【摘要】：研究背景及目的： 慢性皮膚潰瘍(Chronic skin ulcey，CSU)是一種常見的病因復(fù)雜、難治性疾病，其愈合需經(jīng)歷三個(gè)即相互區(qū)別又相互聯(lián)系的階段，是一個(gè)復(fù)雜而又連續(xù)的生物反應(yīng)過程。在歐美國家，慢性皮膚潰瘍發(fā)病率的增加及其嚴(yán)重性已引起人們的高度重視，其中以糖尿病性潰瘍和下肢血管性潰瘍?yōu)槎啵憾覈詣?chuàng)傷或創(chuàng)傷合并感染為多，近年來，糖尿病足、血管性潰瘍的發(fā)病率有上升趨勢(shì)。 不管是創(chuàng)傷還是糖尿病等其他原因引起的潰瘍，局部治療是非常重要的一種手段，但目前尚未發(fā)現(xiàn)滿意的療法和藥物。近年來，國內(nèi)外諸多學(xué)者將胰島素用于治療(全身用藥或局部應(yīng)用)各種創(chuàng)傷或潰瘍創(chuàng)面，發(fā)現(xiàn)創(chuàng)面能提前愈合，起到了很好的療效。 胰島素是一個(gè)分子量為56kD的水溶性酸性蛋白質(zhì)分子，有A和B兩條多肽鏈組成，共有三個(gè)二硫鍵，在等電點(diǎn)時(shí)具有最低溶解度。它作為一種多功能的蛋白質(zhì)激素，除調(diào)節(jié)物質(zhì)代謝作用外，還有促進(jìn)創(chuàng)面修復(fù)的效應(yīng)。大量研究證明，胰島素在體外能夠促進(jìn)或維持細(xì)胞的增殖與分化，，在體內(nèi)可能是一種生長調(diào)節(jié)因子。 我們?cè)谂R床實(shí)踐中將胰島素混合液外敷于各種頑固性潰瘍創(chuàng)面，均能取得滿意的臨床療效，監(jiān)測(cè)血糖未發(fā)現(xiàn)有低血糖現(xiàn)象，使用安全又經(jīng)濟(jì)。但將其制成外用制劑用于創(chuàng)面的實(shí)驗(yàn)研究在國內(nèi)外則鮮見報(bào)道，因此本研究欲將其制成復(fù)方制劑、外用于潰瘍創(chuàng)面并探討其可能的促愈機(jī)制，為臨床應(yīng)用提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法： 1．按正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)篩選最優(yōu)化處方，以卡波姆為基質(zhì)制備復(fù)方胰島素凝膠劑，采用紫外分光光度法測(cè)定胰島素含量變化并考察其穩(wěn)定性。 2．以Wistar大鼠為研究對(duì)象，依據(jù)文獻(xiàn)復(fù)制急性創(chuàng)傷模型，設(shè)立復(fù)方胰島素凝膠治療組(A)、空白基質(zhì)組(B)、陰性對(duì)照組(C)，以治療后不同時(shí)間點(diǎn)各組潰瘍面積變化、潰瘍愈合速度及組織病理學(xué)檢查評(píng)價(jià)修復(fù)效果。 3．以糖尿病大鼠為研究對(duì)象，依據(jù)文獻(xiàn)復(fù)制糖尿病皮膚潰瘍模型，設(shè)立復(fù)方胰島素凝膠治療組(A)、金因肽(重組人表皮細(xì)胞生長因子)陽性對(duì)照組(B)、陰性對(duì)照組(C)，以治療后不同時(shí)間點(diǎn)各組創(chuàng)面愈合百分率、HE染色、免疫組化染色及透射電鏡分析來評(píng)價(jià)修復(fù)效果。 4．統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件包處理，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((?)±s)表示，創(chuàng)面面積及創(chuàng)面愈合率采用重復(fù)測(cè)量方差分析(Repeated Measures)，不同時(shí)間點(diǎn)組間比較以及每組不同時(shí)間點(diǎn)比較采用單因素方差分析(One-Way ANOVA)；PCNA、VEGF表達(dá)采用析因分析(Factorial analysis)，不同時(shí)間點(diǎn)組間比較及每組不同時(shí)間點(diǎn)分別采用單因素方差分析(One-Way ANOVA)和t檢驗(yàn)；組間兩兩比較采用LSD法，以P＜0.05為差異有顯著性意義。 結(jié)果： 1．正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)結(jié)果：表明PH對(duì)胰島素的穩(wěn)定性影響最大、卡波姆濃度次之、胰島素濃度最�。蛔顑�(yōu)化處方組成為：A381C1，即卡波姆1.5％，pH為6，胰島素濃度14U／g。 2．穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果：發(fā)現(xiàn)我們研制的復(fù)方胰島素凝膠在冰箱(4℃±3)或室溫保存穩(wěn)定性較好。 3．藥效學(xué)研究 3．1急性創(chuàng)傷模型實(shí)驗(yàn) ①創(chuàng)面面積：不同時(shí)間各處理組間有顯著性差異(F=5.880，P＜0.01)；從傷后7天開始，各時(shí)間點(diǎn)A與B、C組比較均有顯著性差異(P＜0.01或P＜0.05)，而B與C組比較無顯著性差異(p＞0.05)。 ②光鏡觀察：傷后7d，A組肉芽組織增生旺盛，成纖維細(xì)胞及毛細(xì)血管含量豐富；而B、C組，肉芽組織增生不如A組旺盛，成纖維細(xì)胞、毛細(xì)血管含量相對(duì)A組少。傷后14d，A組創(chuàng)面基本上皮化，皮膚結(jié)構(gòu)完整；而B、C組創(chuàng)面未完全上皮化，皮膚結(jié)構(gòu)不完整。 3．2糖尿病皮膚潰瘍模型實(shí)驗(yàn) ①創(chuàng)面愈合百分率：各處理組間有顯著性差異(F=8.302，P＜0.01)；致傷3天以后，各時(shí)間點(diǎn)各組間創(chuàng)面愈合百分率的比較差異均有顯著性意義(P＜0.05或P＜0.01)；組間兩兩比較時(shí)，治療組、陽性組與陰性組比較差異均有顯著性意義(P＜0.05或P＜0.01)；而治療組與陽性組比較差異無顯著性意義(P＞0.05)。 ②光鏡觀察：傷后7天，治療組、陽性組肉芽組織生長較活躍，其毛細(xì)血管芽胚及成纖維細(xì)胞數(shù)量顯著多于陰性組對(duì)照組。傷后14天，治療組、陽性組大部分創(chuàng)面已被表皮所覆蓋，上皮化加快，肉芽組織生長旺盛；而陰性組殘留創(chuàng)面較治療組、陽性組大，上皮化慢，肉芽組織不如治療組、陽性組豐富。傷后21天，治療組、陽性組創(chuàng)面基本愈合，細(xì)胞間有大量膠原沉積，上皮層較厚，結(jié)構(gòu)完整；而陰性組膠原沉積相對(duì)較少，上皮層較薄。 ③免疫組化觀察：各處理組間有顯著性差異(P＜0.05)；傷后7天，治療組、陽性組PCNA、VEGF陽性表達(dá)率明顯高于陰性組，它們之間的差異有顯著性意義(均為P＜0.05)；而傷后14天，治療組、陽性組PCNA、VEGF陽性表達(dá)率有所下降，而陰性組則上升，它們之間的差異無顯著性意義(P＞0.05)。各間段治療組與陽性組PCNA、VEGF陽性表達(dá)率的差異均無顯著性意義(P＞0.05)。說明治療組、陽性組有提前促修復(fù)細(xì)胞增殖作用。 ④透射電鏡觀察：傷后14天，治療組、陽性組及陰性組創(chuàng)面組織中均有較多的成纖維細(xì)胞，細(xì)胞呈梭形，胞漿豐富。胞漿中粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體等細(xì)胞器較為豐富，說明各組的細(xì)胞代謝比較旺盛。治療組、陽性組細(xì)胞間質(zhì)內(nèi)有粗大的膠原纖維形成，膠原沉積明顯；而陰性組間質(zhì)內(nèi)膠原纖維細(xì)少，膠原沉積不明顯，數(shù)目明顯少于治療組、陽性組；說明治療組、陽性組較陰性組有提前促膠原沉積作用。 結(jié)論： 1．按正交試驗(yàn)篩選出的最優(yōu)化處方為：中性胰島素注射液140U，維生素。B_(12)8.75mg，卡波姆941 0.15g，甘油1.0g，三乙醇胺適量調(diào)節(jié)PH至6.0～6.5，加蒸餾水至10g。 2．該制劑處方設(shè)計(jì)合理，制備工藝簡(jiǎn)單，穩(wěn)定性好，對(duì)皮膚無刺激性，測(cè)定方法快速而準(zhǔn)確。 3．復(fù)方胰島素凝膠能使血管內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、上皮細(xì)胞等修復(fù)細(xì)胞增殖、分裂、分化能力增強(qiáng)，加快肉芽組織生長，提前上皮化，從而加速潰瘍創(chuàng)面愈合，在創(chuàng)傷愈合的三個(gè)時(shí)期均具有促修復(fù)效應(yīng)。
【學(xué)位授予單位】：第一軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號(hào)】：R758.6

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2669621