【摘要】：背景:脫發(fā)是一個(gè)世界性難題,其最主要的類型為雄激素源性脫發(fā)(Androgenetic alopecia,AGA)。我國(guó)有流行病學(xué)調(diào)查表明,AGA患者中有家族遺傳史的占比53.3%～63.9%,父系明顯高于母系。關(guān)于AGA患者目前的治療,主要為毛發(fā)移植手術(shù)治療和藥物治療。而對(duì)于毛發(fā)移植手術(shù)治療,一些大面積脫發(fā)患者,毛發(fā)移植手術(shù)因難以提供足量的供區(qū)毛囊而導(dǎo)致應(yīng)用受限;而對(duì)于藥物治療,如非那雄胺等,也因自身存在一定的副作用而被部分患者排斥。所以,臨床上迫切需要一種安全有效且廣泛適用的方案來(lái)治療雄激素源性脫發(fā)。富血小板血漿(Platelet-rich Plasma,PRP)是目前臨床較為關(guān)注的一種新型治療AGA的方法,PRP是自體血小板和血漿濃縮物,已有初步的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床研究證據(jù)表明,PRP可促進(jìn)脫發(fā)區(qū)處于衰退期的毛囊重新進(jìn)入新的毛囊周期,并可延長(zhǎng)毛發(fā)生長(zhǎng)期并延緩其向退行期的轉(zhuǎn)換,其作為一種治療脫發(fā)的新型療法,展現(xiàn)了獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。本課題組前期也進(jìn)行約50例AGA患者的脫發(fā)區(qū)行PRP微針注射治療,約80%以上的患者脫發(fā)有明顯改善,且毛發(fā)質(zhì)量及數(shù)量也有所改善。但PRP對(duì)毛發(fā)生長(zhǎng)周期的促進(jìn)作用的相關(guān)機(jī)制暫不明確,既往研究也涉及較少,因此,本實(shí)驗(yàn)構(gòu)建PRP對(duì)毛發(fā)影響的動(dòng)物模型,將獲得的PRP注射至小鼠背部皮下,后進(jìn)行相關(guān)檢測(cè),以探究PRP對(duì)毛發(fā)生長(zhǎng)周期的作用機(jī)制。目的:(1)驗(yàn)證PRP有促進(jìn)毛發(fā)生長(zhǎng)的作用;(2)探究PRP對(duì)毛發(fā)生長(zhǎng)周期的作用機(jī)制;(3)為臨床應(yīng)用PRP微針注射促進(jìn)脫發(fā)患者毛發(fā)再生提供理論依據(jù)。方法:(1)制備溫控富血小板血漿(t-PRP)采取健康成人靜脈血100ml,放入冰盒,在4℃離心機(jī)內(nèi)經(jīng)兩步差速離心法制備PRP/PPP,因本課題組所制備的PRP的過程始終處于低溫環(huán)境下,故將其稱之為溫控富血小板血漿,即t-PRP。(2)t-PRP微針注射C57BL/6小鼠背部皮下取5～6周齡的C57BL/6小鼠20只,隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組(t-PRP組)的對(duì)照組(PPP組),每組各10只,先將其背部毛發(fā)用脫毛膏脫毛,從背部正中線將其劃分為左右兩部分,左側(cè)背部皮下注射t-PRP/PPP,右側(cè)注射同等劑量的生理鹽水,分別每隔3天注射一次,共注射3次。(3)觀察t-PRP/PPP注射后對(duì)小鼠毛發(fā)周期的影響并進(jìn)行相關(guān)檢測(cè)分別取不同時(shí)間段的實(shí)驗(yàn)組(t-PRP)和對(duì)照組(PPP)C57BL/6小鼠,觀察注射部位的毛發(fā)情況的大體觀,并進(jìn)行相關(guān)檢測(cè):如將小鼠背部皮膚取材后,石蠟包埋后切片行組織切片HE染色,并行蛋白芯片檢測(cè),根據(jù)蛋白芯片檢測(cè)后的結(jié)果,再行qRT-PCR、Western-blot對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行進(jìn)一步驗(yàn)證。結(jié)果:(1)分別對(duì)t-PRP/PPP/生理鹽水注射后不同時(shí)期(1、2、5、7周)的小鼠背毛進(jìn)行大體觀察,發(fā)現(xiàn)注射t-PRP的小鼠背毛第2、5、7周較PPP組和生理鹽水組背部皮膚顏色較深,且毛發(fā)較其他組更長(zhǎng),而PPP組和生理鹽水組則無(wú)明顯差異。(2)分別取材t-PRP/PPP/生理鹽水注射后不同時(shí)期(1、2、5、7周)的小鼠背部皮膚,行HE染色后發(fā)現(xiàn)t-PRP組小鼠背部毛發(fā)較其他組更早進(jìn)入生長(zhǎng)期;行蛋白芯片檢測(cè)顯示:小鼠t-PRP注射組背部皮膚較對(duì)照組中的PDGF、Ki67、β-catenin蛋白量明顯高于陰性對(duì)照組(PPP注射組)及生理鹽水組。(3)根據(jù)蛋白芯片的檢測(cè)結(jié)果,對(duì)毛囊周期相關(guān)蛋白進(jìn)行RNA水平檢測(cè),如分別對(duì)t-PRP/PPP/生理鹽水注射后不同時(shí)期(1、2、5、7周)的小鼠背部皮膚進(jìn)行取材,行qRT-PCR、Western-blot對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行進(jìn)一步驗(yàn)證,發(fā)現(xiàn)與上述陽(yáng)性結(jié)果一致。
【圖文】：

逡逑心率為１５５０ｇ，ｌＯｍｉｎ，離心后血小板在離心管底層形成軟凝塊（圖１－ｌｂ），提逡逑取上層約２／３的血漿為貧血小板血漿（ＰＰＰ），后將血小板凝塊在剩余血漿中勻漿逡逑后得到溫控富血小板血漿（ｔ－ＰＲＰ）（圖１－ｌｃ），平均每１０ｍｌ靜脈血可制備逡逑ｌｍｌ邋ｔ－ＰＲＰ。至此得到的ｔ－ＰＲＰ中血小板濃度為為原全血中血小板濃度的６？８倍。逡逑９邋ｂ邐ｃ邐：：逡逑圖ｌ＿＿ｌｔ－ＰＲＰ的制備ａ：第１次離心后，上層為血小板和血漿濃縮物，下層為紅細(xì)胞層；ｂ：逡逑第２次離心后，上層為貧血小板血漿（ＩＭＴ），底層為血小板軟凝塊；ｃ：勻漿后的溫控富逡逑血小板血漿（ｔ邋ＰＲＰ）。逡逑Ｆｉｇ．邋１－ｌＴｈｃ邋ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ＰＲＰ．邋Ａ．Ａｆｔｅｒ邋ｔｈｅ邋ｆｉｒｓｔ邋ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ，邋ｐｌａｔｅｌｅｔｓ邋ａｎｄ邋ｐｌａｓｍａ邋ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ逡逑ｗｅｒｅ邋ｉｎ邋ｔｈｅ邋ｕｐｐｅｒ邋ｌａｙｅｒ邋ａｎｄ邋ｅｔｙｔｈｒｏｃｙｔｅｓ邋ｉｎ邋ｌｌｉｅ邋ｌｏｗｅｒ邋ｌａｙｅｒ．Ｂ．Ａｆｔｅｒ邋ｔｈｅ邋ｓｅｃｏｎｄ邋ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ

鼠毛囊則進(jìn)入該生長(zhǎng)周期的生長(zhǎng)期。注射后第７周，ｔ－ＰＲＰ注射組小鼠左側(cè)背部逡逑皮膚呈現(xiàn)灰黑色，而右側(cè)背部皮膚和ＰＰＰ注射組背部皮膚左右兩側(cè)皮膚皆為灰逡逑白至淺粉色（圖１－２邋ｅ）；表明ｔ－ＰＲＰ注射組小鼠毛囊己經(jīng)進(jìn)入新一輪生長(zhǎng)周期逡逑的生長(zhǎng)期，而ＰＰＰ／生理鹽水組則仍位于上一毛發(fā)周期的退行期至休止期。以上逡逑觀察說(shuō)明，ｔ－ＰＲＰ促進(jìn)小鼠毛發(fā)從休止期進(jìn)入生長(zhǎng)期，并可維持生長(zhǎng)期，延遲其逡逑從生長(zhǎng)期進(jìn)入退行期，而ＰＰＰ和生理鹽水注射組毛發(fā)周期始終保持一致，，說(shuō)明逡逑ＰＲＰ中促進(jìn)毛發(fā)生長(zhǎng)及周期改變的是濃縮的血小板，而不是血漿。逡逑0ｗ邐１邋ｗ邐２＼ｖ邐５ｖｖ邐７ｗ逡逑ＩＨ￡ＩＥ逡逑圖１邋２邋ｔ邋ＰＲＰ注射后不同時(shí)間段大體觀ａ：邋ｔ邋ＰＲＰ邋（左）／生理鹽水（右）注射；ｂ：注射后逡逑第１周：ｃ：注射后第２周，左側(cè)毛發(fā)處于生長(zhǎng)期，右側(cè)處于休止期；山注射后第５周，逡逑左側(cè)毛發(fā)處于休止期，右側(cè)處于生長(zhǎng)期；Ｅ：注射后第７周，左側(cè)毛發(fā)處于生長(zhǎng)期，右側(cè)處逡逑于退行期。逡逑Ｆｉｇ．邋１－２邋ａ：邋ｔ－ＰＲＰ邋（ｌｅｆｔ）／ｎｏｎｎａｌ邋ｓａｌｉｎｅ邋（ｒｉｇｈｔ）邋ｉｎｊｃｃｔｉｏｎ；ｂ：Ａｔｌｈｃ邋１ｓｔ邋ｗｅｅｋ邋ａｆｔｅｒ邋ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ；ｃ：Ａｌ邋ｔｈｅ邋２ｎｄ逡逑ｗｅｅｋ邋ａｆｔｅｒ邋ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ，邋ｔｈｅ邋ｈａｉｒ邋ｏｎ邋ｔｈｅ邋ｌｅｆｔ邋ｓｉｄｅ邋ｗａｓ邋ｉｎ邋ｔｈｅ邋ｇｒｏｗｔｈ邋ｐｈａｓｅ
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R758.71

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本文編號(hào)：2664432