未見明顯差異。腫瘤組織切片H.E染色結果顯示:對照組和32#細胞株所致荷瘤小鼠的腫瘤組織壞死組織較多,69#和50#腫瘤組織內壞死組織較少。 3.篩選出一株細胞增殖速度明顯減慢,出瘤時間延長,瘤體重量減小,生存時間延長,編號為69#。此株成瘤性減弱的細胞與空間誘變獲得的免疫原性增強的細胞株做比較,研究空間環(huán)境對黑色素瘤細胞的影響。 4.與對照組69#細胞相比,空間組11#細胞形態(tài)有較大改變,細胞體積增大,突起增加。MTT檢測結果顯示,空間組11#細胞增殖速度明顯減慢。體內實驗結果顯示,空間組11#細胞荷瘤小鼠的瘤體重量明顯減小、生存期延長。腫瘤組織切片H.E染色結果顯示,空間組11#細胞腫瘤組織內可見淋巴細胞浸潤。 結論: 1.野生型B16-F10細胞單克隆化后,其亞克隆細胞株的生物學性狀(細胞形態(tài)、增殖曲線、細胞周期、成瘤性等)與親代B16-F10細胞相比呈現(xiàn)多向性變異。 2.與對照組69#細胞相比,空間環(huán)境對小鼠黑色素瘤B16-F10細胞的生物學特性能夠產生較強的誘變作用。
【學位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2009
【分類號】：R739.5
【圖文】：

圖1對照組和實驗組 a:對照組(野生型B16一F10)b:實驗組02f:實驗組45#9:實驗組50#h:實驗組99#3.對照組和實驗組細胞株的增殖曲線MTT檢測結果顯示，與對照組相比，實隨機抽取的10株亞克隆細胞中有5株細32#細胞株增殖速率均快于對照組，69#、他亞克隆細胞株的生長趨勢與對照組基本1。8 1.6 1.4 1.2 861100樹丫巴 0.40。2

99#3.對照組和實驗組細胞株的增殖曲線MTT檢測結果顯示，與對照組相比，實驗組細胞株的增殖速度呈多向性變異(圖2)。隨機抽取的10株亞克隆細胞中有5株細胞生長速度與對照組比較有明顯差異，09#、32#細胞株增殖速率均快于對照組，69#、02#和50#細胞株增殖速率均慢于對照組，其他亞克隆細胞株的生長趨勢與對照組基本一致。1。8 1.6 1.4 1.2，69#-刁卜-B1602#99#74#3#—32#—09#83#50#一一45# 861100樹丫巴 0.40。2時間(d)圖2:對照組和實驗組細胞株的增殖曲線4.對照組和實驗組細胞株的周期分布FCM檢測 B16一F10細胞DNA含量，判斷其細胞周期分布，結果表明:與對照組相比，32#細胞株GO/Gl期減少不明顯，而09#細胞株Go/Gl期細胞明顯減少

【參考文獻】

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本文編號：2738852