【摘要】： 研究目的： 1)對人體石蠟組織標(biāo)本的回顧性研究,研究人體的黑色素瘤組織中是否存在VM和LPPCN,并分析VM和LPPCN與黑色素瘤患者臨床病理參數(shù)及預(yù)后之間的關(guān)系,在此基礎(chǔ)上闡述LPPCN和VM在黑色素瘤患者中的臨床病理意義； 2)初步研究凋亡相關(guān)蛋白在黑色素瘤組織中的表達(dá)并分析它們在LPPCN形成中所起的作用,在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步探討LPPCN形成的相關(guān)分子機(jī)制； 3)研究腫瘤侵襲與轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白Twist1、MMP-2、MMP-9在黑色素瘤組織中的表達(dá)并分析它們在LPPCN和VM形成過程中所起的作用。 研究方法： 1)收集天津醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院1996年1月5日-2007年11月26日期間符合實(shí)驗(yàn)要求的黑色素瘤標(biāo)本70例,收集患者的發(fā)病年齡、性別、腫瘤大小、發(fā)病部位、復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移等臨床資料,總結(jié)分析黑色素瘤患者的臨床病理特征； 2)利用HE染色及CD31／PAS雙重染色的方法觀察70例黑色素瘤組織中是否存在VM和LPPCN,并在顯微鏡下計(jì)數(shù)各自的分布情況,用散點(diǎn)圖和相關(guān)檢驗(yàn)法分析LPPCN計(jì)數(shù)、VM計(jì)數(shù)、MVD計(jì)數(shù)之間是否存在相關(guān)。并在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步分析VM和LPPCN的存在與黑色素瘤患者的臨床病理參數(shù)及預(yù)后之間的關(guān)系,LPPCN與VM、內(nèi)皮依賴性血管之間的關(guān)聯(lián)性； 3)用免疫組化染色的方法檢測凋亡相關(guān)蛋白在SPPCN細(xì)胞、LPPCN細(xì)胞及它們周圍腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)水平,侵襲與轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白MMP-2、MMP-9、Twist1在LPPCN (-)組和LPPCN (+)組、VM(-)組和VM(+)組中的表達(dá)水平,用染色指數(shù)的方法評價(jià)這些蛋白在組間的表達(dá)有無差異,并進(jìn)一步分析這些蛋白的表達(dá)在LPPCN和VM形成過程中所起的作用。 結(jié)果： 1黑色素瘤組織中存在VM和LPPCN 1.1黑色素瘤組織的形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果 對黑色素瘤組織進(jìn)行HE染色和CD31/PAS雙重染色結(jié)果顯示：70例黑色素瘤有33例中存在VM,38例中存在LPPCN,22例中同時(shí)存在SPPCN和LPPCN的現(xiàn)象。 1.2 VM和LPPCN與黑色素瘤患者臨床病理參數(shù)及預(yù)后的關(guān)系 VM和LPPCN的發(fā)生與患者的年齡、性別、腫瘤生長部位、有無黑色素顆粒、復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移無關(guān)(P0.05),與患者的腫瘤體積有關(guān)(P0.05)。當(dāng)腫瘤體積大于20.41cm3的時(shí)候比較容易發(fā)生VM和LPPCN(P0.05)。Kaplan-Meier生存曲線分析結(jié)果顯示VM(+)組較VM(-)組、LPPCN(+)組較LPPCN(-)組、VM+LPPCN(+)組較VM+LPPCN(-)組患者的生存時(shí)間短,Log-rank檢驗(yàn)法比較各組間的生存曲線的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 1.3黑色素瘤組織中VM計(jì)數(shù)、LPPCN計(jì)數(shù)與MVD計(jì)數(shù)之間的關(guān)系 VM(+)組MVD計(jì)數(shù)的平均值高于VM(-)組MVD計(jì)數(shù)的平均值(P0.05)。LPPCN(-)組與LPPCN(+)組之間的MVD計(jì)數(shù)平均值差異比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。VM+LPPCN(+)組MVD計(jì)數(shù)的平均值高于VM+LPPCN(-)組MVD計(jì)數(shù)的平均值(P0.05)。 2各參數(shù)之間相關(guān)分析結(jié)果 VM計(jì)數(shù)與LPPCN計(jì)數(shù)、LPPCN細(xì)胞計(jì)數(shù)之間存在正相關(guān)(r=0.469,r=0.470；P=0.024,P=-0.024)。LPPCN計(jì)數(shù)與LPPCN細(xì)胞計(jì)數(shù)之間存在正相關(guān)(r=0.406,P=0.011),腫瘤體積與MVD計(jì)數(shù)之間存在正相關(guān)(r=0.261,P=0.029)。 3凋亡相關(guān)蛋白的免疫組化染色結(jié)果 3.1線粒體凋亡通路相關(guān)蛋白在黑色素瘤組織中的表達(dá) 3.1.1 Bcl-2和Bax蛋白在黑色素瘤組織中的表達(dá)水平 Bcl-2蛋白在LPPCN(+)組的表達(dá)高于LPPCN(-)組的表達(dá)(P0.05)。在LPPCN形成的過程中,早期的SPPCN細(xì)胞中Bcl-2蛋白的表達(dá)高于晚期LPPCN細(xì)胞中Bcl-2蛋白的表達(dá)(P0.05)。早期的SPPCN細(xì)胞中Bax蛋白的表達(dá)低于晚期LPPCN細(xì)胞中Bax蛋白的表達(dá)(P0.05)。早期的SPPCN周圍腫瘤細(xì)胞中Bcl-2蛋白的表達(dá)低于晚期LPPCN周圍腫瘤細(xì)胞中Bcl-2蛋白的表達(dá)(P0.05)。早期的SPPCN周圍腫瘤細(xì)胞中Bax蛋白的表達(dá)高于晚期LPPCN周圍腫瘤細(xì)胞中Bax蛋白的表達(dá)(P0.05)。在早期階段,SPPCN細(xì)胞中Bcl-2和Bax蛋白的表達(dá)與SPPCN周圍腫瘤細(xì)胞中Bcl-2和Bax蛋白的表達(dá)差異比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。在晚期階段,LPPCN細(xì)胞中Bcl-2蛋白的表達(dá)低于LPPCN周圍腫瘤細(xì)胞中Bcl-2蛋白的表達(dá)(P0.05)。LPPCN細(xì)胞中Bax蛋白的表達(dá)高于LPPCN周圍腫瘤細(xì)胞中Bax蛋白的表達(dá)(P0.05)。 3.1.2 Caspase9和Caspase3蛋白在黑色素瘤組織中的表達(dá) 線粒體凋亡途徑相關(guān)蛋白Caspase9和Caspase3在LPPCN(-)組與LPPCN(+)組之間表達(dá)差異比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。Caspase9和Caspase3蛋白在LPPCN細(xì)胞中的表達(dá)高于LPPCN周圍腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)(P0.05)。 3.2腫瘤壞死因子家族相關(guān)蛋白在黑色素瘤組織中的表達(dá) 膜受體凋亡途徑相關(guān)蛋白TNF、TRAIL、Fas、FasL、Caspase8在LPPCN(-)組與LPPCN (+)組之間表達(dá)差異比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。TNF、TRAIL、Fas、FasL、Caspase8蛋白在LPPCN細(xì)胞中的表達(dá)與LPPCN周圍腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)差異比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 4侵襲與轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白Twist1、MMP-2、MMP-9的免疫組化染色結(jié)果 Twist1蛋白在LPPCN(+)組中的表達(dá)高于LPPCN(-)組中的表達(dá)(P0.05),在VM(+)組中的表達(dá)高于VM(-)組中的表達(dá)(P0.05),在LPPCN細(xì)胞中的表達(dá)高于LPPCN周圍腫瘤細(xì)胞的表達(dá)(P0.05)。MMP-2蛋白在LPPCN(+)組中的表達(dá)高于LPPCN (-)組中的表達(dá)(P0.05),在VM(+)組中的表達(dá)高于VM(-)組中的表達(dá)(P0.05)。MMP-9蛋白在VM(+)組中的表達(dá)高于VM(-)組中的表達(dá)(P0.05)。 結(jié)論 1黑色素瘤組織中存在VM和LPPCN,存在VM或／和LPPCN的黑色素瘤患者的臨床預(yù)后差。VM和LPPCN的發(fā)生與患者的年齡、性別、發(fā)生部位、有無黑色素顆粒、復(fù)發(fā)與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移無關(guān)。當(dāng)腫瘤的體積20.41cm3(直徑為3cm左右)時(shí)容易發(fā)生VM和LPPCN. 2 LPPCN是腫瘤細(xì)胞為適應(yīng)環(huán)境產(chǎn)生的一種介于凋亡和壞死之間過渡的細(xì)胞死亡形式。在缺氧的環(huán)境下,部分瘤細(xì)胞在線粒體凋亡通路為主的調(diào)控下先形成SPPCN,隨著缺氧程度的加劇,SPPCN發(fā)展為LPPCN。 3黑色素瘤細(xì)胞表達(dá)的MMP-9、MMP-2、Twistl蛋白都參與了VM形成過程中的細(xì)胞形變和基質(zhì)重塑。腫瘤細(xì)胞分泌的PAS陽性物質(zhì)參與了VM形成中的基質(zhì)重塑。
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【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R739.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2387628