【摘要】： 目的:了解四川地區(qū)麻風(fēng)桿菌基因GTA9位點(diǎn)基因型特征及地理分布。方法:選取四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院·四川省人民醫(yī)院皮膚性病研究所2006年至2008年麻風(fēng)病人病理活檢組織塊,精選其中皮膚厚度或直徑=0.5cm,脂肪組織較少的組織塊,共56例,其中涼山州30例,甘孜阿壩5例,其他縣市21例。所有病例均由有經(jīng)驗(yàn)的病理醫(yī)師核實(shí)診斷。利用QIAGEN試劑盒提取麻風(fēng)桿菌DNA,參考國外學(xué)者文獻(xiàn)合成引物,將麻風(fēng)桿菌DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng),經(jīng)過預(yù)變性,40個(gè)熱循環(huán)及延伸后,在2!瓊脂糖中進(jìn)行電泳,每組實(shí)驗(yàn)設(shè)3組對(duì)照:空白對(duì)照、陰性對(duì)照和質(zhì)控對(duì)照。在紫外線下觀察擴(kuò)增結(jié)果,然后應(yīng)用雙脫氧核糖核酸鏈末端終止法對(duì)GTA9位點(diǎn)可變的串聯(lián)重復(fù)序列(variable number tandem repeat,VNTR)的PCR產(chǎn)物進(jìn)行測序,利用Chromas軟件閱讀圖譜,對(duì)序列進(jìn)行判讀確定其重復(fù)拷貝數(shù)。應(yīng)用SAS9.13軟件包,對(duì)結(jié)果進(jìn)行卡方檢驗(yàn)和秩和檢驗(yàn)。結(jié)果:本研究結(jié)果顯示麻風(fēng)桿菌的56例麻風(fēng)菌株在GTA9位點(diǎn)上表達(dá)比例為93.5%,而且等位基因拷貝數(shù)具有多樣性,其拷貝數(shù)在8～53范圍內(nèi)變化,以15、19、21個(gè)拷貝數(shù)為主的等位基因型菌株分別占總菌株陽性的比例分別為15.7%、11.8%、9.8%,其中以14、20、30和33個(gè)拷貝數(shù)的等位基因位點(diǎn)只有涼山州有,其他縣市GTA9等位基因位點(diǎn)的拷貝數(shù)均33;涼山州GTA9等位基因位點(diǎn)共13種,只在涼山州表達(dá)的有8種。四川地區(qū)總標(biāo)本數(shù)n=5640,最小理論頻數(shù)T=3.145,連續(xù)校正X2值, X2=0.27,按a=0.05水準(zhǔn),P0.05,差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,尚不能認(rèn)為涼山州與四川其他地方GTA9陽性標(biāo)本存在地區(qū)差異。麻風(fēng)桿菌基因GTA9等位基因拷貝數(shù)和四川涼山、甘孜阿壩及其他縣市的拷貝數(shù)地理分布,將拷貝數(shù)分成8～18,19～29,30～53三個(gè)區(qū)段,經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,利用成組設(shè)計(jì)頻數(shù)表資料的多個(gè)樣本的秩和檢驗(yàn)計(jì)算H值,H=98.17,由于相同秩次較多,校正后Hc=116.87,自由度v=2,Hc近似服從v=2的X2分布,P0.005,按a=0.05水準(zhǔn),總體拷貝例數(shù)差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,進(jìn)一步做成組設(shè)計(jì)兩兩比較的秩和檢驗(yàn),得到界值分別為10.79、15.26、18.93,按a=0.05水準(zhǔn),P0.05,差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,尚不能認(rèn)為GTA9等位基因位點(diǎn)拷貝數(shù)在四川涼山、甘孜阿壩及其他縣市分布存在差異。結(jié)論:1.四川地區(qū)麻風(fēng)桿菌基因GTA9位點(diǎn)陽性表達(dá)率較高。2.四川地區(qū)麻風(fēng)桿菌基因GTA9位點(diǎn)具有明顯的多態(tài)性。3.四川地區(qū)麻風(fēng)桿菌基因GTA9位點(diǎn)與地理分布無明顯聯(lián)系。4.麻風(fēng)桿菌基因GTA9位點(diǎn)重復(fù)拷貝數(shù)大于33的等位基因位點(diǎn)是涼山州與四川其他地區(qū)等位基因的典型差別之一,可能為進(jìn)一步的流行病學(xué)研究提供依據(jù)。
【圖文】：

圖2、圖3和表1顯示，四川56例麻風(fēng)桿菌菌株在GTA9等位基因表達(dá)比例為93.5%，各位點(diǎn)拷貝數(shù)在8～53范圍的GTA9等位基因共20種，等位基因的平均個(gè)數(shù)為2.45個(gè)，等位基因拷貝數(shù)具有多樣性。圖3、圖4顯示，其中以位點(diǎn)15、19、21拷貝數(shù)為主的等位基因型菌株分別占總菌株陽性的比例分別為15.7%、11.8%、9.8%，其中以14、20、30和＞33個(gè)拷貝數(shù)的等位基因位點(diǎn)只有涼山州有，其他縣市GTA9等位基因位點(diǎn)的拷貝數(shù)均＜33；涼山州GTA9等位基因位點(diǎn)共13種，只在涼山州表達(dá)的有8種。涼山州GTA9等位基因的型別在所有51例的陽性標(biāo)本中最豐富。圖 2 基因 GTA9 位點(diǎn)來源地Figure2 GTA9 Genotype locus source terra攀枝花阿壩巴中達(dá)州廣安資陽雅安眉山樂山自貢瀘州廣元綿陽涼山宜賓內(nèi)江成都南充遂寧★德陽★8--18copy19--29 copy30--40copy＞40copy甘孜★★◆◆10

5.四川各地的麻風(fēng)桿菌菌株GTA9等位基因拷貝例數(shù)地理分布如表4、圖3、圖4、圖6顯示麻風(fēng)桿菌基因GTA9等位基因位點(diǎn)拷貝數(shù)和四川各地的位點(diǎn)拷貝數(shù)地理分布，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，利用表5成組設(shè)計(jì)頻數(shù)表資料的多個(gè)樣本的秩和檢驗(yàn)計(jì)算H值，H=98.17，由于相同秩次較多，校正后Hc=116.87,自由度v=2,Hc近似服從v=2的X2分布，P＜0.005，按a=0.05水準(zhǔn)，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可以認(rèn)為GTA9位點(diǎn)等位基因拷貝例數(shù)在四川分布不完全相同。以15、19、21個(gè)拷貝數(shù)為主的等位基因型菌株分別占總菌株陽性的比例分別為15.7%、11.8%、9.8%，除8、13、18、23、24、26、3314
【學(xué)位授予單位】：瀘州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R755

【相似文獻(xiàn)】

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1 趙蓓;四川地區(qū)麻風(fēng)桿菌基因GTA9位點(diǎn)初步研究[D];瀘州醫(yī)學(xué)院;2009年

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本文編號(hào)：2699883