【摘要】：隨著艾滋病和其他免疫缺陷患者的增多，分支桿菌感染的發(fā)病率也逐漸上升。分支桿菌既可以引起系統(tǒng)性感染，也可以引起皮膚感染。皮膚分支桿菌感染的臨床表現(xiàn)和組織病理都缺乏特異性，診斷主要依靠檢測到分支桿菌。對皮損組織進(jìn)行直接涂片和抗酸染色的陽性率低，培養(yǎng)和生化鑒定所需時間長，不能為臨床醫(yī)生及時提供可靠的信息，因此迫切需要建立快速、敏感、特異的分支桿菌檢測和鑒定方法。以PCR為基礎(chǔ)的分子生物學(xué)方法使分支桿菌感染的快速、準(zhǔn)確診斷成為可能。本研究旨在針對文獻(xiàn)報道通�？梢鹌つw感染的分支桿菌進(jìn)行研究，建立PCR、多重PCR和PCR-RFLP方法，并用所建立的方法結(jié)合傳統(tǒng)的表型和生化鑒定技術(shù)對皮膚分支桿菌感染的臨床分離株進(jìn)行鑒定。 第一章：建立5種常見皮膚分支桿菌感染的PCR方法。首先對連續(xù)稀釋的5種分支桿菌DNA用其自身的特異性引物進(jìn)行PCR擴增，驗證各分支桿菌PCR檢測的敏感性；然后用各引物對其它17種分支桿菌標(biāo)準(zhǔn)株DNA進(jìn)行PCR擴增，驗證引物的特異性；之后對PCR方法用于模擬臨床皮膚分支桿菌感染標(biāo)本的檢測進(jìn)行了初步探討。結(jié)果表明：除了潰瘍分支桿菌PCR檢測的敏感性為1×10~0個菌細(xì)胞／mL外，其它分支桿菌的敏感性均為1×10~2個菌細(xì)胞／mL；各分支桿菌的引物除了與自身相應(yīng)的DNA可以擴增出特異性片段外，與其它分支桿菌DNA不能擴增出特異性片段；向正常皮膚組織勻漿中加入鳥分支桿菌菌懸液以模擬臨床皮膚感染標(biāo)本，PCR檢測的敏感性降低了100倍，說明皮膚組織中含有很強的PCR反應(yīng)的抑制物；把組織勻漿倍比稀釋后，敏感性增強，當(dāng)稀釋度≥1：4時，敏感性恢復(fù)為1×10~2個菌細(xì)胞／mL，提示在對臨床皮膚組織標(biāo)本進(jìn)行PCR檢測時，可將組織勻漿稀釋后高速離心沉淀集菌，再進(jìn)行PCR反應(yīng)，就有可能避免組織抑制物的干擾。 第二章：建立5種常見分支桿菌感染的多重PCR方法。分4個步驟：1、分支桿菌單一PCR的建立：鳥、胞內(nèi)、結(jié)核、潰瘍、堪薩斯5種分支桿菌DNA與自身的特異性引物PCR擴增陽性，而與其它分支桿菌引物PCR擴增結(jié)果均為陰性；2、2種(鳥、胞內(nèi))或3種(潰瘍、堪薩斯、結(jié)核)分支桿菌DNA模板混合后，分別與各菌種的特異性引物進(jìn)行PCR擴增，結(jié)果各模板僅與自身引物反應(yīng)，擴增出相應(yīng)的特異性片段，未見到模板的混合抑制PCR反應(yīng)；3、上述2或3種分支桿菌的特異性引物混合后，分別與相應(yīng)的分支桿菌DNA模板進(jìn)行PCR擴增，結(jié)果各引物僅與自身模板反應(yīng)，擴增出相應(yīng)的特異性片段，，未見到引物的混合抑制PCR反應(yīng)；4、多重PCR反應(yīng)的建立：上述2或3種分支桿菌DNA模板與相
【學(xué)位授予單位】：中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2003
【分類號】：R754

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本文編號：2684296