發(fā)布時間：2018-12-20 07:10

【摘要】： 研究目的： 1)對人體石蠟組織標本的回顧性研究,研究人體的黑色素瘤組織中是否存在VM和LPPCN,并分析VM和LPPCN與黑色素瘤患者臨床病理參數(shù)及預后之間的關系,在此基礎上闡述LPPCN和VM在黑色素瘤患者中的臨床病理意義； 2)初步研究凋亡相關蛋白在黑色素瘤組織中的表達并分析它們在LPPCN形成中所起的作用,在此基礎上進一步探討LPPCN形成的相關分子機制； 3)研究腫瘤侵襲與轉移相關蛋白Twist1、MMP-2、MMP-9在黑色素瘤組織中的表達并分析它們在LPPCN和VM形成過程中所起的作用。 研究方法： 1)收集天津醫(yī)科大學附屬腫瘤醫(yī)院1996年1月5日-2007年11月26日期間符合實驗要求的黑色素瘤標本70例,收集患者的發(fā)病年齡、性別、腫瘤大小、發(fā)病部位、復發(fā)與轉移等臨床資料,總結分析黑色素瘤患者的臨床病理特征； 2)利用HE染色及CD31／PAS雙重染色的方法觀察70例黑色素瘤組織中是否存在VM和LPPCN,并在顯微鏡下計數(shù)各自的分布情況,用散點圖和相關檢驗法分析LPPCN計數(shù)、VM計數(shù)、MVD計數(shù)之間是否存在相關。并在此基礎上進一步分析VM和LPPCN的存在與黑色素瘤患者的臨床病理參數(shù)及預后之間的關系,LPPCN與VM、內皮依賴性血管之間的關聯(lián)性； 3)用免疫組化染色的方法檢測凋亡相關蛋白在SPPCN細胞、LPPCN細胞及它們周圍腫瘤細胞中的表達水平,侵襲與轉移相關蛋白MMP-2、MMP-9、Twist1在LPPCN (-)組和LPPCN (+)組、VM(-)組和VM(+)組中的表達水平,用染色指數(shù)的方法評價這些蛋白在組間的表達有無差異,并進一步分析這些蛋白的表達在LPPCN和VM形成過程中所起的作用。 結果： 1黑色素瘤組織中存在VM和LPPCN 1.1黑色素瘤組織的形態(tài)學觀察結果 對黑色素瘤組織進行HE染色和CD31/PAS雙重染色結果顯示：70例黑色素瘤有33例中存在VM,38例中存在LPPCN,22例中同時存在SPPCN和LPPCN的現(xiàn)象。 1.2 VM和LPPCN與黑色素瘤患者臨床病理參數(shù)及預后的關系 VM和LPPCN的發(fā)生與患者的年齡、性別、腫瘤生長部位、有無黑色素顆粒、復發(fā)和遠處轉移無關(P0.05),與患者的腫瘤體積有關(P0.05)。當腫瘤體積大于20.41cm3的時候比較容易發(fā)生VM和LPPCN(P0.05)。Kaplan-Meier生存曲線分析結果顯示VM(+)組較VM(-)組、LPPCN(+)組較LPPCN(-)組、VM+LPPCN(+)組較VM+LPPCN(-)組患者的生存時間短,Log-rank檢驗法比較各組間的生存曲線的差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。 1.3黑色素瘤組織中VM計數(shù)、LPPCN計數(shù)與MVD計數(shù)之間的關系 VM(+)組MVD計數(shù)的平均值高于VM(-)組MVD計數(shù)的平均值(P0.05)。LPPCN(-)組與LPPCN(+)組之間的MVD計數(shù)平均值差異比較無統(tǒng)計學意義(P0.05)。VM+LPPCN(+)組MVD計數(shù)的平均值高于VM+LPPCN(-)組MVD計數(shù)的平均值(P0.05)。 2各參數(shù)之間相關分析結果 VM計數(shù)與LPPCN計數(shù)、LPPCN細胞計數(shù)之間存在正相關(r=0.469,r=0.470；P=0.024,P=-0.024)。LPPCN計數(shù)與LPPCN細胞計數(shù)之間存在正相關(r=0.406,P=0.011),腫瘤體積與MVD計數(shù)之間存在正相關(r=0.261,P=0.029)。 3凋亡相關蛋白的免疫組化染色結果 3.1線粒體凋亡通路相關蛋白在黑色素瘤組織中的表達 3.1.1 Bcl-2和Bax蛋白在黑色素瘤組織中的表達水平 Bcl-2蛋白在LPPCN(+)組的表達高于LPPCN(-)組的表達(P0.05)。在LPPCN形成的過程中,早期的SPPCN細胞中Bcl-2蛋白的表達高于晚期LPPCN細胞中Bcl-2蛋白的表達(P0.05)。早期的SPPCN細胞中Bax蛋白的表達低于晚期LPPCN細胞中Bax蛋白的表達(P0.05)。早期的SPPCN周圍腫瘤細胞中Bcl-2蛋白的表達低于晚期LPPCN周圍腫瘤細胞中Bcl-2蛋白的表達(P0.05)。早期的SPPCN周圍腫瘤細胞中Bax蛋白的表達高于晚期LPPCN周圍腫瘤細胞中Bax蛋白的表達(P0.05)。在早期階段,SPPCN細胞中Bcl-2和Bax蛋白的表達與SPPCN周圍腫瘤細胞中Bcl-2和Bax蛋白的表達差異比較無統(tǒng)計學意義(P0.05)。在晚期階段,LPPCN細胞中Bcl-2蛋白的表達低于LPPCN周圍腫瘤細胞中Bcl-2蛋白的表達(P0.05)。LPPCN細胞中Bax蛋白的表達高于LPPCN周圍腫瘤細胞中Bax蛋白的表達(P0.05)。 3.1.2 Caspase9和Caspase3蛋白在黑色素瘤組織中的表達 線粒體凋亡途徑相關蛋白Caspase9和Caspase3在LPPCN(-)組與LPPCN(+)組之間表達差異比較無統(tǒng)計學意義(P0.05)。Caspase9和Caspase3蛋白在LPPCN細胞中的表達高于LPPCN周圍腫瘤細胞中的表達(P0.05)。 3.2腫瘤壞死因子家族相關蛋白在黑色素瘤組織中的表達 膜受體凋亡途徑相關蛋白TNF、TRAIL、Fas、FasL、Caspase8在LPPCN(-)組與LPPCN (+)組之間表達差異比較無統(tǒng)計學意義(P0.05)。TNF、TRAIL、Fas、FasL、Caspase8蛋白在LPPCN細胞中的表達與LPPCN周圍腫瘤細胞中的表達差異比較無統(tǒng)計學意義(P0.05)。 4侵襲與轉移相關蛋白Twist1、MMP-2、MMP-9的免疫組化染色結果 Twist1蛋白在LPPCN(+)組中的表達高于LPPCN(-)組中的表達(P0.05),在VM(+)組中的表達高于VM(-)組中的表達(P0.05),在LPPCN細胞中的表達高于LPPCN周圍腫瘤細胞的表達(P0.05)。MMP-2蛋白在LPPCN(+)組中的表達高于LPPCN (-)組中的表達(P0.05),在VM(+)組中的表達高于VM(-)組中的表達(P0.05)。MMP-9蛋白在VM(+)組中的表達高于VM(-)組中的表達(P0.05)。 結論 1黑色素瘤組織中存在VM和LPPCN,存在VM或／和LPPCN的黑色素瘤患者的臨床預后差。VM和LPPCN的發(fā)生與患者的年齡、性別、發(fā)生部位、有無黑色素顆粒、復發(fā)與遠處轉移無關。當腫瘤的體積20.41cm3(直徑為3cm左右)時容易發(fā)生VM和LPPCN. 2 LPPCN是腫瘤細胞為適應環(huán)境產(chǎn)生的一種介于凋亡和壞死之間過渡的細胞死亡形式。在缺氧的環(huán)境下,部分瘤細胞在線粒體凋亡通路為主的調控下先形成SPPCN,隨著缺氧程度的加劇,SPPCN發(fā)展為LPPCN。 3黑色素瘤細胞表達的MMP-9、MMP-2、Twistl蛋白都參與了VM形成過程中的細胞形變和基質重塑。腫瘤細胞分泌的PAS陽性物質參與了VM形成中的基質重塑。
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【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R739.5

【參考文獻】

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本文編號：2387628