【摘要】： 目的 1.研究表沒食子兒茶素沒食子酸酯(Epigallocatechin-3-gallate, EGCG)、腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(Tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand, TRAIL)、表沒食子兒茶素沒食子酸酯聯(lián)合TRAIL對黑色素瘤A375細(xì)胞系的體外生長的抑制作用和凋亡作用。 2.研究死亡受體4(Death receptor 4, DR4),死亡受體5(Death receptor 5, DR5)在黑色素瘤A375細(xì)胞的表達(dá)情況。 3.研究表沒食子兒茶素沒食子酸酯對DR4、DR5 mRNA及蛋白表達(dá)的影響。 4.探討表沒食子兒茶素沒食子酸酯對Caspase-3活性蛋白表達(dá)的影響。 5.研究表沒食子兒茶素沒食子酸酯單獨(dú)或聯(lián)合TRAIL對Caspase-8活性蛋白表達(dá)的影響。 方法 1.體外培養(yǎng)黑素瘤細(xì)胞系A(chǔ)375,以不同濃度EGCG、TRAIL對體外培養(yǎng)A375細(xì)胞進(jìn)行干預(yù)。表沒食子兒茶素沒食子酸酯聯(lián)合TRAIL以甲基噻唑基四唑(MTT)比色法檢測EGCG單獨(dú)或聯(lián)合TRAIL對黑色素瘤A375細(xì)胞系的體外抑制作用。流式細(xì)胞術(shù)檢測各組凋亡率。 2.直接免疫熒光法檢測黑素瘤細(xì)胞系A(chǔ)375 DR4, DR5蛋白的表達(dá)。 3.以不同濃度EGCG對體外培養(yǎng)黑素瘤細(xì)胞系A(chǔ)375進(jìn)行干預(yù),流式細(xì)胞術(shù)、RT-PCR、Western blot法分別檢測干預(yù)處理后黑素瘤細(xì)胞mRNA及蛋白表達(dá)。 4.以不同濃度EGCG對體外培養(yǎng)黑素瘤細(xì)胞系A(chǔ)375進(jìn)行干預(yù),用Caspase-3分光光度法檢測干預(yù)處理后黑素瘤細(xì)胞Caspase-3活性蛋白表達(dá)。 5.以不同濃度EGCG或EGCG聯(lián)合TRAIL對體外培養(yǎng)黑素瘤細(xì)胞系A(chǔ)375進(jìn)行干預(yù),Caspase-8分光光度法檢測干預(yù)處理后黑素瘤細(xì)胞Caspase-3活性蛋白表達(dá)。 結(jié)果 1. TRAIL、EGCG單獨(dú)及聯(lián)合作用對黑色素瘤細(xì)胞A375細(xì)胞體外生長及凋亡影響。 1) EGCG組(0-40μg/ml)濃度范圍對A375細(xì)胞生長有明顯抑制作用,以時(shí)間和劑量依賴的模式抑制了細(xì)胞存活率。 2) TRAIL組(0-150ng/ml)范圍內(nèi)對A375細(xì)胞生長有抑制影響,以時(shí)間和劑量依賴的模式抑制了細(xì)胞存活率,IC50=132.47 ng/ml。 3)取TRAIL(25 ng/ml)或EGCG(20μg/ml,40μg/ml)單獨(dú)或聯(lián)合作用A375細(xì)胞24小時(shí),聯(lián)合藥物組凋亡率高于單獨(dú)EGCG組,或TRAIL組。亞毒劑量的TRAIL、EGCG及聯(lián)合作用組致惡性黑色素瘤細(xì)胞A-375細(xì)胞凋亡率分別為12.8%、5.3-8.1%、49.1-68.9%。單獨(dú)應(yīng)用組與聯(lián)合應(yīng)用組之間存在顯著性差異(P0.01)。 2. A375細(xì)胞中DR4和DR5的表達(dá)情況及EGCG干預(yù)對細(xì)胞DR4、DR5的影響 1)A375細(xì)胞同時(shí)表達(dá)TRAIL-R1和TRAIL-R2兩種受體。TRAIL-R1在A375細(xì)胞膜表面為31-40%,TRAIL-R2在膜表面表達(dá)為18-23%。 2)與空白對照組相比,EGCG單獨(dú)作用于A375細(xì)胞24h后,死亡受體DR4在細(xì)胞的表達(dá)明顯上(P0.05)。 3)干預(yù)處理后對A375細(xì)胞膜表面DR5蛋白及mRNA無明顯影響 3. EGCG干預(yù)后細(xì)胞caspase-3、caspase-8活性的變化 1) EGCG干預(yù)6h后A374細(xì)胞caspase-3活性增強(qiáng)了60.25%。 2) EGCG組A375細(xì)胞Caspase-8蛋白活性程度無明顯改變；同空白組比較,TRAIL聯(lián)合EGCG作用6h后細(xì)胞caspase-8活性增加了55.36%。 結(jié)論 1.研究表沒食子兒茶素沒食子酸酯聯(lián)合TRAIL應(yīng)用對惡性黑色素瘤細(xì)胞A-375細(xì)胞具有明顯的協(xié)同殺傷效果。 2. TRAIL和EGCG協(xié)同作用機(jī)制可能與EGCG上調(diào)DR4 mRNA及蛋白的表達(dá)及增強(qiáng)caspase-3活性有關(guān)。
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【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R285.5;R739.5

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 沈生榮,金超芳,楊賢強(qiáng),趙保路;EGCG和GCG清除單線態(tài)氧效果的ESR鑒別[J];茶葉科學(xué);2000年01期

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本文編號：2331202