【摘要】： 目的: 1.觀察新生隱球菌與HaCaT細(xì)胞在體外共培養(yǎng)2h、4h、12h、24h后光鏡下的形態(tài)學(xué)改變、兩者的黏附及融合情況。2.比較實(shí)驗(yàn)組(新生隱球菌與HaCaT細(xì)胞共培養(yǎng)24h)與對照組(HaCaT細(xì)胞單獨(dú)培養(yǎng)24h)基因表達(dá)水平的改變,篩選差異表達(dá)基因,了解新生隱球菌與HaCaT細(xì)胞體外相互作用的分子機(jī)制。方法: 1.原代HaCaT細(xì)胞經(jīng)2-3代傳代培養(yǎng),生長至95%融合貼壁,調(diào)整細(xì)胞濃度為1×106-7個(gè)/ml,再加入密度為lx107-8個(gè)/mL的菌懸液或新鮮配置的細(xì)胞培養(yǎng)液,混合后于37℃5%CO2培養(yǎng)箱中共培養(yǎng)24h,不同時(shí)間點(diǎn)相差顯微鏡下觀察。2.人全基因組表達(dá)譜芯片檢測實(shí)驗(yàn)組與對照組差異表達(dá)基因并分析。結(jié)果:1.隨時(shí)間延長HaCaT細(xì)胞與新生隱球菌發(fā)生黏附及融合,未見明顯碎裂破壞等現(xiàn)象。2.實(shí)驗(yàn)組與對照組在基因表達(dá)水平共有138條基因發(fā)生表達(dá)上調(diào),其中127條為已知基因,11條為未知基因,涉及細(xì)胞黏附與內(nèi)吞、細(xì)胞凋亡、轉(zhuǎn)錄調(diào)控及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、氨基酸殘基磷酸化等多個(gè)生物學(xué)進(jìn)程,可能與新生隱球菌侵襲HaCaT細(xì)胞的過程有關(guān)。討論:新生隱球菌與HaCaT細(xì)胞在體外共培養(yǎng)條件下可以發(fā)生黏附內(nèi)吞,同時(shí)HaCaT細(xì)胞自身凋亡增加,這可能是由于隱球菌誘導(dǎo)HaCaT細(xì)胞相關(guān)基因表達(dá)上調(diào)所致,由此我們認(rèn)為新生隱球菌感染HaCaT細(xì)胞后被其黏附內(nèi)吞,并造成HaCaT細(xì)胞自身死亡是皮膚隱球菌病發(fā)生的可能機(jī)制。
【圖文】：

配好備用的細(xì)胞培養(yǎng)瓶吸去培養(yǎng)液，PBS清洗去除脫落細(xì)胞，加入5-6mL新鮮配的細(xì)胞培養(yǎng)液，再加入1ml密度為lx107-8個(gè)／mL的菌懸液，混合后于37℃ 5%CO2培養(yǎng)箱中共培養(yǎng)。（四）觀察及記錄在光學(xué)相差顯微鏡下分別于共培養(yǎng) 2h、4h、12h、24h 時(shí)觀察 HaCaT 細(xì)胞及新隱球菌的形態(tài)學(xué)變化、兩者的黏附及融合情況。結(jié) 果一、共培養(yǎng) 2h 后的形態(tài)HaCaT 細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中大部分呈梭形或橢圓形生長，新生隱球菌菌體呈圓形，，者均勻分布于細(xì)胞培養(yǎng)液，未見明顯黏附及融合等現(xiàn)象。(見圖 1)

第一部分 第二軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文二、共培養(yǎng) 4h 后的形態(tài)HaCaT 細(xì)胞及隱球菌菌體形態(tài)基本同前，HaCaT 細(xì)胞數(shù)目較前稍增加，未見明顯細(xì)胞與菌體黏附、融合及碎裂等現(xiàn)象。(見圖 2)
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號】：R756

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2707034