本文關(guān)鍵詞：胸腺素β4對小鼠毛發(fā)生長的影響及其作用機(jī)制　出處：《內(nèi)蒙古大學(xué)》2015年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：胸腺素β4 (Thymosin beta4, Tβ4)能夠促進(jìn)毛發(fā)生長和毛囊發(fā)育,然而其作用機(jī)制尚不明確。我們構(gòu)建Tβ4表皮特異性過表達(dá)小鼠模型和全身性敲除小鼠模型,進(jìn)一步研究Tβ4對毛囊發(fā)育與毛發(fā)生長的影響,并探索其作用機(jī)制。設(shè)計合適的靶位點和DNA識別序列,構(gòu)建TALEN基因敲除載體。分別用TALEN基因敲除載體和表皮特異性載體的表達(dá)框進(jìn)行原核注射,制備Tβ4敲除小鼠和表皮特異性過表達(dá)小鼠。通過脫毛實驗比較三組小鼠的毛發(fā)生長速度。取脫毛部位皮膚組織做石蠟切片,通過HE染色觀察毛囊分布,統(tǒng)計毛干數(shù)目；通過Tβ4蛋白免疫熒光染色,觀察皮膚中Tβ4蛋白分布情況。通過real-time PCR 和 western blotting技術(shù)檢測上述樣品中Tβ4、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、基質(zhì)金屬蛋白酶-2(MMP-2)和鈣粘蛋白(E-cad)的mRNA和蛋白表達(dá)水平,接著檢測Wnt、MAPK和PI3K信號通路的活性,探索Tβ4影響毛發(fā)生長的作用機(jī)制。1、TALEN基因敲除載體和表皮特異性過表達(dá)載體的構(gòu)建根據(jù)Tβ4的編碼序列(CDs)設(shè)計合適的靶位點和DNA識別序列,構(gòu)建TALEN基因敲除載體。用構(gòu)建好的6組TALEN敲除載體轉(zhuǎn)染小鼠NIH3T3細(xì)胞,從中篩選出打靶效率最高的一組L1×R3,打靶效率為93%,進(jìn)行原核注射,制備Tβ4全身性敲除小鼠。將pODsRed-KTP1載體上包含Krt14啟動子、Tβ4的CDs區(qū)和polyA序列的片段(KTP片段)切下并純化后,進(jìn)行原核注射制備Tβ4表皮特異性過表達(dá)小鼠。2、Tβ4敲除小鼠和過表達(dá)小鼠的制備原核注射時,225枚注射后胚胎移植到7只受體鼠體內(nèi),得到40只新生小鼠,其中3只Tβ4表皮特異性過表達(dá)小鼠,陽性率分別為7.5%；127枚注射后胚胎移植到5只受體鼠體內(nèi),得到25只新生小鼠,其中8只敲除小鼠,突變率為32%。3、Tβ4對小鼠毛發(fā)生長的影響用松香蠟對8-10周齡的野生型小鼠、Tβ4全身性敲除小鼠和表皮特異性過表達(dá)小鼠進(jìn)行脫毛實驗,刺激毛發(fā)同步生長。在三組實驗小鼠脫毛后第11天拍照,記錄毛發(fā)的生長情況。觀察發(fā)現(xiàn)：野生型小鼠脫毛后第13天、Tβ4敲除小鼠脫毛后第16天和過表達(dá)小鼠脫毛后第11天,其脫毛部位毛發(fā)生長情況相同。取三組小鼠脫毛部位的皮膚,制作石蠟切片并進(jìn)行Tβ4蛋白免疫熒光染色和HE染色,觀察Tβ4在小鼠皮膚中的分布情況和其對毛囊排列方式和毛干數(shù)目的影響。與野生型小鼠相比,Tβ4過表達(dá)小鼠長毛速度最快、被毛較長且厚,而全身性敲除小鼠長毛速度較慢并且被毛沒有長出體表。HE染色與免疫熒光染色的結(jié)果表明,對照組小鼠的毛囊獨立地分布,Tβ4只分布在毛囊周圍的細(xì)胞中；而Tβ4過表達(dá)小鼠的毛囊成簇生長,毛干數(shù)目顯著提高,Tβ4幾乎分布于整個皮膚中；Tβ4敲除小鼠的毛囊獨立地排列,與對照組小鼠相比毛干數(shù)目顯著減少,且在毛囊周圍細(xì)胞與組織中未見Tβ4的分布。4、Tβ4影響毛發(fā)生長的作用機(jī)制與對照組相比,Tβ4過表達(dá)小鼠體內(nèi)Tβ4的mRNA水平和蛋白水平表達(dá)量升高(P0.05),VEGF和MMP-2的mRNA和蛋白表達(dá)水平也增加(P0.05),而E-cad的mRNA水平和蛋白表達(dá)量沒有明顯變化(P0.05)；在敲除小鼠體內(nèi)VEGF和MMP-2的表達(dá)水平顯著降低(P0.05),E-cad的表達(dá)水平保持穩(wěn)定(P0.05)。Wnt信號通路中P-catenin和LEF-1蛋白表達(dá)量的變化與Tβ4表達(dá)水平的變化趨勢一致。在過表達(dá)小鼠體內(nèi),與對照組相比P38、ERK1/2和AKT的蛋白表達(dá)量以及磷酸化水平均提高；在敲除小鼠體內(nèi)P38、ERK1/2和AKT的蛋白表達(dá)量顯著降低,而只有ERK1/2的磷酸化水平顯著降低(P0.05)。綜上所述,我們認(rèn)為在成熟小鼠皮膚中,Tβ4通過Wnt/β-catenin/LEF-1信號通路,調(diào)控VEGF和MMP-2的表達(dá)。兩方面相互促進(jìn)共同作用,進(jìn)一步影響MAPK/P38、MAPK/ERK1/2和PI3K/AKT途徑活性的改變,調(diào)控毛發(fā)生長速度、毛干的數(shù)目與毛囊分布,最終影響毛囊生長發(fā)育。
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R758.71

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中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王艷榮;中藥“脫發(fā)再生靈”促毛發(fā)生長的實驗研究[J];醫(yī)學(xué)動物防制;2003年09期

2 黎福祥;;飲食與毛發(fā)生長的關(guān)系[J];新醫(yī)藥通訊;1980年01期

3 馬璽里;張?zhí)鞂?;化學(xué)物對毛發(fā)毒性的體外評價方法[J];毒理學(xué)雜志;2007年04期

4 沈大為;;羊毛狀卷曲發(fā)一例報告[J];新疆醫(yī)學(xué)院學(xué)報;1984年03期

5 朱家珠;;肌皮瓣重建時毛發(fā)生長的預(yù)防[J];國外醫(yī)學(xué).耳鼻咽喉科學(xué)分冊;1992年01期

6 ;松筋治療常見病——防脫發(fā)[J];家庭醫(yī)學(xué)(下半月);2011年03期

7 王瑩,楊淑霞,秦儉,涂平,馬圣清;甲狀旁腺激素對小鼠毛發(fā)周期和毛發(fā)生長的影響[J];臨床皮膚科雜志;2002年04期

8 焦新勝,王陽,侯圣貴;延緩毛發(fā)生長的動物實驗[J];中國美容醫(yī)學(xué);2003年03期

9 何志新;;環(huán)孢菌素對裸鼠毛發(fā)生長的影響[J];國外醫(yī)學(xué).皮膚性病學(xué)分冊;1993年01期

10 施禹;;中年男子的生理變化[J];科學(xué)養(yǎng)生;2001年01期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 拓江;吳波;陳瓊;路永紅;;乳頭狀汗管囊腺瘤一例[A];2011全國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2011年

2 王艷蓉;;中藥“脫發(fā)再生靈”促毛發(fā)生長的實驗研究[A];中國實驗動物學(xué)會第六屆學(xué)術(shù)年會論文集[C];2004年

3 戴葉芹;范衛(wèi)新;;缺氧誘導(dǎo)因子對毛發(fā)生長作用的初步研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第十二次全國皮膚性病學(xué)術(shù)會議論文集[C];2006年

4 許成蓉;鄭源泉;嚴(yán)后友;;拉坦前列素對人頭皮毛囊毛發(fā)生長的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會第十二次全國皮膚性病學(xué)術(shù)會議論文集[C];2006年

5 趙玉磊;范衛(wèi)新;;黃芪、女貞子、人參等中藥混合煎劑促毛發(fā)生長的在體研究[A];2003中國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2003年

6 張玉萍;李海英;張應(yīng)文;;從心論治脫發(fā)的認(rèn)識[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會第九屆中醫(yī)醫(yī)史文獻(xiàn)學(xué)術(shù)研討會論文集萃[C];2006年

7 閆秋虹;陳宏;;從氣血論脫發(fā)[A];第五屆全國中西醫(yī)結(jié)合變態(tài)反應(yīng)學(xué)術(shù)會議論文集[C];2011年

8 馬璽里;張?zhí)鞂?;化學(xué)物對SD大鼠毛發(fā)生長發(fā)育體外評價系統(tǒng)的建立[A];2006年全國藥物毒理學(xué)會議論文集[C];2006年

9 程波;;毛發(fā)生長的調(diào)控與斑禿的治療[A];2013全國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2013年

10 周宏元;張?zhí)鞂?;CK-794致ICR小鼠毛發(fā)生長發(fā)育異常動物模型的建立[A];2006年全國藥物毒理學(xué)會議論文集[C];2006年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 高春東;生活壓力大　女性脫發(fā)多[N];中國醫(yī)藥報;2004年

2 周勤　記者　王春;健康皮膚誰制造[N];科技日報;2007年

3 記者 葛進(jìn)　陳超;科學(xué)家找到引起脫發(fā)的基因[N];科技日報;2009年

4 伍學(xué)焱;男性更年期脫發(fā)何因[N];大眾科技報;2001年

5 本報記者 王家乾;營養(yǎng)合理 讓黑頭發(fā)飄起來[N];中國消費者報;2003年

6 王崇;藥療病理性脫發(fā)[N];保健時報;2004年

7 廖尚剛;秋季需防脫發(fā)[N];云南科技報;2000年

8 ;“補(bǔ)”出來的“小毛孩”[N];中國教育資訊報;2002年

9 陳勇;頭發(fā)的養(yǎng)護(hù)要則[N];中國消費者報;2002年

10 張正修;調(diào)理飲食防脫發(fā)[N];中國中醫(yī)藥報;2006年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 高笑宇;胸腺素β4對小鼠毛發(fā)生長的影響及其作用機(jī)制[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2015年

2 周宏元;CK-794致小鼠毛發(fā)生長發(fā)育異常動物模型的建立及其基因表達(dá)譜的分析[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2006年

3 張書鋒;茶多酚對化療脫發(fā)的預(yù)防作用研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2008年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前9條

1 羅奇桓;物化作用對大鼠毛發(fā)生長的影響[D];華中科技大學(xué);2008年

2 鄭源泉;拉坦前列素對毛發(fā)生長影響的實驗研究[D];華中科技大學(xué);2006年

3 趙玉磊;黃芪、女貞子、人參等中藥促毛發(fā)生長的在體研究及其對化療后脫發(fā)的影響[D];南京醫(yī)科大學(xué);2003年

4 張興洪;中藥煎劑對豬毛囊毛發(fā)生長及阿霉素誘導(dǎo)的豬毛囊細(xì)胞損傷的影響[D];南京醫(yī)科大學(xué);2004年

5 劉鵬林;何桑凝膠生發(fā)作用的實驗與臨床研究[D];山東中醫(yī)藥大學(xué);2010年

6 宋林濤;重組人成纖維細(xì)胞生長因子18（rhFGF18）的表達(dá)、純化及對毛發(fā)生長的影響[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

7 薛芬;章光101生發(fā)系列產(chǎn)品對C57BL/6J小鼠毛發(fā)生長的影響[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2009年

8 王鑫;低頻電磁場對小鼠毛發(fā)生長及KGF、β-catenin表達(dá)影響的研究[D];暨南大學(xué);2014年

9 韓向暉;生發(fā)劑SFJ的藥效學(xué)與機(jī)制初探[D];沈陽藥科大學(xué);2001年

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本文編號：1310269