【摘要】：皮膚惡性黑素瘤(cutaneous malignant melanoma,CMM)是一種來源于黑素細(xì)胞的惡性腫瘤。在世界范圍內(nèi),皮膚黑色素瘤的發(fā)病率不斷上升。其中,肢端雀斑樣黑素瘤(Acral Lentiginous Melanoma,ALM)在白種人中少見,但在亞洲人中發(fā)病率較高。盡管黑素瘤的診斷及治療方法快速發(fā)展,但是5年生存率并沒有明顯提高。所以,更好的了解腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制仍具有重要的意義。長(zhǎng)鏈非編碼RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是一種長(zhǎng)度大于200個(gè)核苷酸且不具備編碼蛋白能力的轉(zhuǎn)錄本。目前已發(fā)現(xiàn)多種lncRNA與黑素瘤的發(fā)生發(fā)展相關(guān)。本課題組通過基因芯片雜交的方法進(jìn)行ALM表達(dá)譜分析,尋找差異表達(dá)的lncRNA,構(gòu)建lncRNA-mRNA共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)。我們發(fā)現(xiàn),linc37877在腫瘤組織及黑素瘤細(xì)胞系中均高表達(dá)。我們推測(cè),linc37877在黑素瘤中可能作為癌基因?qū)δ[瘤的發(fā)生發(fā)展起到促進(jìn)的作用。第一部分長(zhǎng)鏈非編碼RNA在肢端雀斑痣樣黑素瘤的表達(dá)譜分析目的:建立肢端雀斑痣樣黑素瘤差異表達(dá)lncRNA及mRNA表達(dá)譜,獲得差異表達(dá)mRNA的分子功能、生物學(xué)過程及相關(guān)疾病通路信息。方法:應(yīng)用人類lncRNA芯片雜交技術(shù)對(duì)6對(duì)肢端雀斑痣樣黑素瘤患者的腫瘤組織及癌旁組織樣本進(jìn)行差異表達(dá)的lncRNA和mRNA篩選。對(duì)差異表達(dá)的mRNA進(jìn)行GO分析及KEGG分析,獲得相關(guān)分子學(xué)信息及疾病通路信息。挑取差異表達(dá)的5條lncRNA進(jìn)行RT-qPCR實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,構(gòu)建lncRNA-mRNA共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)。結(jié)果:通過lncRNA芯片雜交,共獲得4490條差異表達(dá)的lncRNA和3915條差異表達(dá)的mRNA。差異表達(dá)的mRNA主要影響的生物學(xué)過程為色素的產(chǎn)生、黑素細(xì)胞分化、黑素代謝物生物合成、細(xì)胞鏈接和細(xì)胞粘附等,主要影響的細(xì)胞成分為黑色素體膜、色素顆粒和黑色素小體、細(xì)胞間連接等,分子功能主要影響通道活性、細(xì)胞間粘附、鈣粘蛋白結(jié)合等。通路主要涉及:神經(jīng)鞘糖脂生物合成-ganglio系列,腫瘤轉(zhuǎn)錄失調(diào),Toll樣受體信號(hào)通路和黑色素生成、催產(chǎn)素信號(hào)通路、肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架和HIPO信號(hào)通路的調(diào)控等。結(jié)論:構(gòu)建了肢端雀斑痣樣黑素瘤的lncRNA、mRNA表達(dá)譜。為后續(xù)研究提供了數(shù)據(jù)來源。第二部分linc37877對(duì)黑素瘤細(xì)胞A875生物學(xué)行為的影響及機(jī)制初探目的:研究linc37877對(duì)黑素瘤細(xì)胞的增殖、凋亡、侵襲和遷移能力的影響方法:首先在原代黑素細(xì)胞及4種黑素瘤細(xì)胞株(A375、A875、MV3、SK-MEL-28)中通過RT-qPCR實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證linc37877的差異表達(dá)。采用RNA熒光原位雜交及核質(zhì)分離實(shí)驗(yàn)明確linc37877的細(xì)胞定位。聯(lián)合應(yīng)用ASO技術(shù)及siRNA技術(shù)有效干擾黑素瘤細(xì)胞株中l(wèi)inc37877的表達(dá),并評(píng)估干擾效率。CCK8法及EdU法檢測(cè)linc37877對(duì)黑素瘤細(xì)胞增殖的影響,流式凋亡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)linc37877對(duì)黑素瘤細(xì)胞凋亡的影響,劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)linc37877對(duì)黑素瘤細(xì)胞侵襲及遷移能力的影響。Western-Blot法初步探尋linc37877影響侵襲及遷移的機(jī)制。結(jié)果:linc37877在黑素瘤細(xì)胞株中的表達(dá)水平明顯高于黑素細(xì)胞(P0.05),其中在黑素瘤細(xì)胞株A875中表達(dá)量最高。linc37877絕大部分分部于細(xì)胞核。干擾黑素瘤細(xì)胞linc37877表達(dá)后,linc37877的表達(dá)水平明顯降低(P0.05)。干擾linc37877表達(dá)后,A875細(xì)胞的增殖能力明顯下降(P0.05),凋亡顯著增加(P0.05)。腫瘤遷移及侵襲能力明顯下降(P0.05),基質(zhì)金屬蛋白酶家族MMP2、MMP9蛋白的表達(dá)下調(diào),而E-catenin,N-catenin及Vimentin無明顯改變。結(jié)論:linc37877主要定位于細(xì)胞核,能夠促進(jìn)黑素瘤細(xì)胞的增殖,抑制凋亡,提高其侵襲和遷移能力。其侵襲能力的增加可能和MMP2、MMP9蛋白有關(guān),而與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化無關(guān)。
【圖文】：

Ｐ值越小，，所篩選的差異基因可靠性越高。６對(duì)樣本中共檢測(cè)到３９１５逡逑個(gè)差異表達(dá)的ｍＲＮＡ。其中，上調(diào)的ｍＲＮＡ有１１９２條，下調(diào)的ｍＲＮＡ有２７２３逡逑條（

量的差異倍數(shù)，縱坐標(biāo)表示Ｐ值。綠色水平線代表Ｐ值為０．０５，兩條綠色豎直逡逑線代表的差異倍數(shù)分別是２和－２。紅點(diǎn)、綠點(diǎn)及黑點(diǎn)分別表示為上調(diào)的差異表逡逑ｍＲＮＡ、下調(diào)的差異表達(dá)ｍＲＮＡ及無顯著差異表達(dá)的ｍＲＮＡ邋（
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R739.5

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2 齊淑貞,張國(guó)成,吳紹熙;對(duì)稱性進(jìn)行性紅斑角化病伴雀斑痣一例[J];中華皮膚科雜志;2005年07期

3 李若輝;馬林;;溫針搔灼法治療雀斑痣506例療效觀察[J];中國(guó)針灸;1988年02期

4 Huilgol S.C.,Selva D. ,劉超;惡性雀斑痣和惡性雀斑痣黑色素瘤的手術(shù)邊界:繪制連續(xù)切除界線的技術(shù)[J];世界核心醫(yī)學(xué)期刊文摘(皮膚病學(xué)分冊(cè));2005年02期

5 郝慧霞;莎娜;;惡性黑素瘤研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2010年12期

6 施守義;老年色素改變性皮膚疾患[J];實(shí)用老年醫(yī)學(xué);1992年01期

7 楊自娟;;少年雀斑痣伴咖啡斑1例[J];臨沂醫(yī)專學(xué)報(bào);1990年03期

8 張開紅;王仁成;;磨削術(shù)治療皮膚病損1649例分析[J];泰山醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1993年01期

9 孫振權(quán);黑痣與惡性黑色素瘤[J];癌癥;1984年04期

10 康建夫;壽斑不會(huì)癌變[J];老年人;2002年04期

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本文編號(hào)：2614229