本文關(guān)鍵詞： MMP- FAK RNA 干擾 黑色素瘤　出處：《中國生物工程雜志》2014年09期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的:觀察雙基因聯(lián)合干擾MMP-9和FAK對小鼠黑色素瘤高轉(zhuǎn)移細(xì)胞B16F10體外侵襲、遷移能力的影響。方法:分別構(gòu)建pGV102-MMP9-siRNA,pGV102-FAK-siRNA重組質(zhì)粒載體,脂質(zhì)體~(TM)2000介導(dǎo)轉(zhuǎn)染小鼠黑色素瘤B16F10細(xì)胞,實驗分為空白對照組、Anti-MMP-9組,AntiFAK組、Anti-MMP-9FAK組、陰性對照組。經(jīng)G418篩選GFP+克隆,流式細(xì)胞儀分析陽性率,激光共聚焦觀察轉(zhuǎn)染后細(xì)胞形態(tài),半定量RT-PCR檢測各組B16F10細(xì)胞MMP-9和FAK基因的mRNA轉(zhuǎn)錄水平,Transwell侵襲、遷移實驗測定各組B16F10細(xì)胞體外侵襲、遷移能力。結(jié)果:經(jīng)G418篩選,3個轉(zhuǎn)染組陽性率分別為92.41±1.64%,95.72±0.21%,91.52±0.11%,且轉(zhuǎn)染后細(xì)胞形態(tài)良好;與空白對照組相比,3個轉(zhuǎn)染組的MMP-9,FAK mRNA轉(zhuǎn)錄水平下降明顯(P0.01),遷移、侵襲能力明顯降低(P0.01),但Anti-MMP-9FAK組細(xì)胞侵襲遷移能力顯著低于Anti-MMP-9組和Anti-FAK組(P0.01)。結(jié)論:相比單獨(dú)沉默MMP-9或FAK,聯(lián)合沉默MMP-9和FAK可明顯降低小鼠黑色素瘤B16F10細(xì)胞體外遷移、侵襲能力。
[Abstract]:Aim: to observe the effect of two genes combined with interference of MMP-9 and FAK on the invasion and migration of mouse melanoma cell line B16F10 in vitro. Methods: pGV102-MMP9-siRNA-pGV102-FAK-siRNA recombinant plasmid vector was constructed and transfected into murine melanoma B16F10 cell line mediated by liposome / TMF2000. The experiment was divided into two groups: Anti-MMP-9 group, anti-MMP-9 group and anti-MMP-9 FAK group, negative control group. GFP clones were screened by G418, positive rate was analyzed by flow cytometry, and morphology of transfected cells was observed by confocal laser. The mRNA transcription level of MMP-9 and FAK gene in B16F10 cells was detected by semi-quantitative RT-PCR, and the invasion and migration ability of B16F10 cells in vitro was measured by migration assay. Results: the positive rates of the three transfection groups were 92.41 鹵1.64 + 95. 72 鹵0. 21 + 91. 52 鹵0. 11, respectively, and the morphology of the transfected B16F10 cells was good. Compared with the control group, the transcription level of MMP-9 and FAK mRNA in the three transfection groups decreased significantly (P 0.01) and migrated. The invasion ability of B16F10 cells in Anti-MMP-9FAK group was significantly lower than that in Anti-MMP-9 group and Anti-FAK group. Conclusion: compared with MMP-9 or FAK alone, combined silencing of MMP-9 and FAK can significantly reduce the migration and invasion ability of murine melanoma B16F10 cells in vitro.
【作者單位】： 西南大學(xué)生物技術(shù)學(xué)院;重慶醫(yī)科大學(xué)生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)院
【基金】：國家“973計劃”項目資助(2012CB722402)
【分類號】：R739.5

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

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本文編號：1541691