發(fā)布時(shí)間：2018-05-11 00:00

  本文選題：miRNAs + 皮膚老化��； 參考：《中國(guó)老年學(xué)雜志》2017年02期

【摘要】：目的探討miR-146a在紫外線誘導(dǎo)人皮膚成纖維細(xì)胞光老化中的作用。方法 10 J/cm~2UVA連續(xù)照射成纖維細(xì)胞2 w建立光老化模型,分別于首日、3、7、14 d提取總RNA,實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)miR-146a表達(dá)量;慢性病毒轉(zhuǎn)染上調(diào)miR-146a表達(dá)(miR-146a過(guò)表達(dá)組),熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染效率,并驗(yàn)證細(xì)胞內(nèi)miR-146a表達(dá)量;未經(jīng)處理的成纖維細(xì)胞作為空白對(duì)照組;UVA+miR-146a組為miR-146a過(guò)表達(dá)后再用UVA照射。MTT法檢測(cè)四組細(xì)胞增殖情況;實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)四組細(xì)胞內(nèi)老化相關(guān)基因mRNA表達(dá)情況;Western印跡法檢測(cè)四組細(xì)胞中Smad4蛋白表達(dá)情況。結(jié)果 UVA照射第3、7、14天UVA照射組miR-146a表達(dá)量持續(xù)降低,且明顯低于同期空白對(duì)照組(P0.05)。慢性病毒載體轉(zhuǎn)染后,miR-146a過(guò)表達(dá)組第7、14天miR-146a表達(dá)量明顯高于同期空白對(duì)照組(P0.05)。UVA照射組、UVA+miR-146a組A值明顯低于空白對(duì)照組、miR-146a過(guò)表達(dá)組(P0.01);miR-146a過(guò)表達(dá)組A值與空白對(duì)照組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);UVA+miR-146a組A值明顯高于UVA照射組(P0.01)。UVA照射組、UVA+miR-146a組p53、p21、p16 mRNA表達(dá)量均明顯高于空白對(duì)照組、miR-146a過(guò)表達(dá)組(P0.01);miR-146a過(guò)表達(dá)組p53、p21、p16mRNA表達(dá)量與空白對(duì)照組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);UVA+miR-146a組p53、p21、p16 mRNA表達(dá)量明顯低于UVA照射組(P0.01)。UVA照射組、UVA+miR-146a組細(xì)胞內(nèi)Smad4蛋白表達(dá)量明顯高于空白對(duì)照組、miR-146a過(guò)表達(dá)組(P0.01);miR-146a過(guò)表達(dá)組與空白對(duì)照組Smad4蛋白表達(dá)量之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);UVA+miR-146a組Smad4蛋白表達(dá)量明顯低于UVA照射組(P0.01)。結(jié)論 UVA誘導(dǎo)光老化人皮膚成纖維細(xì)胞中miR-146a表達(dá)被抑制,上調(diào)其表達(dá)可抑制Smad4表達(dá),促進(jìn)光老化細(xì)胞增殖,起到抗老化作用。
[Abstract]:Objective to investigate the role of miR-146a in ultraviolet induced photoaging of human skin fibroblasts. Methods the model of photoaging was established by 10 J/cm~2UVA continuous irradiation of fibroblasts for 2 weeks. The total RNAs were extracted on the first day, and the expression of miR-146a was measured by real-time quantitative PCR, and the expression of miR-146a was up-regulated by chronic virus transfection, and the transfection efficiency was observed by fluorescence microscope. The untreated fibroblasts were used as the blank control group for miR-146a overexpression and then the proliferation of the four groups was detected by UVA irradiation. Real-time quantitative PCR was used to detect the mRNA expression of aging related genes in four groups of cells. Western blot was used to detect the expression of Smad4 protein in the four groups. Results the expression of miR-146a in the UVA group was significantly lower than that in the control group on the 14th day of UVA irradiation, and was significantly lower than that in the control group (P 0.05). After transfection of chronic virus vector, the expression of miR-146a in the overexpression group of miR-146a was significantly higher than that in the control group (P0.05N. UVA irradiation group) on the 14th day after transfection, and the A value in the miR-146a group was significantly lower than that in the blank control group and the blank control group in which the expression of miR-146a overexpression group was significantly lower than that in the control group and the blank control group. There was no significant difference in the expression of p53p21, p16 mRNA between the UVA irradiation group and the UVA miR-146a group, and the expression of p53p21 + p16 mRNA in the UVA miR-146a group was significantly higher than that in the control group (P0.01 / 146a overexpression group). There was no significant difference in the expression of p53p21p16mRNA between the UVA irradiation group and the blank control group (P0.05UVA / P0.05UVA / P0.05UVA / P0.05UVA / P0.05UVA / P0.05UVA / P0.05UVA / P0.05UVA / P0.05UVA / P0.05UVA / P0.05UVA The expression of Smad4 protein in the miR-146a group was significantly lower than that in the UVA irradiation group. The expression of Smad4 protein in the miR-146a group was significantly higher than that in the blank control group. There was no significant difference in the expression of Smad4 protein between the control group and the blank control group. The expression of Smad4 protein in UVA miR-146a group was significantly lower than that in UVA irradiation group. Conclusion UVA induces the inhibition of miR-146a expression in human skin fibroblasts induced by photoaging, and up-regulation of miR-146a expression can inhibit the expression of Smad4, promote the proliferation of photoaged cells, and play an anti-aging role.
【作者單位】： 四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院四川省人民醫(yī)院皮膚性病研究所;
【基金】：國(guó)家“973”計(jì)劃項(xiàng)目(No.2011CB707805) 國(guó)家臨床重點(diǎn)專(zhuān)科建設(shè)項(xiàng)目(〔2014〕1081) 四川省國(guó)際科技合作與交流計(jì)劃項(xiàng)目(No.2015KW-041) 四川省科技廳項(xiàng)目(No.2013JY0194)
【分類(lèi)號(hào)】：R758.1

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本文編號(hào)：1871486