【摘要】：研究背景 炎癥后色素沉著(postinflammatory hyperpigmenation, PIH)是常見的皮膚科問題,可繼發(fā)于皮膚感染、炎癥、丘疹鱗屑性疾病、外傷、藥物、日曬等各種疾病或損傷。其中以痤瘡是引起的PIH最為常見的疾病之一,其發(fā)生率可達47.4-65.3%不等。PIH在任何膚色人群中均有發(fā)生,但在暗膚色人群中更為常見,并以亞洲人群最為顯著,如日本、中國。PIH可發(fā)生于任何年齡階段,男女性發(fā)生率無明顯差別[1]�，F(xiàn)有的治療方法對PIH效果并不理想。雖然部分PIH即使不經(jīng)過治療,亦可自行消褪,但通常需要3-24個月時間不等。此外,環(huán)境因素如日曬等可進一步加重色素沉著。雖然PIH并不影響個體生存,但可在不同程度上損害容貌外觀,在精神和經(jīng)濟上對患者造成負擔。因此,探索PIH發(fā)生的機制并尋找潛在的安全有效的藥物治療是很有意義的。 角質形成細胞是皮膚免疫屏障功能中的一重要組成部分,其表面表達多種Toll樣受體(Toll-like receptors, TLRs)。TLRs是一組模式識別受體,可以識別病原相關分子模式。其中TLR-2主要識別革蘭氏陽性菌的細胞壁成分：肽聚糖(peptidoglycan, PGN)及脂磷壁抗原相關分子酸(lipoteichoic acid, LTA)[9,10]; TLR-4則主要識別革蘭氏陰性菌的細胞壁成分：脂多糖(lipopolysaccharide, LPS),也即內毒素。作為痤瘡發(fā)生的致病因素之一的痤瘡丙酸桿菌(Propionibacterium acnes, P.acnes)是革蘭氏陽性菌,已由研究顯示P.acnes引起炎癥的主要途徑是通過其細胞壁主要成分PGN及LTA與宿主細胞表面TLR-2結合所致,也有部分報道發(fā)現(xiàn)P.acnes對于TLR-4也有弱激動效應。因此,我們可以利用PGN、LTA、LPS這些細胞壁成分干預角質形成細胞,體外模擬痤瘡炎癥環(huán)境,在此基礎上探討TLR-2/4與炎癥后色素沉著的關系,并篩選治療PIH潛在有效的藥物。 研究目的 本課題旨在討論角質形成細胞TLR-2/4介導的PIH形成機制,并在此基礎上篩選治療PIH潛在有效的藥物。 研究方法 一、TLR-2/4介導的炎癥及色素合成相關因子表達 本部分擬用TLR-2激動劑(PGN、LTA)及TLR-4激動劑(LPS)選取不同時間點刺激HaCaT細胞,建立體外角質形成細胞TLR-2/4介導的炎癥模型。用Realtime PCR及ELISA檢測分別TLR-2/4介導的炎癥及色素合成相關因子的表達。 為確定不同細菌來源的細胞壁成分對TLR-2/4介導的PIH是否有差異,本課題選取不同細菌來源的PGN,用上述方法檢測炎癥及色素合成相關因子的表達。為進一步確定TLR-2/4是否直接參與PIH,用siRNA對TLR-2及TLR-4基因表達分別進行干預后,用上述方法檢測炎癥及色素合成相關因子的表達。 二、肌醇、泛醇、煙酰胺對TLR-2/4介導的PIH的作用 本部分擬用不同濃度梯度的肌醇、泛醇及煙酰胺分別作用于TLR-2/4介導的PIH模型,用Realtime PCR及ELISA檢測炎癥及色素合成相關因子的表達,確定潛在有效的藥物及其有效濃度范圍。 研究結果 一、TLR-2/4介導的炎癥及色素合成相關因子的表達 用TLR-2激動劑(PGN、LTA)及TLR-4激動劑(LPS)刺激HaCaT細胞,IL-8mRNA表達在0-12h時隨時間增加而增加(p0.05vs. control),在12-24h時表達水平略有下降,但與對照相比,仍呈顯著性升高(p0.05vs. control)。而在相同時間點內,IL-8mRNA表達在LPS及PGN組中升高較LTA組明顯。類似地,POMC mRNA表達在0-24h時隨時間增加而增加,在24h時表達水平最高(p0.05vs.control)。同樣地,在相同時間點內,POMC mRNA表達上調以LPS組及PGN組更為明顯。 為確定不同細菌來源的細胞成分對TLRs介導的PIH是否有影響,我們采用了金黃色葡萄球菌細胞壁中的PGN (PGN from Staphylococcus aureus, PGN-SA)以及大腸埃希菌細胞壁中的PGN (PGN from Esherichia coli, PGN-EB),分別干預HaCaT細胞,發(fā)現(xiàn)兩組IL-8mRNA及POMC mRNA水平無顯著性差異(p0.05) 結論：TLR-2/4激動劑可顯著性誘導炎癥因子IL-8黑素合成因子POMC的高表達；不同細菌來源的TLR-2激動劑對炎癥及黑素合成相關因子表達無顯著性差異,因此可推測痤瘡相關的PIH與TLR-2/4信號通路途徑激活相關,色素沉著是機體在維持炎癥穩(wěn)態(tài)過程中所付出的代價。 二、肌醇、泛醇、煙酰胺對TLR-2/4介導的PIH的作用 將肌醇及泛醇按照不同濃度梯度分別加入到PGN誘導的PIH模型中發(fā)現(xiàn),隨兩者濃度的增加,IL-8及POMC mRNA水平無顯著變化(p0.05)；而將煙酰胺按照不同濃度梯度加入到PGN誘導的PIH模型中后發(fā)現(xiàn),IL-8及POMC/α-MSH水平顯著降低,且這—抑制作用隨煙酰胺濃度的增加而增強。同樣地,在LPS誘導的PIH模型中,煙酰胺對IL-8及POMC/α-MSH有類似的抑制作用。 結論：煙酰胺對TLR-2/4介導的PIH有顯著的抑制作用,且這一作用與其濃度呈正相關,是治療PIH的潛在有效成分；而肌醇、泛醇對TLR-2/4介導的PIH無顯著抑制作用。
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【學位授予單位】：復旦大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R751

【共引文獻】

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本文編號：2384295