【摘要】：[研究背景] 銀屑病(PS；MIM#177900)是一類以紅斑、鱗屑為主要表現(xiàn)的慢性、炎癥性、免疫介導(dǎo)的皮膚疾病。目前認為,銀屑病是由遺傳、免疫及環(huán)境等因素共同引起的多因素、復(fù)雜疾病,皮損的基因表達譜分析發(fā)現(xiàn)有超過1300個基因的表達水平發(fā)生了改變；利用家系譜系分析,共發(fā)現(xiàn)了至少9個銀屑病易感基因位點,但其確切的發(fā)病機制還有待明確。BSG(MIM109480),又稱CD147,是一類免疫球蛋白超家族成員的跨膜糖蛋白,在胸腺T細胞發(fā)育、外周T細胞活化等免疫途徑中發(fā)揮重要作用。BSG基因位于人類染色體19p13,這個區(qū)域通過全基因組掃描及非參數(shù)連鎖分析鑒定為銀屑病易感位點6(PSOR6)。重要的是,在我們前期的研究中發(fā)現(xiàn),在銀屑病皮損及原代T細胞中,CD147的表達水平明顯增高�；谝陨媳尘�,本研究選擇編碼CD147蛋白分子的BSG基因作為銀屑病基因多態(tài)性研究的一個候選基因,從遺傳學(xué)層面來驗證BSG基因與銀屑病易感性的相關(guān)性,并進一步驗證BSG基因功能性SNP位點在銀屑病發(fā)病機制中發(fā)揮的生物學(xué)效應(yīng)。 [研究方法和結(jié)果] 1.運用real-time PCR及、Vestern blotting的方法,我們證實銀屑病患者的PBMCs中BSG的mRNA和蛋白表達水平均較正常人明顯增高(p=0.005andp=0.042)。 2.運用病例-對照的方法,隨機選取散發(fā)性尋常型銀屑病患者668例和正常對照1,143例,采用PCR-RFLP的方法,研究了位于BSG基因3'UTR區(qū)的多態(tài)性位點rs8259：TA與銀屑病易感性的關(guān)聯(lián)。在基因型頻率符合Hardy-Weinberg平衡的基礎(chǔ)上,我們發(fā)現(xiàn)rs8259T等位基因(TT+AT基因型)在銀屑病病例較對照組的頻率顯著降低(63.0%vs68.2%,p=0.0009),進一步根據(jù)年齡、性別、吸煙及飲酒史和家族史等銀屑病危險因素校正后,證實rs8259多態(tài)位點的T等位基因(OR=0.758,95%CI=0.638-0.901；p=0.002)能減低罹患銀屑病的風(fēng)險。 3.基于生物信息學(xué)在線軟件預(yù)測及數(shù)據(jù)庫比對的方法,發(fā)現(xiàn)BSG基因3'UTR區(qū)的多態(tài)性位點rs8259：TA位于miR-492結(jié)合的“種子”序列上,推測rs8259位點的可變等位基因,可能通過影響miR-492與BSGmRNA的結(jié)合能力而改變基因表達水平。 4.運用real-time PCR,檢測銀屑病患者和正常人PBMCs中miR-492均有表達,其兩組間表達量并無統(tǒng)計學(xué)差異p=0.557)；構(gòu)建包含多態(tài)位點rs8259不同等位基因片段的熒光素酶報告基因載體,通過熒光素報告基因分析方法,觀察rs8259多態(tài)位點的不同等位基因是否能影響B(tài)SG表達,在外源給予不同濃度'mimic miRNA-492'(1.0nM;2.5nM;5.0nM; and10nM)序列和包含rs8259多態(tài)位點的熒光素酶報告基因載體共同轉(zhuǎn)染HEK293T細胞的實驗中,證實BSG基因rs8259多態(tài)位點存在的T等位基因,可以影響miRNA-492與之結(jié)合的能力,并呈劑量依賴性的抑制了熒光素酶報告基因的活性,而攜帶A等位基因的載體不表現(xiàn)出抑制熒光素酶活性的能力。 5.進一步驗證功能性SNP位點rs8259：TA對BSG表達的影響。分別檢測了攜帶rs8259T、A等位基因的銀屑病純合子患者PBMCs中BSG表達情況,證實TT基因型銀屑病患者PBMCs中BSG的蛋白表達水平明顯低于AA基因型銀屑病患者(p=0.027),但其BSG mRNA的表達水平在兩組之間并無統(tǒng)計學(xué)差異(p=0.237)。且銀屑病患者PBMCs中BSG蛋白表達水平與miR-492的相對表達呈負相關(guān)(p=0.034,r=—0.639)。 [結(jié)論] 位于BSG基因3'UTR區(qū)的多態(tài)性位點rs8259：TA與銀屑病易感性相關(guān)聯(lián)；功能性SNP位點rs8259：TA通過改變miR-492介導(dǎo)的抑制作用,從轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控BSG的表達。
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R758.63

【共引文獻】

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1 丁維俊,王宇,陳曉玲,黃健,駱永珍,陳新賢,楊可輔,江海燕,鄧志倫,熊英;銀屑病不同時期與證型的紅細胞免疫功能研究[J];成都中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報;2004年04期

2 范星;張學(xué)軍;楊森;;銀屑病易感基因最新研究進展[J];國外醫(yī)學(xué).皮膚性病學(xué)分冊;2005年06期

3 宗金寶,張建;NK細胞與皮膚病[J];中國麻風(fēng)皮膚病雜志;2005年03期

4 沈宏;唐旭;王一玲;許愛娥;;T細胞、角蛋白10、Ki-67在進展期銀屑病皮損和皮損邊緣皮膚的表達和意義[J];中國麻風(fēng)皮膚病雜志;2007年03期

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本文編號：2712938