【摘要】： 背景 慢性濕疹為臨床上常見(jiàn)的皮膚病,因其慢性、復(fù)發(fā)性和瘙癢性而影響患者的生活質(zhì)量,目前卻無(wú)理想的治療方法。超聲治療是近年來(lái)發(fā)展很快的微創(chuàng)治療技術(shù),已廣泛應(yīng)用于多種良惡性疾病的治療,取得了良好的治療效果。特別是治療外陰白色病變療效顯著,現(xiàn)已大量應(yīng)用于臨床治療。而大部分外陰白色病變?cè)诓∫�、臨床表現(xiàn)及病理改變與慢性濕疹有許多相似之處。能否將超聲運(yùn)用于慢性濕疹的治療是超聲治療皮膚疾病的重要研究方向之一。 目的 本實(shí)驗(yàn)用2,4-二硝基氯苯(DNCB)制備豚鼠慢性濕疹模型來(lái)觀察聚焦超聲對(duì)慢性濕疹的有效性和安全性,特別是超聲對(duì)慢性濕疹動(dòng)物模型皮膚淋巴細(xì)胞凋亡及凋亡調(diào)控蛋白表達(dá)的影響,細(xì)胞因子IL-4、IL-12和IFN-γ在超聲輻照前后表達(dá)變化及神經(jīng)生長(zhǎng)因子NGF和神經(jīng)肽SP的表達(dá)變化。旨在探討超聲用于治療慢性濕疹的可行性及其可能機(jī)制,為臨床提供一種新的有效的安全的治療慢性濕疹的物理治療方法奠定理論基礎(chǔ)。 方法 本研究分為5個(gè)部分:1.將20只豚鼠隨機(jī)分為4組,以4W、3W、2W、1W不同的功率和4mm/s的速度直線掃描背部去毛處,每處掃描時(shí)間為60s。超聲輻照后即刻、6天、15天觀察輻照區(qū)域皮膚變化情況與動(dòng)物精神、飲食及大小便情況。并同時(shí)做皮膚活檢,HE染色病理組織學(xué)檢查。旨在選擇能夠?qū)﹄嗍笃つw產(chǎn)生治療效應(yīng)又不引起凝固性壞死的劑量,為下一步超聲輻照慢性濕疹豚鼠模型奠定劑量學(xué)基礎(chǔ)。2.選擇健康豚鼠40只,每只背部剃毛2處,應(yīng)用2,4 -二硝基氯苯為抗原,小劑量多次刺激豚鼠皮膚制備慢性濕疹模型。將模型隨機(jī)分為1W組和2W組,每組20只,自身空白對(duì)照,每只豚鼠一側(cè)超聲輻照,另一側(cè)空照。根據(jù)形態(tài)學(xué)和組織病理學(xué)觀察進(jìn)行療效評(píng)估。初步觀察聚焦超聲對(duì)豚鼠慢性濕疹模型的有效性和安全性。3.超聲輻照后在24h、48 h采用TUNEL法和SP免疫組化法觀察2W組、1W組和對(duì)照組細(xì)胞凋亡及Bcl-2和Bax蛋白表達(dá)情況。探討聚焦超聲誘導(dǎo)慢性濕疹模型豚鼠皮膚淋巴細(xì)胞凋亡的作用及其機(jī)制。4.超聲輻照前,正常組和建模組取皮膚活檢,超聲輻照后14天,輻照組和對(duì)照組取皮膚活檢,用SP免疫組化法觀察細(xì)胞因子IL-4、IL-12和IFN-γ的表達(dá)變化,探討IL-4、IL-12和IFN-γ在慢性濕疹發(fā)病機(jī)制中的可能作用及超聲治療慢性濕疹的可能機(jī)制。5.超聲輻照前,正常組和建模組取皮膚活檢,超聲輻照后14天,輻照組和對(duì)照組取皮膚活檢。用SP免疫組化法觀察NGF和SP的表達(dá)變化,探討NGF和SP在慢性濕疹發(fā)病中的可能作用及聚焦超聲治療慢性濕疹的可能機(jī)制。 結(jié)果 1.大體觀察:超聲輻照后豚鼠皮膚即出現(xiàn)紅腫,皮溫增高,隨劑量的增加充血水腫變明顯。1 W和2 W組為散在點(diǎn)狀水皰,3 W和4W組水皰融合成片。6天后,充血水腫消失。3 W和4W組有紅褐色或黃褐色厚痂生成,1 W和2 W組見(jiàn)少量薄痂和鱗屑。輻照15天后,3 W和4W組有瘢痕生成,瘢痕處未見(jiàn)毛發(fā)。1 W和2 W組皮膚外觀正常,未見(jiàn)瘢痕,毛發(fā)生長(zhǎng)濃密。組織學(xué):輻照后,表皮內(nèi)水皰,真皮乳頭層充血水腫,隨劑量的增加水皰及充血水腫變明顯。6天后,充血水腫消失,表皮增厚,真皮乳頭層淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。3 W和4W組有厚痂生成,真皮可見(jiàn)肉芽組織生成。輻照15天后,3 W和4W組皮膚毛囊減少,真皮膠原纖維增生。1 W和2 W組皮膚組織病理結(jié)構(gòu)基本恢復(fù)正常。 2.建模豚鼠皮膚顯示慢性濕疹樣皮損特點(diǎn),組織病理呈慢性濕疹樣改變。超聲輻照后1周,輻照組的總分明顯降低,與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。并且2W組的療效指數(shù)高于1W組的療效指數(shù)。7天后病理組織切片可見(jiàn)輻照組表皮細(xì)胞減至4～5層,棘層肥厚減輕,表皮細(xì)胞間水腫減少,真皮內(nèi)淋巴細(xì)胞和組織細(xì)胞浸潤(rùn)減少,真皮小血管擴(kuò)張充血減輕,2W組的炎癥改善較1W組更明顯,而且真皮內(nèi)均未見(jiàn)肉芽組織生成。對(duì)照組病理組織切片與7天前比較改變不明顯。 3.輻照組的皮膚淋巴細(xì)胞凋亡率和Bax蛋白表達(dá)高于對(duì)照組(P0.001),2 W組高于1W組(P0.05),48 h高于24 h(P0.01)。輻照組Bcl-2蛋白表達(dá)低于對(duì)照組(P0.001)。Bcl-2蛋白表達(dá)與凋亡細(xì)胞率呈負(fù)相關(guān)(P 0.05),Bax與凋亡細(xì)胞率呈正相關(guān)(P0.01)。 4.正常組IL-4、IL-12、IFN-γ蛋白主要表達(dá)于表皮中上層,陽(yáng)性染色淺黃色至棕黃色。建模組,皮損中IL-4、IL-12、IFN-γ蛋白表達(dá)于表皮全層,陽(yáng)性染色呈棕黃色至棕褐色。建模組與正常組染色強(qiáng)度比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P 0.01)。超聲輻照后14天,輻照組IL-4表皮角質(zhì)形成細(xì)胞陽(yáng)性染色變淡,而對(duì)照組無(wú)明顯改變,輻照組與對(duì)照組及輻照前比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P 0.01)。IL-12、IFN-γ蛋白在超聲輻照后14天,輻照組和對(duì)照組陽(yáng)性表達(dá)均較輻照前增強(qiáng),但輻照組IL-12、IFN-γ蛋白陽(yáng)性表達(dá)低于對(duì)照組,輻照組和對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P 0.05)。 5.正常組NGF和SP主要表達(dá)于表皮中上層,陽(yáng)性染色淺黃色至棕黃色。建模組,皮損中NGF和SP表達(dá)于表皮全層,陽(yáng)性染色呈棕黃色至棕褐色,明顯高于正常組。建模組與正常組染色強(qiáng)度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P 0.01)。超聲輻照后14天,輻照組NGF和SP表皮角質(zhì)形成細(xì)胞陽(yáng)性染色變淡,而對(duì)照組無(wú)明顯改變,輻照組與對(duì)照組差異比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P 0.001)。NGF和SP二者陽(yáng)性表達(dá)呈正相關(guān)(P 0.05)。 結(jié)論 1. 3W和4W的輻照劑量偏大,易造成豚鼠皮膚不可逆損傷,而1W和2W的輻照劑量是安全而且有效的,可以為下一步超聲輻照慢性濕疹動(dòng)物模型的輻照劑量。 2.聚焦超聲輻照豚鼠慢性濕疹模型能有效地降低癥狀評(píng)分,初步結(jié)果顯示是安全的,因此聚焦超聲輻照對(duì)慢性濕疹有治療作用,在安全的前提下,超聲輻照劑量越大,治療效果越好。 3.聚焦超聲輻照豚鼠慢性濕疹模型可提高淋巴細(xì)胞Bax的表達(dá),抑制Bcl-2的表達(dá),進(jìn)而促進(jìn)豚鼠慢性濕疹模型皮膚淋巴細(xì)胞凋亡。 4.在慢性濕疹豚鼠模型中,存在細(xì)胞因子的雙重表達(dá)模式,急性期皮損表皮IL-4呈優(yōu)勢(shì)表達(dá),慢性期皮損表皮IL-12和IFN-γ呈優(yōu)勢(shì)表達(dá)。超聲輻照豚鼠皮膚對(duì)平衡表皮角質(zhì)形成細(xì)胞細(xì)胞因子的表達(dá)有一定作用。 5.在慢性濕疹豚鼠模型中,表皮角質(zhì)形成細(xì)胞NGF和SP表達(dá)增強(qiáng)。影響NGF和SP表皮角質(zhì)形成細(xì)胞的分泌和表達(dá)可能是聚焦超聲治療慢性濕疹的機(jī)制之一。
【圖文】：

圖 1-1 A.4W 超聲輻照后即刻豚鼠皮膚大觀圖；B. 4W 超聲輻照后 6 天豚鼠皮膚大觀圖；C. 4W 超聲輻照后15 天豚鼠皮膚大觀圖Fig.1-1 Morphology of guinea pig skin irradiated with 4W.A,B and C stood for at once,4d and 14d afteirradiation, respectively圖 1-2 A.4W 超聲輻照后即刻豚鼠皮膚組織病理圖（HE 100×）；B. 4W 超聲輻照后 6 天豚鼠皮膚組織病理圖（HE 100×）；C. 4W 超聲輻照后 15 天豚鼠皮膚組織病理圖（HE 100×）Fig.1-2 The pathological pictures of guinea pig skin irradiated with 4W.A,B and C stood for at once,4d and 14after irradiation, respectively

圖 片圖 1-1 A.4W 超聲輻照后即刻豚鼠皮膚大觀圖；B. 4W 超聲輻照后 6 天豚鼠皮膚大觀圖；C. 4W 超聲輻照后15 天豚鼠皮膚大觀圖Fig.1-1 Morphology of guinea pig skin irradiated with 4W.A,B and C stood for at once,4d and 14d afteirradiation, respectively
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類(lèi)號(hào)】：R454.3;R758.23

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本文編號(hào)：2665847