【摘要】：皮膚惡性黑素瘤(cutaneous malignant melanoma,CMM)是一種來源于黑素細胞的惡性腫瘤。在世界范圍內(nèi),皮膚黑色素瘤的發(fā)病率不斷上升。其中,肢端雀斑樣黑素瘤(Acral Lentiginous Melanoma,ALM)在白種人中少見,但在亞洲人中發(fā)病率較高。盡管黑素瘤的診斷及治療方法快速發(fā)展,但是5年生存率并沒有明顯提高。所以,更好的了解腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機制仍具有重要的意義。長鏈非編碼RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是一種長度大于200個核苷酸且不具備編碼蛋白能力的轉(zhuǎn)錄本。目前已發(fā)現(xiàn)多種lncRNA與黑素瘤的發(fā)生發(fā)展相關(guān)。本課題組通過基因芯片雜交的方法進行ALM表達譜分析,尋找差異表達的lncRNA,構(gòu)建lncRNA-mRNA共表達網(wǎng)絡(luò)。我們發(fā)現(xiàn),linc37877在腫瘤組織及黑素瘤細胞系中均高表達。我們推測,linc37877在黑素瘤中可能作為癌基因?qū)δ[瘤的發(fā)生發(fā)展起到促進的作用。第一部分長鏈非編碼RNA在肢端雀斑痣樣黑素瘤的表達譜分析目的:建立肢端雀斑痣樣黑素瘤差異表達lncRNA及mRNA表達譜,獲得差異表達mRNA的分子功能、生物學(xué)過程及相關(guān)疾病通路信息。方法:應(yīng)用人類lncRNA芯片雜交技術(shù)對6對肢端雀斑痣樣黑素瘤患者的腫瘤組織及癌旁組織樣本進行差異表達的lncRNA和mRNA篩選。對差異表達的mRNA進行GO分析及KEGG分析,獲得相關(guān)分子學(xué)信息及疾病通路信息。挑取差異表達的5條lncRNA進行RT-qPCR實驗驗證,構(gòu)建lncRNA-mRNA共表達網(wǎng)絡(luò)。結(jié)果:通過lncRNA芯片雜交,共獲得4490條差異表達的lncRNA和3915條差異表達的mRNA。差異表達的mRNA主要影響的生物學(xué)過程為色素的產(chǎn)生、黑素細胞分化、黑素代謝物生物合成、細胞鏈接和細胞粘附等,主要影響的細胞成分為黑色素體膜、色素顆粒和黑色素小體、細胞間連接等,分子功能主要影響通道活性、細胞間粘附、鈣粘蛋白結(jié)合等。通路主要涉及:神經(jīng)鞘糖脂生物合成-ganglio系列,腫瘤轉(zhuǎn)錄失調(diào),Toll樣受體信號通路和黑色素生成、催產(chǎn)素信號通路、肌動蛋白細胞骨架和HIPO信號通路的調(diào)控等。結(jié)論:構(gòu)建了肢端雀斑痣樣黑素瘤的lncRNA、mRNA表達譜。為后續(xù)研究提供了數(shù)據(jù)來源。第二部分linc37877對黑素瘤細胞A875生物學(xué)行為的影響及機制初探目的:研究linc37877對黑素瘤細胞的增殖、凋亡、侵襲和遷移能力的影響方法:首先在原代黑素細胞及4種黑素瘤細胞株(A375、A875、MV3、SK-MEL-28)中通過RT-qPCR實驗驗證linc37877的差異表達。采用RNA熒光原位雜交及核質(zhì)分離實驗明確linc37877的細胞定位。聯(lián)合應(yīng)用ASO技術(shù)及siRNA技術(shù)有效干擾黑素瘤細胞株中l(wèi)inc37877的表達,并評估干擾效率。CCK8法及EdU法檢測linc37877對黑素瘤細胞增殖的影響,流式凋亡實驗檢測linc37877對黑素瘤細胞凋亡的影響,劃痕實驗、Transwell實驗檢測linc37877對黑素瘤細胞侵襲及遷移能力的影響。Western-Blot法初步探尋linc37877影響侵襲及遷移的機制。結(jié)果:linc37877在黑素瘤細胞株中的表達水平明顯高于黑素細胞(P0.05),其中在黑素瘤細胞株A875中表達量最高。linc37877絕大部分分部于細胞核。干擾黑素瘤細胞linc37877表達后,linc37877的表達水平明顯降低(P0.05)。干擾linc37877表達后,A875細胞的增殖能力明顯下降(P0.05),凋亡顯著增加(P0.05)。腫瘤遷移及侵襲能力明顯下降(P0.05),基質(zhì)金屬蛋白酶家族MMP2、MMP9蛋白的表達下調(diào),而E-catenin,N-catenin及Vimentin無明顯改變。結(jié)論:linc37877主要定位于細胞核,能夠促進黑素瘤細胞的增殖,抑制凋亡,提高其侵襲和遷移能力。其侵襲能力的增加可能和MMP2、MMP9蛋白有關(guān),而與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化無關(guān)。
【圖文】：

Ｐ值越小，，所篩選的差異基因可靠性越高。６對樣本中共檢測到３９１５逡逑個差異表達的ｍＲＮＡ。其中，上調(diào)的ｍＲＮＡ有１１９２條，下調(diào)的ｍＲＮＡ有２７２３逡逑條（

量的差異倍數(shù)，縱坐標表示Ｐ值。綠色水平線代表Ｐ值為０．０５，兩條綠色豎直逡逑線代表的差異倍數(shù)分別是２和－２。紅點、綠點及黑點分別表示為上調(diào)的差異表逡逑ｍＲＮＡ、下調(diào)的差異表達ｍＲＮＡ及無顯著差異表達的ｍＲＮＡ邋（
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R739.5

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本文編號：2614229