【摘要】：研究背景及目的白癜風(fēng)是臨床上常見的一種色素脫失性皮膚疾病,發(fā)病機制尚不明確。臨床上將白癜風(fēng)分為進展期和穩(wěn)定期。對于穩(wěn)定期或者頑固的白癜風(fēng)患者,臨床經(jīng)常采用外科治療,通常包括自體移植、黑素細胞懸液移植、針刺、表皮磨削術(shù)等。其中,黑素細胞懸液移植原理是將黑素細胞直接移植于白癜風(fēng)脫色部位,以達到復(fù)色目的。但細胞懸液的流動性容易導(dǎo)致移植細胞流失或者分布不均,導(dǎo)致復(fù)色結(jié)果不理想。根據(jù)組織工程學(xué)原理,可利用生物材料定植搭載黑素細胞完成移植過程。本實驗采用京尼平交聯(lián)羧甲基殼聚糖制成水凝膠,培養(yǎng)人原代表皮黑素細胞。通過對不同配比制得的羧甲基殼聚糖水凝膠(CMCS-GEL)進行理化性質(zhì)測量,以及檢測接種于CMCS-GEL上原代黑素細胞的生長及增殖情況。探究出CMCS-GEL最適宜的制備條件,評估CMCS-GEL的生物相容性,為白癜風(fēng)的臨床治療提供實驗依據(jù)。方法將3%羧甲基殼聚糖水溶液與0.1%京尼平水溶液以1:0.5,1:1,1:1.5體積比混合,37℃恒溫交聯(lián)24小時,編號為GEL-1,2,3,制得厚度約為0.2cm的灰藍色水凝膠。羧甲基殼聚糖交聯(lián)京尼平水凝膠(CMCS-GEL)的理化性質(zhì)測量:傅里葉紅外光譜儀(FTIR)分別對羧甲基殼聚糖、京尼平和CMCS-GEL進行檢測分析;掃描電鏡下觀察CMCS-GEL形貌;旋轉(zhuǎn)流變儀測量各組CMCS-GEL的儲存模量G'和損耗模量G”;將凍干后的CMCS-GEL置于恒溫水中,間斷稱重,計算各組CMCS-GEL溶脹率。羧甲基殼聚糖交聯(lián)京尼平水凝膠(CMCS-GEL)的生物相容性與抗菌性測量:培養(yǎng)人原代表皮黑素細胞,并接種于各組CMCS-GEL上,CCK-8法檢測黑素細胞活性情況;光學(xué)顯微鏡及環(huán)境掃描電鏡下觀察CMCS-GEL上黑素細胞生長情況;細胞免疫熒光檢測CMCS-GEL上黑素細胞S-100蛋白表達。結(jié)果1.根據(jù)傅里葉紅外光譜儀(FTIR)結(jié)果可見,對比京尼平和羧甲基殼聚糖紅外圖譜,CMCS-GEL中化學(xué)基團和化學(xué)鍵變化表示基團之間進行反應(yīng),交聯(lián)反應(yīng)完成。2.掃描電鏡下,CMCS-GEL呈海綿蜂窩狀三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu),孔徑大小約為50μm。3.流變學(xué)結(jié)果顯示,各組CMCS-GEL G'與G”隨頻率變化而保持穩(wěn)定,且G'G”,均符合水凝膠的特征。GEL-1,2的屈服應(yīng)力值明顯高于GEL-3,GEL-2組顯示出比其余組別更好的抵抗應(yīng)力能力。4.GEL-1,2,3溶脹率依次遞減,分別約為350%,275%和248%,各組CMCS-GEL有較強的吸水能力。5.通過連續(xù)3日CCK-8法測量黑素細胞在CMCS-GEL上黑素細胞生長情況:GEL-1,2,3組在24小時細胞活性分別為0.975,0.98,0.892;48小時細胞活性為0.94,0.976,0.847;72小時細胞活性為0.848,0.969,0.748,并進行統(tǒng)計學(xué)分析,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。GEL-1,2,3細胞活性呈現(xiàn)總體下降趨勢,GEL-2組下降趨勢最為輕微。6.光學(xué)顯微鏡及環(huán)境掃描電鏡下觀察CMCS-GEL上黑素細胞生長情況:光學(xué)顯微鏡下顯示黑素細胞于接種8小時后即可貼壁。接種48小時的黑素細胞細胞核較大,樹突較短,核/質(zhì)較大。隨著黑素細胞的生長,核/質(zhì)減小,樹突變細變長,可見典型的黑素細胞形貌。7.S-100細胞免疫熒光顯示S-100蛋白均表達于普通培養(yǎng)板和GEL-2上的黑素細胞胞質(zhì)中。普通培養(yǎng)板上黑素細胞樹突細長,胞體較小,相鄰細胞交織成網(wǎng)。CMCS-GEL上接種的細胞輪廓稍模糊,胞體較大,樹突數(shù)量不如普通培養(yǎng)板多。結(jié)論羧甲基殼聚糖-京尼平水凝膠(CMCS-GEL)具有抵抗應(yīng)力的能力,并具有較強的吸水性。良好的生物相容性可以使黑素細胞正常生長并保持細胞形態(tài),維持黑素細胞正常功能。
【圖文】：

邐ＮＨＣＨ，ＣＯＯＨ邋ＮＨ，糖（Ｏ－ＣＭＣＳ）邐Ｎ襲甲基殼聚糖（Ｎ．ＣＭＣＳ）逡逑「邋ＣＨ２ＣＫ１．ｈＣＯＯＨ邋ＣＨ２ＯＨ邐＾逡逑Ｊ—＼＼＼邋ｈ／＾°＼Ｎ逡逑／ｏｈ邋ｎ邋Ｖ邋（邋ｏｈ邋ｙ逡逑ｔ；逡逑ｎｈ２邐ｎｈｃｈ＾ｃｏｏｈ逡逑ｎ，ｏ－羧甲基殼聚糖（ｘｏ－ｃｍｃｓ）逡逑基殼聚糖，，Ｎ－羧甲基殼聚糖，Ｎ，0－羧甲基殼聚糖結(jié)ｒｍｕｌａ邋ｏｆ邋Ｏ－Ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌ邋Ｃｈｉｔｏｓａｎ，邋Ｎ－邋Ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌ邋Ｎ？０－邋Ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌ邋Ｃｈｉｔｏｓａｎ逡逑

戊二醛邐京尼乎逡逑來邋源邐化學(xué)合成邐生物提取逡逑價格邐較低邐高逡逑交聯(lián)能力邐較好邐好逡逑交聯(lián)結(jié)構(gòu)邐網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)邐環(huán)狀結(jié)構(gòu)逡逑交聯(lián)制品的穩(wěn)定性邐一舨邐好逡逑細胞毒性（基因＃性）邐高邐很低逡逑生物相容性邐較差邐好逡逑抗降解能力邐邐較好逡逑表１戊二醛與京尼平的比較逡逑Ｔａｂ．ｌ邋Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ邋ｏｆ邋ｇｌｕｔａｒａｌｄｅｈｙｄｅ邋ａｎｄ邋ｇｅｎｉｐｉｎ逡逑
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R758.41

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5 胡琦s

本文編號：2613186