跨膜接頭蛋白PAG1過表達(dá)對(duì)皮膚鱗癌細(xì)胞A431運(yùn)動(dòng)能力的影響
本文關(guān)鍵詞:跨膜接頭蛋白PAG1過表達(dá)對(duì)皮膚鱗癌細(xì)胞A431運(yùn)動(dòng)能力的影響 出處:《腫瘤防治研究》2016年09期 論文類型:期刊論文
【摘要】:目的研究跨膜接頭蛋白PAG1過表達(dá)對(duì)人皮膚鱗狀細(xì)胞癌A431運(yùn)動(dòng)能力的影響。方法構(gòu)建PAG1-EGFP融合蛋白的慢病毒表達(dá)載體,采用反轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)染的方法建立PAG1過表達(dá)的A431細(xì)胞株,實(shí)驗(yàn)分為3組:親本細(xì)胞組(未進(jìn)行基因轉(zhuǎn)染的A431細(xì)胞)、對(duì)照組(A431細(xì)胞轉(zhuǎn)染僅含EGFP陰性對(duì)照病毒)、實(shí)驗(yàn)組(A431細(xì)胞轉(zhuǎn)染PAG1-EGFP病毒)。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞轉(zhuǎn)染率,實(shí)時(shí)熒光定量PCR及Western blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染后PAG1 mRNA及其蛋白表達(dá),進(jìn)一步驗(yàn)證細(xì)胞轉(zhuǎn)染成功與否;利用劃痕修復(fù)實(shí)驗(yàn)、Transwell遷移實(shí)驗(yàn)、侵襲實(shí)驗(yàn)三種不同的方法檢測(cè)PAG1基因的過表達(dá)是否會(huì)對(duì)皮膚鱗癌細(xì)胞的生長(zhǎng)、遷移和侵襲能力產(chǎn)生影響。結(jié)果實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組目的基因病毒的轉(zhuǎn)染表達(dá)率分別為(94.97±0.15)%、(94.60±0.35)%;實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞中PAG1基因m RNA的表達(dá)量約為親本細(xì)胞組的1.6倍(P=0.000),轉(zhuǎn)染后實(shí)驗(yàn)組中PAG1蛋白的相對(duì)表達(dá)水平明顯增加(P=0.000),建立了穩(wěn)定過表達(dá)PAG1的A431細(xì)胞系;PAG1過表達(dá)明顯降低A431細(xì)胞愈合率(P=0.000);實(shí)驗(yàn)組A431細(xì)胞遷移、侵襲能力明顯降低(P=0.001,P=0.000)。結(jié)論 PAG1的過表達(dá)能抑制人皮膚鱗癌細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力,影響腫瘤的浸潤(rùn)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。
[Abstract]:Objective To investigate the effect of overexpression of PAG1 overexpression on the expression of PAG1 - EGFP fusion protein in human skin squamous cell carcinoma A431 cells . Conclusion The overexpression of PAG1 can inhibit the movement of human skin squamous carcinoma cells and influence invasion and distant metastasis of tumor .
【作者單位】: 青島大學(xué)附屬醫(yī)院燒傷整形外科;青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院免疫教研室;青島市市立醫(yī)院(集團(tuán))胸外科;
【分類號(hào)】:R739.5
【正文快照】: 0引言物:5’-GATGACCTTGCCCACAGCCT-3’,下游引皮膚鱗狀細(xì)胞癌(cutaneous squamous cell物:5’-ATCTCTGCCCCCTCTGCTGA-3’。反應(yīng)條carcinoma,c SCC)起源于表皮角質(zhì)形成細(xì)胞,是件:95℃10 min;95℃10 s、60℃20 s、72℃10 s,世界第二大最常見的非黑色素瘤皮膚癌[1]。腫瘤40個(gè)循
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