【摘要】：目的:銀屑病是一種慢性炎癥性皮膚病,目前還沒有完全治愈的策略。脂氧素A4(LXA4)和5(S)-6(R)-7-三羥基庚酸甲酯(BML-111)具有強(qiáng)效的抗炎和促消退特性。高遷移率族蛋白1(HMGB1)作為炎性細(xì)胞因子在銀屑病患者皮損和外周血中被檢測(cè)到高表達(dá),可能參與銀屑病的發(fā)病機(jī)制。因此,我們研究LXA4或BML-111對(duì)脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的角質(zhì)形成細(xì)胞炎癥反應(yīng)和咪喹莫特(IMQ)誘導(dǎo)的小鼠銀屑病樣皮炎中HMGB1信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng)和炎癥的影響。方法:1.IMQ誘導(dǎo)銀屑病樣皮炎模型,BALB/c小鼠隨機(jī)分為三組:(1)IMQ+BML-111組:小鼠接受劑量為1mg/kg/天的BML-111腹腔注射,連續(xù)7天應(yīng)用IMQ乳膏。(2)IMQ組:小鼠給予IMQ處理,同時(shí)接受與IMQ+BML-111組相同體積的生理鹽水腹腔注射。(3)正常組:小鼠腹腔注射生理鹽水,背部皮膚外用凡士林。2.為了評(píng)估小鼠背部皮損炎癥程度,一項(xiàng)基于臨床銀屑病面積和嚴(yán)重程度指數(shù)(PASI)的客觀評(píng)分系統(tǒng)被應(yīng)用。3.免疫熒光、Western blot、q RT-PCR共同檢測(cè)小鼠皮損組織中HMGB1的表達(dá)量。4.應(yīng)用Western blot和q RT-PCR從蛋白和m RNA水平上檢測(cè)皮膚中HMGB1下游受體(晚期糖基化終產(chǎn)物受體(RAGE)和toll樣受體4(TLR4))及其信號(hào)通路的表達(dá)和激活。5.q RT-PCR從m RNA水平上顯示皮損中炎性細(xì)胞因子(IL-1β、TNF-α、IFN-γ、IL-6、IL-17a、IL-17c、IL-23和IL-22)的表達(dá)量。采用ELISA的方法檢測(cè)小鼠外周血血清中炎癥因子(IL-1β、TNF-α、IL-17和IL-23)的表達(dá)水平。6.角質(zhì)形成細(xì)胞分為四組:(1)NC組:正常培養(yǎng);(2)LXA4組:僅給予LXA4刺激;(3)LPS組:僅給予LPS刺激;(4)LXA4+LPS組:LXA4預(yù)處理30分鐘后給予LPS刺激。7.Western blot檢測(cè)角質(zhì)形成細(xì)胞胞漿和胞核中HMGB1的表達(dá)量;q RT-PCR評(píng)估角質(zhì)形成細(xì)胞中HMGB1的表達(dá)水平;ELISA法測(cè)定角質(zhì)形成細(xì)胞處理24小時(shí)后培養(yǎng)上清中HMGB1的濃度;Co-IP檢測(cè)細(xì)胞中HMGB1乙酰化修飾水平。8.Western blot和q RT-PCR檢測(cè)角質(zhì)形成細(xì)胞中RAGE和TLR4及其信號(hào)通路(p-ERK1/2和NF-κB p65)的活化情況。結(jié)果:在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中,我們發(fā)現(xiàn)用BML-111干預(yù)可明顯減輕IMQ誘導(dǎo)的銀屑病樣皮炎的形態(tài)學(xué)和組織學(xué)變化;抑制皮損組織中HMGB1從細(xì)胞核向細(xì)胞質(zhì)的轉(zhuǎn)位和表達(dá);下調(diào)HMGB1受體TLR4和RAGE及其下游信號(hào)通路p-ERK1/2和NF-κB p65;顯著抑制IMQ誘導(dǎo)的皮損組織中促炎性細(xì)胞因子(IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-17a、IL-17c、IL-23和IL-22)m RNA表達(dá)增高效應(yīng),可輕度降低IFN-γ的表達(dá),但該差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;IMQ組小鼠外周血血清中高表達(dá)促炎性細(xì)胞因子IL-1β、TNF-α、IL-17和IL-23,BML-111干預(yù)可明顯降低TNF-α、IL-17和IL-23的表達(dá)水平。在體外實(shí)驗(yàn)中,我們的研究顯示LXA4抑制HMGB1在LPS誘導(dǎo)的角質(zhì)形成細(xì)胞中的轉(zhuǎn)位和表達(dá),且這種抑制效應(yīng)可能通過影響HMGB1的乙�；揎椝�。LXA4對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞中HMGB1/RAGE和HMGB1/TLR4信號(hào)通路均有抑制效應(yīng)。結(jié)論:我們的研究結(jié)果提示LXA4及其類似物可能是銀屑病的潛在治療介質(zhì),其機(jī)制可能通過調(diào)節(jié)HMGB1的轉(zhuǎn)位和表達(dá)。
【圖文】：

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方案示意圖

41圖 2：BML-111 改善 IMQ 誘導(dǎo)的小鼠銀屑病樣皮炎的形態(tài)學(xué)改變。（A）連續(xù)給藥 8 天后小鼠的背部皮膚代表性宏觀視圖。（B）每天評(píng)估背部皮膚的紅斑、鱗屑和增厚表現(xiàn); 通過這三個(gè)獨(dú)立的指標(biāo)計(jì)算臨床 PASI 評(píng)分（分值范圍從 0 到12）。數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示（n = 8）。**P<0.01 和*P<0.05 為與 IMQ 組小鼠相比。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R758.63

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 胡楓;馮愛平;劉欣欣;張頌;徐俊濤;王新;鐘雪蓮;何蒙文;陳宏翔;;Lipoxin A4 Inhibits Lipopolysaccharide-induced Production of Inflammatory Cytokines in Keratinocytes by Up-regulating SOCS2 and Down-regulating TRAF6[J];Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences);2015年03期

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本文編號(hào)：2605232