【摘要】：目的探討建立以THP-1源性巨噬細(xì)胞為受試細(xì)胞,以細(xì)胞上清液中細(xì)胞因子表達(dá)改變?yōu)闄z測(cè)指標(biāo)的體外檢測(cè)化學(xué)物致敏性的試驗(yàn)方法。方法將人單核細(xì)胞株THP-1細(xì)胞用佛波酯(PMA,0.1μg/ml)誘導(dǎo),使之轉(zhuǎn)化為具有貼壁能力的THP-1巨噬細(xì)胞。選擇5種已知的化學(xué)致敏物硫酸鎳(NiSO4)、2,4-二硝基氯代苯(DNCB)、苯二胺(PPDA)、重鉻酸鉀(K2Cr2O7)、異氰酸酯(TDI)和2種非化學(xué)致敏物十二烷基磺酸鈉(SDS)、異丙醇(IPA)為受試物,檢測(cè)不同濃度受試物處理細(xì)胞的不同時(shí)間點(diǎn)時(shí)細(xì)胞因子表達(dá)的變化。分別用ELISA法檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清IL-6、TNF-α的水平,用流式液相多重蛋白定量技術(shù)(CBA)檢測(cè)IL-1β、IL-8細(xì)胞因子的表達(dá)水平。結(jié)果 NiSO4、DNCB和K2Cr2O7作用6h,PPDA、TDI作用12h時(shí),THP-1細(xì)胞上清中IL-6、TNF-α、IL-1β和IL-8四種細(xì)胞因子的表達(dá)量最高。5種化學(xué)致敏物NiSO4、DNCB、K2Cr2O7、PPDA和TDI在最適時(shí)間點(diǎn)最適濃度刺激細(xì)胞分泌IL-6的水平分別為對(duì)照組的40、25、20、50和50倍,TNF-α水平為對(duì)照組的20、12、20、8和5倍,IL-1β水平為對(duì)照組的30、60、25、30和45倍,IL-8水平為對(duì)照組的15、12、15、12和7倍;非致敏物SDS與IPA處理組IL-6水平均有升高,其中SDS組升高最明顯,約為空白對(duì)照組的20倍。TNF-α、IL-1β和IL-8表達(dá)水平無(wú)明顯變化。結(jié)論利用THP-1巨噬細(xì)胞檢測(cè)細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β和IL-8表達(dá)水平的試驗(yàn)方法可以有效區(qū)分化學(xué)致敏物與非致敏物,因此這3個(gè)指標(biāo)可作為鑒別化學(xué)致敏物和非致敏物的有效參考指標(biāo)。
[Abstract]:Objective to establish an in vitro method for the detection of chemosensitivity of THP-1 derived macrophages and the change of cytokine expression in the supernatant. Methods THP-1 cells were induced by PMA-0.1 渭 g/ml and transformed into adherent THP-1 macrophages. Five known chemical sensitizers nickel sulfate (NiSO4) 2-dinitrochlorobenzene (DNCB), phenylenediamine (PPDA), potassium dichromate (K _ 2Cr _ 2O _ 7), isocyanate (TDI), sodium dodecyl sulfonate (SDS) and isopropanol (IPA) were selected. The cytokine expression was measured at different time points in different concentrations of the cells treated with different concentrations. The level of IL-6 TNF- 偽 in the supernatant of cell culture was detected by Elisa, and the expression of IL-8 cytokines was detected by flow liquid phase multiplex protein quantitative assay (CBA). Results the expression of IL-6, TNF- 偽, IL-1 尾 and IL-8 in supernatant of THP-1 cells was the highest in the supernatant of THP-1 cells treated with DNCB and K2Cr2O7 for 6 h after TDI treatment for 12 h. The levels of IL-6 secreted by cells stimulated by NiSO4 and DNCBC2O7PPDA and TDI at the optimal concentration were the highest in the control group, respectively. The levels of TNF- 偽 in the control group were 50 and 50 times higher than those in the control group. The levels of IL-1 尾 in the control group were 30 and 45 times higher than those in the control group. The levels of IL-8 in the control group were 15, 12, 15, 12 and 7 times higher than those in the control group, and the levels of IL-1 尾 in the control group were 30 and 45 times higher than those in the control group. The level of IL-6 increased in both SDS and IPA groups, and the level of IL-1 尾 and IL-8 in SDS group was significantly higher than that in the control group, and the expression of IL-1 尾 and IL-8 in SDS group was not significantly changed as compared with that in the blank control group. Conclusion the method of detecting the expression level of cytokine TNF- 偽, IL-1 尾 and IL-8 by THP-1 macrophages can effectively distinguish chemosensitizer from non-sensitizer, so these three indexes can be used as effective reference indexes for distinguishing chemosensitizer from non-sensitizer.
【作者單位】： 河北聯(lián)合大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院;中國(guó)疾病預(yù)防控制中心職業(yè)衛(wèi)生與中毒控制所化學(xué)污染與健康安全重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：“十二五”國(guó)家科技支撐計(jì)劃課題(No.2014BAl12B02) 國(guó)家自然科學(xué)基金重點(diǎn)項(xiàng)目(No.81130050)
【分類號(hào)】：R758.22

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本文編號(hào)：2130471