本文選題：DKK1 + 惡性黑素瘤��； 參考：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2010年碩士論文

【摘要】： 目的利用DKK1腺病毒質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染人惡性黑素瘤細(xì)胞株A375,觀察轉(zhuǎn)染后DKK1和β-catenin表達(dá)量的變化,研究DKK1高表達(dá)對(duì)惡性黑素瘤增殖的影響。 方法構(gòu)建DKK1腺病毒(Adenovirus)質(zhì)粒;實(shí)驗(yàn)分為三組:Ⅰ組:Ad-DKK1-GFP轉(zhuǎn)染組(實(shí)驗(yàn)組)、Ⅱ組:Ad-GFP轉(zhuǎn)染組(空載腺病毒對(duì)照組)、Ⅲ組:空白細(xì)胞對(duì)照組;轉(zhuǎn)染人惡性黑素瘤細(xì)胞株A375,確定DKK1在人惡性黑素瘤細(xì)胞株中高表達(dá);RT-PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染后細(xì)胞中β-catenin表達(dá)水平的改變;細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測(cè)DKK1對(duì)細(xì)胞增殖的影響;MTT檢測(cè)DKK1對(duì)細(xì)胞活力的影響;建立裸鼠移植瘤模型;對(duì)瘤體重量做統(tǒng)計(jì)學(xué)分析;免疫組化分析瘤體內(nèi)DKK1和β-catenin表達(dá)的變化。 結(jié)果1.重組腺病毒能有效轉(zhuǎn)染A375細(xì)胞,轉(zhuǎn)染效率較高,當(dāng)MOI為80時(shí),細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率為80%左右。2.RT-PCR檢測(cè)結(jié)果:轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定高表達(dá)DKK1,而β-catenin的表達(dá)降低。3.細(xì)胞計(jì)數(shù)法檢測(cè)結(jié)果:24H/48H細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果均顯示:實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較增殖受到抑制。4.MTT法檢測(cè)結(jié)果:實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較細(xì)胞活力降低。5.瘤體重量分析結(jié)果:實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較瘤體重量較輕。6.免疫組化結(jié)果:實(shí)驗(yàn)組的DKK1表達(dá)和對(duì)照組比較有增強(qiáng),而β-catenin的表達(dá)減弱。 結(jié)論1.重組腺病毒在體外能有效轉(zhuǎn)染人惡性黑素瘤細(xì)胞株A375,轉(zhuǎn)染效率高。2.轉(zhuǎn)染后細(xì)胞能有效表達(dá)DKK1,并能抑制β-catenin的表達(dá)。3. DKK1在體內(nèi)外對(duì)A375的增殖均有一定的抑制作用。
[Abstract]:Objective to observe the expression of DKK1 and 尾 -catenin in human malignant melanoma cell line A375 by using DKK1 adenovirus plasmid, and to study the effect of high expression of DKK1 on the proliferation of malignant melanoma. Methods Adenovirusplasmid of DKK1 adenovirus was constructed, and was divided into three groups: group 鈪，

本文編號(hào)：1795395