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家族性良性慢性天皰瘡ATP2C1基因突變研究

發(fā)布時(shí)間：2020-05-05 16:31

【摘要】： 背景:家族性良性慢性天皰瘡(Family Benign Chronic Pemphigus),是一種常染色體顯性遺傳性皮膚病,由Hailey兄弟1939年首次報(bào)道,因此也稱Hailey-Hailey Disease(HHD)。臨床表現(xiàn)以正常皮膚或紅斑基礎(chǔ)上出現(xiàn)成群的小水皰或大皰為主要特征。皮疹易發(fā)生于頸、腋窩、腹股溝、臍周、乆窩、肛周等易摩擦的部位。1995年Richard等通過(guò)基因連鎖分析將HHD定位于3q21-24。2000年Hu.等和Sudbrak等通過(guò)定位克隆的方法證實(shí)HHD是由ATP2C1基因突變所致,該基因編碼一種P-型Ca2+ATP酶,即人類分泌途徑Ca2+/Mn2+ATP酶(human secretary pathway Ca2+ transport ATPases,hSPCA1)。人角質(zhì)形成細(xì)胞SPCA1位于高爾基體內(nèi),轉(zhuǎn)運(yùn)Ca2+或Mn2+ ,控制著高爾基體內(nèi)鈣離子/錳離子的儲(chǔ)存。當(dāng)ATP2C1基因發(fā)生突變,使SPCA1泵功能異常,轉(zhuǎn)運(yùn)鈣離子的功能下降,使高爾基體腔內(nèi)鈣離子濃度降低。高爾基體腔內(nèi)鈣離子濃度的降低可能削弱了重要蛋白質(zhì)的糖基化、水解、折疊、轉(zhuǎn)運(yùn)或分選過(guò)程,如橋粒蛋白等,影響橋粒的完整性,使表皮細(xì)胞產(chǎn)生裂隙,出現(xiàn)相應(yīng)的臨床表現(xiàn)。目前,文獻(xiàn)報(bào)道該基因有80余種不同的突變位點(diǎn),突變類型有錯(cuò)義突變、無(wú)義突變、移碼突變和剪切位點(diǎn)突變。國(guó)內(nèi)朱學(xué)駿和臺(tái)灣學(xué)者等分別對(duì)7個(gè)和6個(gè)HHD家系進(jìn)行突變檢測(cè),發(fā)現(xiàn)了4個(gè)和5個(gè)未報(bào)道的新突變。本課題研究的14個(gè)家系和3個(gè)散發(fā)病例均來(lái)自山東地區(qū),臨床表現(xiàn)輕重不同,對(duì)其基因進(jìn)行研究,有助于闡明其病變的分子機(jī)制,并為將來(lái)的基因診斷,產(chǎn)前診斷及基因治療等提供理論依據(jù)。目的:(1)尋找17個(gè)先證者及其家族中病人的ATP2C1基因突變位點(diǎn)。(2)探討病人的臨床表現(xiàn)和基因突變的特點(diǎn),尋找基因型-表型之間的關(guān)系。方法:獲得病人知情同意后,抽取先證者和家庭成員中所有病人的外周全血,EDTA-K2抗凝。用QIAGEN公司DNA提取試劑盒提取基因組DNA。設(shè)計(jì)27對(duì)引物。PCR方法擴(kuò)增出ATP2C1基因28個(gè)外顯子。PCR產(chǎn)物經(jīng)凝膠電泳檢測(cè),經(jīng)蝦堿酶純化,用單條測(cè)序引物進(jìn)行測(cè)序反應(yīng)。再經(jīng)乙醇沉淀后,應(yīng)用DNA測(cè)序儀進(jìn)行測(cè)序,直接檢測(cè)ATP2C1基因存在的突變位點(diǎn)。正常對(duì)照組取自復(fù)旦大學(xué)遺傳所保存的120份正常人DNA樣本。結(jié)果:分別在8個(gè)家系和1例散發(fā)病人基因中檢測(cè)到突變位點(diǎn)。有2個(gè)家系擁有相同的基因突變位點(diǎn)。尋找到的8種突變型均是未曾報(bào)道過(guò)的。包括3個(gè)缺失突變(nt1464-1487/1462-1485 del,1523delAT,2375delTTGT),3個(gè)剪切位點(diǎn)突變(360-2a→g,1415-2a→c,2243+2t→c),2個(gè)錯(cuò)義突變(P307L和D648Y),120個(gè)正常對(duì)照中均不存在上述突變。結(jié)論: 3個(gè)缺失突變(nt1464-1487/1462-1485del,1523delAT, 2375delTTGT),3個(gè)剪切位點(diǎn)突變(360-2a→g,1415-2a→c,2243+2t→c),2個(gè)錯(cuò)義突變(P307L和D648Y)是HHD新的ATP2C1基因突變。
【圖文】：

鈣離子轉(zhuǎn)運(yùn),催化過(guò)程,基因,親和力