【摘要】： 前言 紫外線是波長為200～400 nm的電磁波,其中波長為200～290 nm的紫外線稱為短波紫外線(UVC),波長為290～320nm的紫外線稱為中波紫外線(UVB),波長為320～400nm的紫外線稱為長波紫外線(UVA)。UVC對人類皮膚的損害作用最大,但由于太陽輻射到地球表面的UVC大部分被大氣層吸收,而達不到地球表面,所以UVC對人類皮膚的作用可被忽視。紫外線引起的皮膚損傷主要與UVA及UVB有關(guān),其中UVB是造成皮膚損傷的主要原因。近年來由于大氣臭氧層的破壞,輻射到地球表面的紫外線逐漸增多,由此引起的各種皮膚病明顯增多,長期紫外線照射能引起皮膚的光老化及皮膚癌等。怎樣有效地預防及治療紫外線引起的皮膚損傷,已成為國際皮膚界關(guān)注的課題,尤其是有關(guān)UVB引起皮膚光損害的研究日益受到人們的關(guān)注,并正成為當今的研究熱點。 為了減輕紫外線對皮膚的多種損傷,抗氧化劑的應用已成為人們防護皮膚和治療皮膚病的有效選擇。有關(guān)于這方面的研究正在進行當中。紫外線照射人及動物的皮膚后,能在人及動物的皮膚中產(chǎn)生較多的氧自由基,這已被大量的研究所證實。正常情況下,體內(nèi)產(chǎn)生的氧自由基能被細胞內(nèi)抗氧化系統(tǒng)轉(zhuǎn)化、分解掉,當紫外線照射后,產(chǎn)生較多的氧自由基時,體內(nèi)的抗氧化系統(tǒng)遭到破壞,這些自由基則引起皮膚組織內(nèi)DNA,脂質(zhì)、蛋白質(zhì)等成分的損傷,破壞細胞結(jié)構(gòu)及各種生物代謝功能,從而引起光老化,誘發(fā)皮膚癌等。針對這種由氧自由基介導的紫外線引起的皮膚損傷,近年來報道了較多的有關(guān)抗紫外線氧化性損傷的物質(zhì),如:SOD,生育酚,抗壞血酸,β-胡蘿卜素,過氧化氫酶,維甲酸等等。這些物質(zhì)有的在實驗室動物及培養(yǎng)的細胞系統(tǒng)有很好的抗紫外線損傷作用,但在人體上的效果不確切,有的需要較高的血液濃度才能起到抗紫外線損傷的作用,而長期維持這種高濃度對人體是有害的。 氮氧化物是一種常用的生物物理制劑,與SOD等相比,氮氧化物具有分子量小,穩(wěn)定性強,細胞膜通透性好等諸多優(yōu)點。國外的研究結(jié)果顯示氮氧化物具有明顯的抗氧化性損傷的作用。4-羥基-2,2,6,6-四甲基氧基哌啶(Tempol,分子式C_9H_(18)NO_2)是一種在抗氧化研究中常用的氮氧化物,我們早期的實驗已經(jīng)證實,Tempol對于紫外線照射引起的皮膚光老化具有防護作用。 本研究共分為兩部分,分別以HaCaT細胞和活體昆明無毛小鼠為UVB照射的體外和體內(nèi)實驗對象,利用Tempol為光保護劑,建立了Tempol抗UVB照射所致皮膚光老化的實驗模型;通過分析實驗模型各種觀察指標的變化,探討Tempol抗UVB照射所致光老化的作用機制,為防治光老化性疾病提供實驗依據(jù)。 第一部分Tempol對中波紫外線照射所致HaCaT細胞光損傷防護作用機制的研究 背景 紫外線分為A、B、C三種(UVA、UVB、UVC)。能穿過大氣層達到地球的只有UVA和UVB兩種。UVA的波長為320～400nm;UVB的波長為290～320nm。表皮位于皮膚的最外層,是機體的第一道天然保護屏障,使機體免受外界物理、化學以及微生物侵害,維持機體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定。這些作用主要是由占表皮細胞90%以上的角質(zhì)形成細胞完成�，F(xiàn)代研究證明角質(zhì)形成細胞不僅是機體的保護細胞,而且參與各種細胞生物學過程如免疫、炎癥、增生以及腫瘤轉(zhuǎn)化等。有資料表明:照射到皮膚的95%的紫外線是被角質(zhì)形成細胞吸收的。國際上已分別建立了UVA、UVB對角質(zhì)形成細胞氧化損傷的模型,并進行了研究,主要集中在免疫抑制、DNA損傷、細胞凋亡、炎癥等方面。UVB被認為是太陽光中引起非黑素皮膚癌最主要的紫外線。在美國每年有100多萬人被診斷患有皮膚癌,平均每小時有一個病人死于皮膚源性惡性腫瘤,預計到2060年,美國的皮膚癌患者將達4000萬人。到目前為止,我國雖然還沒有相關(guān)的具體統(tǒng)計數(shù)據(jù),但對紫外線誘發(fā)的皮膚疾病已引起了學者們的高度重視,尤其是有關(guān)UVB引起皮膚光損害的研究日益受到人們的關(guān)注,并正成為當今的研究熱點。 為了減輕紫外線對皮膚的多種損傷,抗氧化劑的應用已成為人們防護皮膚和治療皮膚病的有效選擇。有關(guān)這方面的研究正在進行當中。Stewart MS和Cameron GS等發(fā)現(xiàn),在預先應用維生素C或維生素E后,可以抑制UVB照射角質(zhì)形成細胞后引起的DNA損傷。多個研究發(fā)現(xiàn),在應用抗壞血酸或羥基乙酸后可以抑制UVB照射角質(zhì)形成細胞引起的與凋亡相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子AP-1、C-fos的表達。Valeria M等發(fā)現(xiàn),抗氧化劑維生素C可以通過抑制紫外線誘導的角質(zhì)形成細胞的JNK的表達,抑制AP-1的表達,從而抑制角質(zhì)形成細胞的凋亡。這些物質(zhì)有的在實驗室動物及培養(yǎng)的細胞系統(tǒng)有很好的抗紫外線損傷作用,但在人體上的效果不確切,有的需要較高的血液濃度才能起到抗紫外線損傷的作用,而長期維持這種高濃度對人體是有害的。氮氧化物是一種常用的生物物理制劑,自1988年Samuni A.發(fā)現(xiàn)其有類似于SOD的歧化超氧陰離子的作用后,其抗氧化性損傷的功能受到了重視。與SOD等相比,氮氧化物具有分子量小,穩(wěn)定性強,細胞膜通透性好等諸多優(yōu)點。國外實驗室曾先后將氮氧化物應用于細菌、培養(yǎng)的心肌細胞、離體心臟灌注及活體動物等研究體系中,觀察其抗氧化性損傷的作用,研究結(jié)果顯示氮氧化物具有明顯的抗氧化性損傷的作用。4-羥基-2,2,6,6-四甲基氧基哌啶(Tempol,分子式C_9H_(18)NO_2)是一種在抗氧化研究中常用的氮氧化物,我們早期的實驗已經(jīng)證實,Tempol對于紫外線照射引起的皮膚光損傷具有防護作用。 HaCaT細胞是角質(zhì)形成細胞系細胞,是一種被轉(zhuǎn)化但非致癌的細胞,由人腹部表皮衍化而成,保留了所有的表皮分化能力,與正常角質(zhì)形成細胞非常相似,它在生物學特性上與正常人角質(zhì)形成細胞相似,所以我們用30mJ/cm~2的UVB照射HaCaT細胞以建立UVB對角質(zhì)形成細胞光損傷的模型,目的是模仿UVB對表皮的角質(zhì)形成細胞的光損傷;同時以Tempol為光防護劑,探討Tempol對UVB照射所致HaCaT細胞光損傷防護作用的機制及其影響因素,在國內(nèi)外還是首次,為Tempol和其它的抗氧化劑對UVB照射所致角質(zhì)形成細胞光損傷防護作用的研究提供了一條嶄新的思路,更為Tempol對UVB照射所致HaCaT細胞光損傷防護作用機制的研究奠定了理論基礎(chǔ)。 目的 1.建立UVB照射損傷HaCaT鈿胞的光損傷模型,觀察Tempol對UVB照射所致HaCaT細胞光損傷防護作用的機制; 2.觀察Tempol對UVB照射后HaCaT細胞增殖效應的影響及其影響因素的研究; 3.觀察Tempol對UVB照射后HaCaT細胞細胞凋亡的影響及其影響因素的研究; 4.觀察Tempol對UVB照射后HaCaT細胞FoxO3a mRNA表達的影響及其影響因素的研究。 方法 1.HaCaT細胞的光損傷模型的建立 1.1 HaCaT細胞培養(yǎng) 用含10%胎牛血清(FBS)的DMEM置37℃CO_2培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。 1.2紫外線光源 UVB燈管,波長范圍290～320nm,峰值297 nm,40W,4只,4只燈管制成燈箱。 2.Tempol對光損傷防護作用實驗 2.1 HaCaT細胞分組 將HaCaT細胞分為七組,分別標記為A、B、C、D、E、F和G組。 A組:為正常對照組,不加入Tempol,不照射UVB; B組:為UVB照射對照組,不加入Tempol,只照射UVB; C組:為含0.5mMTempol的實驗組; D組:為含1mMTempol的實驗組; E組:為含2mMTempol的實驗組; F組:為含4mMTempol的實驗組; G組:為含8mMTempol的實驗組。 2.2細胞培養(yǎng)和照射劑量 HaCaT細胞在培養(yǎng)板上生長到每孔匯合至80%以上時,從細胞培養(yǎng)箱中取出,無菌條件下加入Tempol。正常對照組和照射對照組只加角質(zhì)形成細胞專用培養(yǎng)基以使各孔的終體積相等。細胞放入37℃、5%CO_2細胞培養(yǎng)箱中孵育1h后,除正常對照組外,其余六組均照射UVB,照射劑量為30mJ/cm~2,光源與細胞的垂直照射距離為15cm。 2.3 HaCaT細胞增殖效應的檢測 HaCaT細胞經(jīng)UVB照射損傷并孵育18小時后,加入MTT繼續(xù)培養(yǎng)4h,再加入二甲基亞砜,使結(jié)晶物充分溶解,在酶聯(lián)免疫檢測儀490nm處測量各孔吸光值。 2.4 HaCaT細胞凋亡率的檢測 HaCaT細胞經(jīng)UVB照射損傷并孵育18小時后,經(jīng)消化、離心,調(diào)節(jié)細胞濃度為1×10~6/ml,加入Annexin V-FITC和PI溶液,流式細胞儀分析,測定HaCaT細胞的凋亡率。 2.5 HaCaT細胞FoxO3a mRNA表達的檢測 HaCaT細胞經(jīng)UVB照射損傷并孵育18小時后,將所收集的細胞提取總RNA,經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄反應得到cDNA,通過RT-PCR技術(shù)檢測FoxO3amRNA的表達。 結(jié)果 1.Tempol對UVB照射后HaCaT細胞增殖效應的影響 A、C、D、E和F組OD值顯著升高,與B和G組比較,差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01);其中A與C組OD值升高最明顯,兩組之間比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05),D、E和F組OD值依次遞減,各組之間比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01);而B和G組比較,差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。 2.Tempol對UVB照射后HaCaT細胞凋亡率的影響 B、C、D、E、F和G組HaCaT細胞凋亡率顯著升高,與A比較,差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01);其中B組HaCaT細胞凋亡率升高最明顯,其余各組HaCaT細胞凋亡率隨Tempol藥物濃度的增加而升高,各組之間比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。 3.Tempol對UVB照射后HaCaT細胞FoxO3a mRNA表達的影響 B、C、D、E、F和G組HaCaT細胞FoxO3a mRNA表達顯著升高,與A組比較,差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01);其中B組HaCaT細胞FoxO3a mRNA表達升高最明顯,其余各組HaCaT細胞FoxO3a mRNA表達隨Tempol藥物濃度的增加而升高,各組之間比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。 結(jié)論 一定濃度范圍的Tempol(0.5mM,1mM,2mM,4mM,8mM)對UVB照射所致HaCaT細胞光損傷具有防護作用,其作用機制可能與提高HaCaT細胞增殖效應,抑制HaCaT細胞凋亡以及抑制HaCaT細胞FoxO3a過度表達有關(guān);其保護作用隨Tempol濃度的升高而降低,0.5mMTempol的防護作用最強。 第二部分Tempol抗中波紫外線照射所致無毛鼠皮膚光老化的作用機制及其影響因素的探討 背景 近年來由于大氣臭氧層的破壞,輻射到地球表面的紫外線逐漸增多,由此引起的各種皮膚病明顯增多.長期紫外線照射能引起皮膚的光老化及皮膚癌等。怎樣有效地預防及治療紫外線引起的皮膚損傷,已成為國際皮膚界關(guān)注的課題。紫外線是波長為200-400 nm的電磁波,其中波長為200-290 nm的紫外線稱為短波紫外線(UVC),波長為290-320nm的紫外線稱為中波紫外線(UVB),波長為320-400nm的紫外線稱為長波紫外線(UVA)。UVC對人類皮膚的損害作用最大,但由于太陽輻射到地球表面的UVC大部分被大氣層吸收,而達不到地球表面,所以UVC對人類皮膚的作用可被忽視。日光中同時含有UVA、UVB,紫外線引起的皮膚損傷主要與UVA及UVB有關(guān),其中UVB是造成皮膚損傷的主要原因。 紫外線照射人及動物的皮膚后,能在人及動物的皮膚中產(chǎn)生較多的氧自由基,這已被大量的研究所證實。紫外線照射皮膚后,氧自由基的產(chǎn)生是由內(nèi)源性光敏分子吸收光子,而后變成激活的光敏物,通過電子或氫原子的傳遞與底物分子反應生成的。正常情況下,體內(nèi)產(chǎn)生的氧自由基能被細胞內(nèi)抗氧化系統(tǒng)轉(zhuǎn)化、分解掉,當紫外線照射后,產(chǎn)生較多的氧自由基時,體內(nèi)的抗氧化系統(tǒng)遭到破壞,這些自由基則引起皮膚組織內(nèi)DNA、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)等成分的損傷,破壞細胞結(jié)構(gòu)及各種生物代謝功能,從而引起光老化,誘發(fā)皮膚癌等。針對這種由氧自由基介導的紫外線引起的皮膚損傷,近年來報道了較多的有關(guān)抗紫外線氧化性損傷的物質(zhì),如:生育酚,抗壞血酸,β-胡蘿卜素,過氧化氫酶,SOD,維甲酸等等。這些物質(zhì)有的在實驗室動物及培養(yǎng)的細胞系統(tǒng)有很好的抗紫外線損傷作用,但在人體上的效果不確切,有的需要較高的血液濃度才能起到抗紫外線損傷的作用,而長期維持這種高濃度對人體是有害的。 氮氧化物是一種常用的生物物理制劑,自1988年Samuni A.發(fā)現(xiàn)其有類似于SOD的歧化超氧陰離子的作用后,其抗氧化性損傷的功能受到了重視。與SOD相比,氮氧化物具有分子量小,穩(wěn)定性強,細胞膜通透性好等諸多優(yōu)點。國外實驗室曾先后將氮氧化物應用于細菌、培養(yǎng)的心肌細胞、離體心臟灌注及活體動物等研究體系中,觀察其抗氧化性損傷的作用,研究結(jié)果顯示氮氧化物具有明顯的抗氧化性損傷的作用。4-羥基-2,2,6,6-四甲基氧基哌啶(Tempol,分子式C_9H_(18)NO_2)是一種在抗氧化研究中常用的氮氧化物,我們早期的實驗已經(jīng)證實,Tempol對于紫外線照射引起的皮膚光老化具有防護作用。 因此本研究以活體昆明無毛小鼠為UVB照射的實驗對象,利用Tempol為光保護劑,建立了Tempol抗UVB照射所致皮膚光老化的動物實驗模型;通過對無毛小鼠皮膚外觀狀態(tài)變化、皮膚膠原纖維和彈力纖維結(jié)構(gòu)變化、皮膚超微結(jié)構(gòu)變化、皮膚丙二醛和羥脯氨酸含量變化以及皮膚突變型p53蛋白表達的觀察,對UVB引起模型動物的各種皮膚觀察指標變化進行分析,探討Tempol抗UVB照射所致光老化的作用機制,并首次探討了時間因素對Tempol外用抗UVB照射所致光老化作用的影響,為防治光老化性疾病提供了實驗依據(jù)。 目的 1.觀察無毛小鼠外用Tempol后不同時段照射UVB對皮膚外觀狀態(tài)變化的影響; 2.觀察無毛小鼠外用Tempol后不同時段照射UVB對皮膚膠原纖維和彈力纖維結(jié)構(gòu)變化的影響; 3.觀察無毛小鼠外用Tempol后不同時段照射UVB對皮膚超微結(jié)構(gòu)變化的影響; 4.觀察無毛小鼠外用Tempol后不同時段照射UVB對皮膚丙二醛和羥脯氨酸含量變化的影響; 5.觀察無毛小鼠外用Tempol后不同時段照射UVB對皮膚突變型p53蛋白表達的影響。 6.探討時間因素對Tempol抗光老化作用的影響。 方法 1.光老化動物實驗模型的建立 1.1實驗動物 清潔級昆明種無毛小白鼠72只,鼠齡6～8周,雌雄各半,北京大學醫(yī)學部實驗動物科學部提供,體重20～25g,按同窩、同性別、同條件下飼養(yǎng)。 1.2紫外線光源 UVB燈管,波長范圍290～320nm,峰值297 nm,40W,4只。將4只燈管制成燈箱,照射高度為50cm。 2.Tempol抗光老化實驗 2.1動物分組 將72只昆明種無毛小鼠隨機分為六組,每組12只,分別標記為A、B、C、D、E和F組。 A組:為正常對照組,外用三蒸水,不照射UVB; B組:為UVB照射對照組,外用三蒸水,照射UVB; C組:為外用0.36%Tempol 1h后照射UVB實驗組; D組:為外用0.36%Tempol 2h后照射UVB實驗組; E組:為外用0.36%Tempol 4h后照射UVB實驗組; F組:為外用0.36%Tempol 8h后照射UVB實驗組。 2.2照射劑量 除正常對照組外,其余五組均隔日照射UVB一次,照射劑量為0.111J/(cm~2·次),共14周,總劑量5.45J/cm~2。 2.3無毛小鼠皮膚外觀狀態(tài)變化的檢測 選擇昆明無毛小鼠背部皮膚2×3cm~2范圍,外用三蒸水或0.36%Tempol后,按上述分組情況進行紫外線照射實驗,隔周記錄皮膚外觀狀態(tài)并進行評分,共14周。 2.4無毛小鼠皮膚膠原纖維和彈力纖維變化的檢測 末次紫外線照射實驗結(jié)束后,頸椎脫臼法將各組動物處死,用銳利刀片取其背部照射區(qū)面積0.5cm~2大小的皮膚組織,經(jīng)固定、脫水、包埋、切片、HE及間苯二酚品紅法染色,在顯微鏡下觀察真皮內(nèi)膠原纖維和彈力纖維含量的變化及病理形態(tài)學改變。 2.5無毛小鼠皮膚成纖維細胞和膠原纖維超微結(jié)構(gòu)變化的檢測 在常規(guī)組織病理取材的同時,取背部0.1cm~3的皮膚組織2～3塊,經(jīng)固定、脫水、包埋、定位,制成50nm超薄切片,醋酸鈾、檸檬酸鉛雙重染色,HITACHI透射電子顯微鏡觀察成纖維細胞和膠原纖維超微結(jié)構(gòu)的變化。 2.6無毛小鼠皮膚丙二醛(MDA)和羥脯氨酸(HYP)含量變化的檢測 2.6.1組織勻漿的制備和MDA含量的檢測 在常規(guī)組織病理取材的同時,取各組無毛小鼠背部照射區(qū)皮膚,去除皮下脂肪稱重,制成10%組織勻漿;取0.1ml 10%組織勻漿,先后加入1、2、3號MDA測定試劑并混勻,95℃水浴中40min,3500-4000r/min,離心10min,取上清液,分光光度計532nm比色,計算MDA含量。 2.6.2 HYP含量的檢測 在常規(guī)組織病理取材的同時,取各組無毛小鼠背部照射區(qū)皮膚,精確稱取皮膚(濕重)30-100mg放入試管,加入1ml水解液,加蓋后95℃或沸水浴水解20min,調(diào)PH值至6.0-6.8左右,加蒸餾水至10ml,取3ml稀釋的水解液加活性炭混勻,3500r/min,離心10min,取上清液1ml先后加入試劑1、2、3并混勻,60℃水浴中15min,冷卻后3500r/min,離心10min,取上清,分光光度計550nm比色,計算HYP含量。 2.7無毛小鼠皮膚突變型p53蛋白表達的檢測 在常規(guī)組織病理取材的同時,取各組無毛小鼠背部照射區(qū)皮膚,進行突變型p53蛋白表達的免疫組化檢測,檢測結(jié)果經(jīng)美國Leica DMI4000B圖像處理系統(tǒng)進行圖像的積分吸光度(A)分析。 結(jié)果 1.無毛小鼠皮膚外觀狀態(tài)的變化 B、C、E和F組無毛小鼠皮膚外觀評分均顯著升高,與A和D組比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01);其中B與F組皮膚外觀評分升高最明顯,C與E組皮膚外觀評分升高次之,而A與D組比較、B與F組比較、C與E組比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。 2.無毛小鼠皮膚膠原纖維和彈力纖維的變化 無毛小鼠皮膚切片經(jīng)HE常規(guī)染色及間苯二酚品紅法染色后在光學顯微鏡下觀察,A和D組,膠原纖維及彈力纖維粗細較均勻,沒有明顯斷裂及排列紊亂現(xiàn)象。B、C、E和F組表皮角化過度,乳頭層變平;真皮內(nèi)膠原纖維及彈力纖維均增粗、斷裂、排列紊亂。 3.無毛小鼠皮膚成纖維細胞和膠原纖維超微結(jié)構(gòu)的變化 電鏡下可見,A組,真皮成纖維細胞及膠原纖維結(jié)構(gòu)未見明顯異常;D組真皮內(nèi)成纖維細胞的細胞核內(nèi)異染色質(zhì)輕度聚集、膠原纖維略腫脹,纖維間間隙略增大,境界仍較清楚,極少數(shù)纖維出現(xiàn)斷裂、溶解現(xiàn)象;B、C、E和F組真皮內(nèi)成纖維細胞的細胞核固縮、凋亡,膠原纖維結(jié)構(gòu)紊亂,纖維間境界模糊不清,部分纖維出現(xiàn)溶解現(xiàn)象。 4.無毛小鼠皮膚丙二醛(MDA)和羥脯氨酸(HYP)含量的變化 MDA含量:B、C、E和F組無毛小鼠皮膚的MDA含量均顯著升高,與A和D組比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01);其中B與F組皮膚MDA含量升高最明顯,C與E組皮膚MDA含量升高次之,而A與D組比較、B與F組比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。 HYP含量:B、C、E和F組無毛小鼠皮膚的HYP含量均顯著下降,與A和D組比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01);其中B與F組皮膚HYP含量下降最明顯,C與E組皮膚HYP含量下降次之,而A與D組比較、B與F組比較、C與E組比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。 5.無毛小鼠皮膚突變型p53蛋白表達的變化 經(jīng)免疫組化法染色后觀察,B、C、E和F組無毛小鼠表皮突變型p53蛋白的表達顯著升高,與A和D組比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01);其中B與F組表皮突變型p53蛋白表達的升高最明顯,C與E組突變型p53蛋白表達的升高次之,而A與D組比較、B與F組比較、C與E組比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。 6.時間因素對Tempol抗光老化作用的影響 經(jīng)過分析上述檢測數(shù)據(jù),結(jié)果顯示外用0.36%的Tempol后,1.4小時之內(nèi)對UVB所致無毛小鼠皮膚光老化具有一定的防護作用,用藥后2小時左右的防護作用更好,8小時之后已無防護作用。 結(jié)論 外用0.36%的Tempol對UVB照射所致無毛小鼠的皮膚光老化具有防護作用,其防護作用受時間因素影響,有效防護時段在用藥后1-4小時之間,最佳防護時段在用藥后2小時左右。Tempol對UVB照射所致無毛小鼠皮膚光老化的作用機制可能與抑制真皮膠原纖維及彈力纖維降解、變性,抑制真皮成纖維細胞凋亡,抑制皮膚脂質(zhì)過氧化反應,提高膠原蛋白含量以及抑制表皮p53基因突變有關(guān)。
【圖文】：

透射電鏡:B組真皮膠原纖維纖維出現(xiàn)嚴重斷裂、溶解現(xiàn)象

26透射電鏡顯示:C組真皮成纖維細胞可見細胞核收縮、核膜水腫，色質(zhì)明顯聚集，，形成板塊化;線粒體體積膨大，出現(xiàn)線粒體內(nèi)峭的溶皮膠原纖維境界模糊不清，出現(xiàn)膠原纖維斷裂、溶解現(xiàn)象。(xs000倍
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2008
【分類號】：R758.1

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10 林莉君;;夏季,小心皮膚老得快[J];今日科苑;2011年16期

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1 黃茂芳;楊慧蘭;劉仲榮;;中波紫外線對人血小板線粒體活性影響的研究[A];2011全國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學術(shù)會議論文匯編[C];2011年

2 李福民;陸潔;段西凌;;窄譜中波紫外線對血管內(nèi)皮細胞的作用機制研究[A];2010全國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學術(shù)會議論文匯編[C];2010年

3 吳波;陳孝頂;夏丹;陳莉;路永紅;;中藥浴聯(lián)合窄譜中波紫外線治療尋常型銀屑病療效觀察[A];2011全國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學術(shù)會議論文匯編[C];2011年

4 龐進;楊曉華;楊琳;盧春麗;;火針聯(lián)合窄譜中波紫外線照射治療馬拉色菌毛囊炎52例[A];中華中醫(yī)藥學會皮膚科分會第七次學術(shù)年會、2010年重慶四川中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學術(shù)年會、全國中西醫(yī)結(jié)合診療皮膚性病新進展新技術(shù)學習班論文匯編[C];2010年

5 夏濟平;宋秀祖;畢志剛;;中波紫外線對皮膚角質(zhì)形成細胞和成纖維細胞產(chǎn)生MMP—1和MMP—3的影響[A];2003中國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學術(shù)會議論文匯編[C];2003年

6 周靜;丁楊峰;易雪梅;;小劑量窄譜中波紫外線治療紅斑期蕈樣肉芽腫一例[A];2010全國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學術(shù)會議論文匯編[C];2010年

7 楊靈霞;楊桂蘭;杜華;鄭曉紅;;311nm中波紫外線治療483例白癜風臨床療效觀察[A];2010全國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學術(shù)會議論文匯編[C];2010年

8 羅素菊;鄭焱;彭振輝;王國榮;周少娜;李曉莉;;窄譜中波紫外線和/或阿維A對角質(zhì)形成細胞異維A酸受體α mRNA表達的影響[A];2010全國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學術(shù)會議論文匯編[C];2010年

9 胡燕;;中波紫外線聯(lián)合涼血消風顆粒劑治療玫瑰糠疹69例[A];2003中國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學術(shù)會議論文匯編[C];2003年

10 周炳榮;駱丹;吉璽;;中波紫外線及沒食子兒茶素沒食子酸酯對樹突狀細胞功能的影響[A];2006中國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學術(shù)會議論文匯編[C];2006年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 北京協(xié)和醫(yī)院皮膚科 陳金波　孫秋寧;SPF200防曬霜能用嗎？[N];健康時報;2009年

2 張云;誰能擋得往紫外線[N];山西經(jīng)濟日報;2000年

3 夢娜;夏日護膚需防曬[N];山西日報;2002年

4 孝文;掃描動物求愛秘訣[N];北京日報;2009年

5 湖南省婦幼保健院美容中心 盛湘云;紫外線與防曬[N];大眾衛(wèi)生報;2001年

6 曉焦;明明白白護膚 選防曬品當心[N];市場報;2000年

7 慕景;臭氧層：地球保護之傘[N];中國綠色時報;2003年

8 記者李冬玲王楊二;SPF值用儀器法測定不科學[N];中國質(zhì)量報;2003年

9 本報記者 林莉君;夏季,小心皮膚老得快[N];科技日報;2011年

10 阿歡;傷愈后皮膚白斑怎治療？[N];健康時報;2003年

相關(guān)博士學位論文 前10條

1 陳宏泉;Tempol抗中波紫外線照射所致皮膚光老化的作用機制及影響因素的探討[D];山東大學;2008年

2 史飛;紅景天甙對皮膚光老化干預作用及其機理探討[D];北京中醫(yī)藥大學;2007年

3 康順愛;姜黃素抗紫外線輻射損傷保護作用及其機制[D];吉林大學;2009年

4 單士軍;苡仁提取物對中波紫外線照射后HaCaT細胞水通道蛋白3表達的調(diào)節(jié)及意義[D];中國醫(yī)科大學;2009年

5 徐宏慧;檀香油對中波紫外線引起人體皮膚光損傷的防護作用[D];中國醫(yī)科大學;2009年

6 馬晶波;紅景天甙對黑素細胞生物學作用的研究及美白中草藥篩選過程中一些問題的探討[D];復旦大學;2003年

7 陳文琦;p53在中波紫外線誘導人皮膚成纖維細胞提前衰老中的調(diào)控作用及腫瘤抑制作用的研究探討[D];南京醫(yī)科大學;2008年

8 楊波;中波紫外線輻射成纖維細胞致皮膚光老化、反式玉米素的干預作用及機制研究[D];南京醫(yī)科大學;2009年

9 司曉青;蘆丁抗紫外線照射所致皮膚光損傷的防護作用及其機制的研究[D];山東大學;2011年

10 李莉;RIP1在UVB引起成纖維細胞損傷中作用機制的研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2011年

相關(guān)碩士學位論文 前10條

1 李軍琪;中波紫外線誘導SD大鼠白內(nèi)障模型的實驗研究[D];瀘州醫(yī)學院;2010年

2 于業(yè)軍;扇貝多肽對中波紫外線氧化損傷的He La上皮細胞和小鼠皮膚保護作用的研究[D];青島大學;2002年

3 程俊霖;人參皂苷對衰老小鼠皮膚和人角質(zhì)形成細胞的抗衰老研究[D];四川大學;2005年

4 李莉;姜黃素聯(lián)合中波紫外線對HaCaT細胞增殖及凋亡的影響[D];青島大學;2008年

5 李丹暉;人參皂苷對皮膚細胞紫外線損傷的保護作用[D];北京中醫(yī)藥大學;2009年

6 李敏;窄譜中波紫外線照射治療老年帶狀皰疹63例療效觀察[D];吉林大學;2010年

7 何方;非甾體抗炎藥對中波紫外線誘導小鼠皮膚腫瘤影響的研究[D];中國醫(yī)科大學;2006年

8 張姝賢;MMP-1和TIMP-1在翼狀胬肉發(fā)病機制中的作用[D];天津醫(yī)科大學;2007年

9 高潔;表沒食子兒茶素沒食子酸酯對UVB誘導人原代表皮黑素細胞光損傷干預作用的研究[D];南京醫(yī)科大學;2008年

10 張洪明;抗組胺藥抑制中波紫外線輻射誘導IL-6生成的研究[D];南京醫(yī)科大學;2003年

本文編號：2602624