【摘要】：研究背景： 目光中的紫外線(主要為UVA和UVB)是導(dǎo)致皮膚日曬傷、光老化及皮膚癌的重要因素，相同劑量UVB輻射對皮膚的損傷比UVA約大800～1000倍。UVB輻射可引起角質(zhì)形成細(xì)胞產(chǎn)生炎癥因子、細(xì)胞DNA損傷及突變頻率增加、甚至引起皮膚癌腫。皮膚的角質(zhì)形成細(xì)胞、成纖維細(xì)胞均是紫外線照射的重要靶位，由于它們所處層次不同及本身功能特性不同，故對紫外線照射反應(yīng)亦不盡相同。IL-6和TNF-α均是由表皮角質(zhì)形成細(xì)胞合成的主要表皮細(xì)胞因子，參與紫外線引起的皮膚炎癥反應(yīng)過程及免疫調(diào)節(jié)，在紫外線介導(dǎo)的細(xì)胞損傷中起著重要作用。UVB輻射可引起表皮細(xì)胞周期阻滯、誘導(dǎo)其凋亡、促進(jìn)細(xì)胞增殖，p53，p21，c-fos等基因表達(dá)對上述變化至關(guān)重要。羥氯喹有目光保護(hù)、抗炎和抑制細(xì)胞免疫作用，臨床已證實羥氯喹是治療光損傷相關(guān)疾病的有效藥物。傳統(tǒng)中藥川芎、黃芩及綠茶的活性成分沒食子兒茶素沒食子酸脂(epigallocatechingallate，EGCG)等有著廣泛的生物學(xué)效應(yīng)，如吸收紫外線、抗過氧化及抗腫瘤等作用。故本項目旨在研究傳統(tǒng)中草藥茶多酚、黃芩和川芎等活性成分對培養(yǎng)狀態(tài)下的人皮膚細(xì)胞所具有的光保護(hù)性能及作用環(huán)節(jié)，籍此可為天然防曬劑的開發(fā)和實際應(yīng)用提供理論依據(jù)和實驗數(shù)據(jù)參考。 目的 觀察中波紫外線輻射(UVB)對體外培養(yǎng)的原代及永生化角質(zhì)形成細(xì)胞、成纖維細(xì)胞的損傷作用；觀察羥氯喹和中藥單體(川芎、黃芩及EGCG)所具有的光保護(hù)效應(yīng)；探討其相關(guān)作用環(huán)節(jié)和機(jī)制。 南京醫(yī)科大學(xué)碩}學(xué)位淪文 方法 1.細(xì)胞培養(yǎng):由健康人皮膚標(biāo)本中分離培養(yǎng)角質(zhì)形成細(xì)胞和成纖維細(xì) 胞，并培養(yǎng)永生化角質(zhì)形成細(xì)胞，分另」定量接種于培養(yǎng)皿或96孔板中。 2.紫外線照射:以一定劑量UVB(30、60、90耐/cm，)照射培養(yǎng)細(xì)胞 并加入工具藥物進(jìn)行干預(yù)處理。 3.細(xì)胞活性檢測:觀察細(xì)胞損傷的形態(tài)學(xué)變化;MTT法檢測細(xì)胞增殖 活性;細(xì)胞計數(shù)法繪制細(xì)胞生長曲線。 4.EL工SA檢測:EL工SA檢測各組樣本上清液中工L一6和TNF一。含量。 5.細(xì)胞周期及凋亡檢測:流式細(xì)胞儀檢測各受試組細(xì)胞周期及凋亡 率。 6.基因表達(dá)檢測:RT一PCR法檢測各受試組P53，p21，，c一f。s基因表 達(dá)。 結(jié)果 1.30、60、gomJ/emZ UVB照射后24h，上述細(xì)胞均出現(xiàn)增殖活性下降， 活性下降程度與照光劑量成正比;加入羚氯奎、川芍、黃答及EGCG處理后， 細(xì)胞活性可有一定程度恢復(fù)。 2.與未照光組相比，HaCaT細(xì)胞照光后24h工L一6和TNF一a分泌量均 增加，分另，」為98.6士0.87一403.53士1.01 pg/nll和11.27士0.68一31.27 土0.64Pg/ml。加入工具藥物干預(yù)后，在各個UVB劑量水平，EGCG均可抑 制工L一6和TNF一。分泌;羚氛奎、黃答可抑制工L一6分泌(P0.叭)，川芍 僅在90耐/cIn，劑量水平減少工L一6分泌(P0.01);黃答和川芍在60及 90 mJ/Cm，齊!J量下可減少TNF一a分泌(P0.05)，羚氯啥僅在60 mJ/cm， 劑量水平減少TNF一a分泌(P0.01)。 3.流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果表明，UVB照射可誘導(dǎo)HaCaT細(xì)胞產(chǎn)生凋亡， 其凋亡率呈UVB劑量依賴方式增加，由omJ/Cm，時的0.21%增至gomJ/cnl， 南京醫(yī)科人學(xué)碩{學(xué)位論文 時的71.18%;加入工具藥處理后，各組HaCaT細(xì)胞凋亡率均明顯下降。 4.UVB照射后24h，HaCaT細(xì)胞可出現(xiàn)明顯S期阻滯，并隨UVB劑量增 大，S期細(xì)胞數(shù)量迅速下降;加入工具藥處理后，可抑制UVB引起的細(xì)胞 周期改變。 5.UVB照射后可明顯增加HaCaT細(xì)胞中p53，p21，c一fos mRNA表達(dá)水 平，所試工具藥可在不同程度上下調(diào)上述基因表達(dá)。 結(jié)論 羚氯奎、川芍、黃答及EGCG可在不同程度上抑制中波紫外線(UVB)輻射 對人皮膚細(xì)胞(原代及永生化角質(zhì)形成細(xì)胞、成纖維細(xì)胞)的損傷效應(yīng)， 這種光保護(hù)作用在HaCaT細(xì)胞可能與工具藥抑制工L一6和TNF一二分泌以及影 響p53，p21，c一f。S基因表達(dá)有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號】：R751

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2706829