【摘要】：目的 1、研究銀屑病表皮p16~(INK4a)基因啟動子甲基化狀態(tài) 2、分析銀屑病表皮p16~(INK4a)基因啟動子甲基化與p16~(INK4a)mRNA表達(dá)量的關(guān)系 3、初步探討銀屑病表皮p16~(INK4a)基因啟動子甲基化與IFN-γ受體和TNF受體mRNA表達(dá)的相關(guān)性 4、探討除啟動子甲基化外，其它影響銀屑病表皮p16~(INK4a)基因表達(dá)的主要因素 方法 1、收集56例斑塊型銀屑病患者皮損處皮膚，其中28例患者同時采集距皮損邊緣1cm左右外觀正常皮膚。標(biāo)本分為3組：皮損組、皮損周外觀正常的未受累皮膚組(以下稱未受累皮膚組)、以健康皮膚為對照組(以下稱健康對照組)。分離表真皮，提取表皮DNA和RNA。 2、按銀屑病面積和嚴(yán)重性指數(shù)(PASI)評分評估銀屑病患者病情嚴(yán)重程度。 3、應(yīng)用MSP方法檢測表皮p16~(INK4a)基因啟動子甲基化狀況，并分析其與臨床資料的相關(guān)性。 4、應(yīng)用RT-PCR方法檢測表皮p16~(INK4a)mRNA表達(dá)水平，分析銀屑病中p16~(INK4a)啟動子甲基化與其mRNA表達(dá)的關(guān)系。 5、應(yīng)用RT-PCR方法檢測表皮IFN-γ受體和TNF受體mRNA表達(dá)水平，分析p16~(INK4a)啟動子甲基化與兩受體表達(dá)的相關(guān)性。 6、應(yīng)用PCR-SSCP方法檢測表皮CDKN2A基因位點外顯子E1α、E1β和E2缺失和突變情況。 結(jié)果 一、斑塊型銀屑病患者皮損表皮p16~(INK4a)基因啟動子甲基化率增高，并與皮損嚴(yán)重程度和活動性有關(guān)，吸煙和有銀屑病家族史的患者p16~(INK4a)甲基化發(fā)生率增高。 1、28例患者皮損和未受累皮膚表皮p16~(INK4a)基因啟動子甲基化率分別為32.14％(9／28)和7.14％(2／28)，健康對照組中未發(fā)現(xiàn)p16~(INK4a)基因啟動子甲基化(0／38)，皮損高于未受累皮膚(P＜0.05)，未受累皮膚與健康對照組比較無
【圖文】：

中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文病情得以長期緩解�；蚣谆驞NA序列并不改變，，通過去甲基化作用可能使基因表達(dá)恢復(fù)正常(見圖1)。甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑5一氮一2一脫氧胞昔在治療腫瘤的臨床研究中獲得了良好的效果I’2，’3]。提示調(diào)控基因啟動子甲基化，從基因水平控制導(dǎo)致疾病發(fā)生和發(fā)展的“開關(guān)”，不但在理論上可行，也顯示了一定的臨床應(yīng)用前景。因此，研究基因啟動子甲基化狀態(tài)有可能成為衡量銀屑病嚴(yán)重程度的分子標(biāo)記和治療靶標(biāo)。圖1甲基抑制劑可使轉(zhuǎn)錄因子與啟動子重新結(jié)合，靶基因恢復(fù)正常轉(zhuǎn)錄.本課題組最近研究發(fā)現(xiàn)斑塊型銀屑病患者外周血單一核細(xì)胞p16NIK4，基因啟動子甲基化率約為70%，較健康對照增高【’4】。本實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)皮損處表皮中該基因啟動子甲基化率約為30%。為什么前者較后者的發(fā)生率高?可以解釋為雖然銀屑病患者外周血單一核細(xì)胞P16NIK4“高甲基化可能會導(dǎo)致細(xì)胞異常增殖

圖1p6lmNRA表達(dá)PCR產(chǎn)物凝膠電泳圖(m:NDA分子量標(biāo)記，250Pb示P16lNK4a擴增片段，11:陰性對照)圖2內(nèi)對照PCR產(chǎn)物凝膠電泳圖(m:DNA分子量標(biāo)記，1SOPb示內(nèi)對照擴增片段，11:陰性對照)
【學(xué)位授予單位】：中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號】：R758.63

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 郝俊霞;p16異常甲基化及其表達(dá)和DNMT1表達(dá)在宮頸癌變中的研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2011年

本文編號：2689335