發(fā)布時(shí)間：2020-06-17 10:11

【摘要】：近年來，性傳播疾病的發(fā)病率在全世界迅猛增加，已成為嚴(yán)重危害人類健康的公共衛(wèi)生問題。非淋球菌性尿道炎(non-gonococcal urethritis，NGU)的發(fā)病率在西方國家已超過淋病，居性傳播疾病的首位，我國的病例亦日益增多，成為最常見的性傳播疾病之一。在NGU中，40％～50％是由沙眼衣原體(chlamydia trachomatis，C．t)感染所致，泌尿生殖道的C．t感染可引起多種疾病，并可導(dǎo)致嚴(yán)重的并發(fā)癥和后遺癥，因此及時(shí)有效地控制C．t感染的傳播是非常必要的。 近年來新型抗生素的出現(xiàn)為C．t感染的治療提供了很多的選擇，但同時(shí)，有關(guān)C．t抗生素耐藥的報(bào)告日漸增多，臨床上C．t的生殖道感染復(fù)發(fā)病例亦屢見不鮮，這個(gè)問題困擾著臨床醫(yī)生。在國外已有許多學(xué)者開始研究沙眼衣原體的耐藥問題，其研究深度已經(jīng)到達(dá)基因水平，而國內(nèi)目前尚無相關(guān)報(bào)道。 了解泌尿生殖道C．t對常用抗菌藥物的耐藥情況可作為臨床制定合理治療方案的重要依據(jù)。為此，我們通過沙眼衣原體細(xì)胞培養(yǎng)，從天津市性病研究所就診的病人泌尿生殖道分離出30株C．t野生菌株，并運(yùn)用碘液染色計(jì)數(shù)包涵體的方法檢測了這些野生株在體外對3種常用的抗菌藥物四環(huán)素、阿奇霉素(商品名希舒美)、鹽酸莫西沙星(商品名拜復(fù)樂)的敏感性。對發(fā)現(xiàn)的耐藥菌株以及部分敏感菌株進(jìn)行耐藥基因的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)擴(kuò)增，以期能從基因角度來探討其可能的耐藥機(jī)制。 我們采用McCoy細(xì)胞培養(yǎng)的方法分離制備待檢測的沙眼衣原體野生株，將在無抗菌藥營養(yǎng)液中傳代數(shù)次的McCoy細(xì)胞接種于24孔板，5％CO_2、37℃條件下孵育24h，然后加入待測的臨床標(biāo)本，離心、去上清液，同前條件孵育48h后，鏡下觀察結(jié)果。陽性標(biāo)本傳代至90％以上的細(xì)胞形成包涵體并收集，放于-80℃保存?zhèn)溆谩Ｏ却_定能引起90％以上細(xì)胞感染的C．t接種量，以 碩士研究生論文中文摘要 文獻(xiàn)推薦濃度為中間濃度，將四環(huán)素、阿奇霉素及鹽酸莫西沙星分別配置成六 個(gè)等比稀釋濃度，加入藥物后以沙眼衣原體在細(xì)胞內(nèi)不生長的最低濃度為最低 抑菌濃度(MIC)。發(fā)現(xiàn)耐藥菌株后，根據(jù)Genebank中的四環(huán)素耐藥決定子 (t以M)的基因序列設(shè)計(jì)引物，抽提出耐藥菌株的質(zhì)粒DNA并采用PCR方法 對抽提出的DNA進(jìn)行了擴(kuò)增。在敏感菌株中我們隨機(jī)抽取了4份標(biāo)本用同樣 的方法也進(jìn)行了擴(kuò)增。 對于四環(huán)素敏感性結(jié)果顯示:30份臨床野生分離株中，呱C成0.313mg/1 的有3株，MIC在0.313一0.625m8/L之間的有3株，呱C在0.625一1 .25mgl 之間的有8株，Mlc在1.25一2.smg/L之間的有10株，MIC在2.5一sm目L 之間的有4株，在5一10mg飛之間的有2株;對阿奇霉素的敏感性結(jié)果顯示 加nC。.125mg/1的有0株，在0.125一0.ZSm創(chuàng)毛之間的有17株，MIC 在。.25一。.smg飛之間的為13株，MIC0 .sm目L的有o株。對莫西沙星 的敏感性顯示MIC均集中在0.06一0.12m叭之間。顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)耐藥 菌株的包涵體形態(tài)學(xué)發(fā)生改變，失去了正常的橢圓形，并且數(shù)量較少。用tetM 的引物對耐四環(huán)素的兩株野生株的質(zhì)粒DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，兩株均在瓊脂 箱毅敵電泳上于約300個(gè)bp處出現(xiàn)一條明亮的條帶;另4例敏感菌株擴(kuò)增結(jié) 果均為陰性。 上述結(jié)果從試驗(yàn)的觀點(diǎn)證明了在天津市臨床上已出現(xiàn)了對四環(huán)素耐藥的 沙眼衣原體野生株，臨床上經(jīng)足量、足療程四環(huán)素類藥物治療難以陰轉(zhuǎn)的病例， 可能已出現(xiàn)耐藥。耐四環(huán)素的菌株對阿奇霉素和鹽酸莫西沙星是敏感的。我們 在抽提的耐藥菌株的質(zhì)粒DNA上擴(kuò)增出了tetM基因片段，因此考慮該耐藥 株的發(fā)生機(jī)制可能系由質(zhì)粒介導(dǎo)的。但是仍需要進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)來加以證實(shí)。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號】：R759

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 駱丹,梁國鈞,胡春梅,魯曉萱,王書奎,王自正,朱文元,徐文嚴(yán);四環(huán)素抗性基因PCR檢測及酶切分析的實(shí)驗(yàn)與臨床研究[J];臨床皮膚科雜志;1998年03期

2 徐福松,翟亞春,王勁松;泌尿生殖系沙眼衣原體感染疾病流行病學(xué)臨床診治研究進(jìn)展[J];實(shí)用男科雜志;1997年03期

3 熊詠民,代曉霞,Johne Moore,Cherie Millar;聚合酶鏈反應(yīng)法測定7種抗生素耐藥基因[J];西安醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2001年01期

4 李武，黃學(xué)惠，王同寅，顏麗琴，萬崇華，羅家洪;664例農(nóng)村已婚育齡婦女生殖道沙眼衣原體感染的調(diào)查及危險(xiǎn)因素分析[J];中國皮膚性病學(xué)雜志;1996年05期

5 趙季文，徐萃瑜，汪寧，董永慧，李樹藩，姜仁惠，朱琳，鄭燕珊，高嵐，張獻(xiàn)哲，任桂珍，郭章溉，范寶劍;我國七個(gè)地區(qū)性亂者及健康人支原體和衣原體感染的流行病學(xué)研究[J];中華流行病學(xué)雜志;1994年05期

6 鐘銘英,王千秋;沙眼衣原體細(xì)胞培養(yǎng)條件的改進(jìn)[J];中華皮膚科雜志;2001年03期

7 張樹文,王荷英,葉順章,李珊山,鐘銘英,王千秋;聚合酶鏈反應(yīng)與細(xì)胞培養(yǎng)法檢測臨床標(biāo)本中的沙眼衣原體[J];中華皮膚科雜志;1996年03期

8 王啟操,張國威,何云志,王志安;泌尿生殖道沙眼衣原體分離培養(yǎng)方法探討[J];中華皮膚科雜志;1996年03期

9 韓建德,張?jiān)魄?廖綺曼,陳木開;泌尿生殖道沙眼衣原體體外藥物敏感性測定[J];中國抗生素雜志;2002年07期

10 黃瑞;陰道加德納菌四環(huán)素耐藥基因tetM的體外擴(kuò)增及其產(chǎn)物的序列測定[J];中國抗生素雜志;1996年05期

本文編號：2717457