【摘要】：銀屑病是臨床常見的慢性易復發(fā)的紅斑、鱗屑性疾病。本病臨床可分為尋常型、關(guān)節(jié)病型、紅皮病型、膿皰型4個類型。病程慢性,反復發(fā)作。其發(fā)病機理尚未完全明確。目前研究認為銀屑病的發(fā)病機制主要是由輔助性Th細胞及其相關(guān)細胞因子介導的以角質(zhì)形成細胞為靶點的炎癥反應。Th22細胞是新發(fā)現(xiàn)的CD4+輔助性T細胞亞群,在銀屑病外周血中高表達,其主要細胞因子為IL-22。通過其實現(xiàn)相關(guān)生物學功能。在銀屑病病人外周血及皮損中IL-22水平和銀屑病的嚴重程度呈明顯的正相關(guān)。我們的前期研究表明肝素結(jié)合表皮生長因子樣生長因子(heparin-binding epidermal-growth-factor-like growth factor,HB-EGF)在銀屑病表皮KC異常增殖和其轉(zhuǎn)歸中發(fā)揮重要作用。本課題的前期研究表明IL-22可以誘導體外培養(yǎng)Ha Ca T細胞表達HB-EGF,但作用機制未明,絲裂原活化蛋白激酶(MAPK-ERK1/2)通路和轉(zhuǎn)錄激活因子途徑(JAK/STAT)這兩種信號通路在銀屑病發(fā)病機制中起不可或缺作用。他扎羅汀誘導基因3(Tazarotene-induced gene 3,TIG3)是一種腫瘤抑制因子。TIG3可以調(diào)節(jié)角質(zhì)形成細胞的增殖和分化,在銀屑病表達降低。綜上所述,我們推測IL-22促KC分泌HB-EGF可能與MAPK-ERK1/2和JAK/STAT這兩條信號通路有關(guān),且與TIG3表達異常存在一定關(guān)系。IL-22通過促進HB-EGF表達,抑制TIG3表達參與銀屑病發(fā)生、發(fā)展。本實驗研究IL-22促HaCaT細胞分泌HB-EGF作用機制及對HaCaT細胞分泌TIG3的影響。目的:研究白介素22(Interleukin-22,IL-22)對角質(zhì)形成細胞表達HB-EGF的作用機制和對TIG3表達影響及作用機制。方法:1、以不同濃度(12.5μg/L、25μg/L、50μg/L、100μg/L)IL-22和PBS作用于Ha Ca T細胞24小時后,提取細胞總蛋白,用Western blot法檢測IL-22對細胞MAPK-ERK1/2和JAK/STAT這兩條信號通路的影響;應用相關(guān)信號通路阻斷劑PD98059和AG490與IL-22作用于Ha Ca T細胞后分別提取干預后細胞總蛋白及總m RNA,用Western blot法、ELISA法和實時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)法檢測其對Ha Ca T細胞分泌HB-EGF的影響。應用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學處理,P0.05認為有顯著性差異。2、應用咪喹莫特誘導小鼠背部皮膚產(chǎn)生銀屑病樣皮損,然后皮損處皮下注射1μg IL-22,48h后處死小鼠,取下背部皮膚,HE染色觀察小鼠皮膚的改變,免疫組化觀察HB-EGF的表達。3、用不同濃度(12.5μg/L、25μg/L、50μg/L、100μg/L)IL-22和應用相關(guān)信號通路阻斷劑PD98059和AG490與IL-22處理Ha Ca T細胞,對照組用等量PBS處理,應用免疫熒光法檢測細胞內(nèi)TIG3蛋白的表達位置,分別提取干預后的細胞總蛋白及總m RNA,用Western blot法、ELISA法和實時熒光定量RT-PCR法檢測其對Ha Ca T細胞分泌TIG3的影響。應用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件包進行統(tǒng)計學處理,P0.05認為有顯著性差異。結(jié)果:1、IL-22可誘導HaCaT細胞MAPK信號通路中P-ERK1/2蛋白的增加和JAK2/STAT3信號通路中P-JAK2和P-STAT3蛋白的升高。加入信號通路特異性抑制劑PD98059及AG490后HB-EGF蛋白和m RNA的表達較IL-22干預組明顯降低。2、咪喹莫特持續(xù)作用于Bal B/c小鼠背部,可以成功誘導小鼠銀屑病樣皮損,IL-22皮下注射可引起正常Bal B/c小鼠背部及銀屑病小鼠皮膚表皮中HB-EGF表達的升高。3、IL-22可引起Ha Ca T細胞中TIG3蛋白水平的降低,其作用的強度與濃度有關(guān):不同濃度IL-22處理組的細胞分泌TIG3的量均較對照組降低,且隨著IL-22濃度的升高,其對TIG3表達的抑制作用逐漸增強。應用信號通路特異性抑制劑PD98059及AG490后IL-22對TIG3抑制作用較IL-22組減少。差異有統(tǒng)計學意義。結(jié)論:IL-22可以引起Ha Ca T細胞中MAPK-ERK1/2和JAK2/STAT3這兩條信號通路激活。IL-22誘導Ha Ca T細胞產(chǎn)生HB-EGF蛋白的作用機制可能與MAPK-ERK1/2和JAK2/STAT3這兩條信號通路有關(guān)。IL-22可引起B(yǎng)al B/c小鼠背部正常皮膚及銀屑病樣皮損表皮中HB-EGF表達的升高。IL-22可以抑制Ha Ca T細胞中TIG3表達,抑制作用的強度與IL-22濃度有關(guān),作用機制可能與MAPK-ERK1/2和JAK2/STAT3信號通路有關(guān)。
[Abstract]:Psoriasis is a common chronic recurrence of erythema and scaly disease. This disease can be divided into 4 types: common type, arthropathy, erythroderma type and pustular type. The pathogenesis is chronic and recurrent. The pathogenesis of this disease is not completely clear. At present, the pathogenesis of psoriasis is mainly attributed to auxiliary Th cells and related cell causes. An inflammatory response.Th22 cell targeting keratinocyte as a target is a newly discovered CD4+ auxiliary T cell subgroup, highly expressed in the peripheral blood of psoriasis, and its main cytokine is IL-22. through which the related biological functions are realized. In the peripheral blood and skin lesions of psoriasis patients, the IL-22 level and the severity of psoriasis are obvious. Our previous study shows that heparin binding to epidermal growth factor like growth factor (heparin-binding epidermal-growth-factor-like growth factor, HB-EGF) plays an important role in the abnormal proliferation and prognosis of epidermal KC in psoriasis. Previous studies in this study show that IL-22 can induce Ha Ca T cell expression in vitro. EGF, but the mechanism of action is not clear, the mitogen activated protein kinase (MAPK-ERK1/2) pathway and the transcription activating factor pathway (JAK/STAT) are the two signaling pathways that play an indispensable role in the pathogenesis of psoriasis. The gene 3 (Tazarotene-induced gene 3, TIG3) is a tumor suppressor,.TIG3, which regulates the keratinocyte The proliferation and differentiation of psoriasis and the decrease of expression in psoriasis. In summary, we speculate that IL-22 promoting KC secretion may be related to the two signaling pathways of MAPK-ERK1/2 and JAK/STAT, and that there is a certain relationship between TIG3 expression and.IL-22 by promoting HB-EGF expression and inhibiting the TIG3 expression to participate in the occurrence and development of silver chip disease. This experiment studies IL-22 promoting HaCaT thin. The mechanism of cell secretion of HB-EGF and its effect on the secretion of TIG3 by HaCaT cells. Objective: To study the mechanism of the action of interleukin 22 (Interleukin-22, IL-22) on the expression of HB-EGF in keratinocytes and the mechanism of its effect on the expression of TIG3. Methods: 1, IL-22 and 24 hours are used at different concentrations (12.5 mu g/L, 25 u g/L, 50 mu g/L, 100 mu g/L). After that, the total protein of cell was extracted and the effects of IL-22 on the two signal pathways of MAPK-ERK1/2 and JAK/STAT were detected by Western blot, and the total protein and total m were extracted after the action of PD98059 and AG490 and IL-22 on Ha Ca T cells. The effect of transcriptional polymerase chain reaction (RT-PCR) on the secretion of HB-EGF in Ha Ca T cells was detected. SPSS 17 statistical software was used for statistical processing. P0.05 found a significant difference in.2. Imiquimod induced psoriasis like skin lesions in the skin of mice on the back, and then subcutaneous injection of 1 UU IL-22,48h to kill the mice and take the lower back. Skin, HE staining was used to observe the changes in the skin of mice. The expression of HB-EGF was observed by immunohistochemical staining,.3, with the different concentrations (12.5 g/L, 25 g/L, 50, g/L, 100 g/L) IL-22 and the application related signaling pathway blockers, PD98059 and AG490 and IL-22. Location, the total protein and total m RNA were extracted, and the effect of Western blot, ELISA and real-time fluorescent quantitative RT-PCR on the secretion of TIG3 was detected by Ha Ca T cell. The SPSS 17 statistical package was used for statistical processing. The increase of K1/2 protein and the increase of P-JAK2 and P-STAT3 protein in the JAK2/STAT3 signaling pathway. The expression of HB-EGF protein and m RNA after adding signal pathway specific inhibitor PD98059 and AG4 90 is significantly lower than that in IL-22 intervention group. Imiquimod continues to act on the back of Bal mice, and can induce psoriasis like skin lesions in mice. The expression of HB-EGF in the skin epidermis of normal Bal B/c mice and psoriasis mice increased by.3. IL-22 could cause the decrease of TIG3 protein level in Ha Ca T cells. The intensity and concentration of its action were related to the concentration of TIG3 in the cells of different concentrations of IL-22 treatment group than that of the control group. The inhibitory effect of expression was gradually enhanced. The inhibitory effect of PD98059 and IL-22 on TIG3 decreased compared with the IL-22 group. The difference was statistically significant. Conclusion: IL-22 can cause MAPK-ERK1/2 and JAK2/STAT3 in Ha Ca T cells to induce two signaling pathways to induce the effect of.IL-22 cells. The mechanism may be related to the two signaling pathways of MAPK-ERK1/2 and JAK2/STAT3 that.IL-22 can cause the HB-EGF expression in the normal skin of Bal B/c mice and the HB-EGF expression in the epidermis of psoriasis like skin lesions. The.IL-22 can inhibit TIG3 expression in Ha Ca T cells. The inhibitory effect is related to the IL-22 concentration. The mechanism of action may be associated with the letter and the letter The number path is related.
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R758.63

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本文編號：2128668