BaP聯(lián)合UVB對(duì)人角質(zhì)形成細(xì)胞Caspase
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《天津醫(yī)科大學(xué)》 2013年
BaP聯(lián)合UVB對(duì)人角質(zhì)形成細(xì)胞Caspase-14和Filaggrin表達(dá)的影響
張芳芳
【摘要】:目的 研究不同濃度苯并芘(BaP)與不同劑量(UVB)(中波紫外線(xiàn)分別及聯(lián)合作用下對(duì)永生化人角質(zhì)形成細(xì)胞株(HaCaT)增殖活性及半胱氨酸天冬氨酸特異性蛋白酶-14(Caspase-14)和絲聚蛋白(Filaggrin) mRNA表達(dá)的影響,探討其同BaP及UVB所致的細(xì)胞損傷的關(guān)系。 方法 第一部分:培養(yǎng)HaCaT細(xì)胞;繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(xiàn);分別用濃度為30、50、80、100μmol/L BaP及劑量為10、30、60、90mJ/cm2的UVB分別作用HaCaT細(xì)胞,采用四甲基偶氮唑藍(lán)比色實(shí)驗(yàn)(MTT法)測(cè)定HaCaT細(xì)胞增殖活性;逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)不同濃度BaP和不同劑量UVB分別作用24h后HaCaT細(xì)胞Caspase-14mRNA和Filaggrin mRNA的表達(dá)水平。 第二部分:選取一定濃度BaP和一定劑量UVB聯(lián)合條件下HaCaT細(xì)胞,用MTT法測(cè)定作用前后HaCaT細(xì)胞增殖活性;RT-PCR方法檢測(cè)80μmol/L BaP和60mJ/cm2UVB聯(lián)合作用HaCaT細(xì)胞24h后Caspase-14mRNA和Filaggrin mRNA的表達(dá)水平。 結(jié)果 1.對(duì)照組細(xì)胞隨培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)細(xì)胞增殖活性增加;經(jīng)BaP和UVB作用后,細(xì)胞增殖活性較對(duì)照組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05); 2.對(duì)照組細(xì)胞Caspase-14mRNA和Filaggrin mRNA呈低水平表達(dá)或基本不表達(dá),經(jīng)濃度為30、50、80、100μmol/L的BaP及劑量為10、30、60、90mJ/cm2的UVB作用后,HaCaT細(xì)胞中Caspase-14mRNA和Filaggrin mRNA相對(duì)含量高于相同時(shí)間點(diǎn)對(duì)照組(P0.05);不同實(shí)驗(yàn)組之間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01); 3.80μmol/L BaP聯(lián)合60mJ/cm2UVB較分別作用對(duì)HaCaT細(xì)胞增殖活性抑制率明顯降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05); 4.80μmol/L BaP聯(lián)合60mJ/cm2UVB作用24h后,HaCaT細(xì)胞中Caspase-14mRNA和Filaggrin mRNA表達(dá)明顯增強(qiáng),與對(duì)照組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),各實(shí)驗(yàn)組之間比較,差異性有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。 結(jié)論 1、BaP與UVB可抑制HaCaT細(xì)胞的增殖活性,引起細(xì)胞的損傷。 2、BaP與UVB作用HaCaT細(xì)胞24h后,Caspase-14mRNA和Filaggrin mRNA表達(dá)增加,二者存在相互影響關(guān)系。 3、BaP聯(lián)合UVB較分別作用HaCaT細(xì)胞后,Caspase-14mRNA和Filaggrin mRNA表達(dá)量明顯增加,且呈劑量依賴(lài)關(guān)系。
【關(guān)鍵詞】:
【學(xué)位授予單位】:天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2013
【分類(lèi)號(hào)】:R751
【目錄】:
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本文編號(hào):189046
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