本文關(guān)鍵詞：二苯乙烯苷對中波紫外線誘導(dǎo)人皮膚成纖維細(xì)胞光老化的保護(hù)作用研究

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【摘要】：目的采用中波紫外線(ultraviolet B, UVB)低劑量、反復(fù)多次照射體外培養(yǎng)的人皮膚成纖維細(xì)胞(human skin fibroblast, HSF),模擬皮膚細(xì)胞光老化。在此基礎(chǔ)上,研究二苯乙烯苷(2,3,5,4'-tetrahydroxystilbene-2-O-beta-D-glucoside, TSG)對UVB誘導(dǎo)的應(yīng)激性提早衰老(stress-induced premature senescence, SIPS)的HSF的保護(hù)性干預(yù)作用。方法1.UVB誘導(dǎo)人皮膚成纖維細(xì)胞進(jìn)入應(yīng)激性提早衰老(SIPS)狀態(tài)UVB小劑量、多次照射皮膚成纖維細(xì)胞,倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)改變、臺盼藍(lán)染色法計算細(xì)胞存活率、p-半乳糖苷酶(senescence-associated bgalactosidase, Sa-P-gal)染色檢測衰老細(xì)胞,酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)測定細(xì)胞上清液中基質(zhì)金屬蛋白酶-1(MMP-1)的含量變化,TBA法、WST-1法、紫外比色法分別檢測細(xì)胞裂解液中丙二醛(maleic dialdehyde, MDA)含量及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)活力,找到最適UVB照射劑量,構(gòu)建體外皮膚細(xì)胞早衰模型。2.二苯乙烯苷(TSG)對應(yīng)激性早衰的成纖維細(xì)胞的影響在皮膚早衰模型的基礎(chǔ)上用不同濃度二苯乙烯苷進(jìn)行干預(yù),實驗分成空白對照組(不做處理),UVB-SIPS組(單純照光),0.5mmol/L TSG組(單純加藥),UVB+0.02mmol/LTSG組、UVB+0.1mmol/LTSG組、UVB+0.5mmol/L TSG組(UVB照射聯(lián)合藥物處理)。采用細(xì)胞計數(shù)法(CCK-8)檢測細(xì)胞增殖活性,細(xì)胞化學(xué)染色法檢測衰老相關(guān)Sa-β-gal的表達(dá);TBA法、WST-1法、紫外比色法分別檢測細(xì)胞裂解液中MDA含量及SOD活性；ELISA法測定細(xì)胞上清液中基質(zhì)金屬蛋白酶-1(MMP-1)的含量變化。采用單因素方差分析進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析。結(jié)果1.UVB輻射劑量累積達(dá)到60mJ/cm2時,細(xì)胞衰老p-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)化學(xué)染色結(jié)果呈強(qiáng)陽性,ELISA法檢測細(xì)胞上清液中MMP-1分泌顯著增加,提示這個劑量照射后細(xì)胞進(jìn)入衰老狀態(tài)；倒置顯微鏡下觀察,細(xì)胞變得扁平、寬大,胞漿透明,胞核內(nèi)顆粒增多；酶化學(xué)法檢測細(xì)胞裂解液中超氧化物歧化酶(SOD)活力明顯下降,丙二醛(MDA)水平升高；結(jié)果表明HSF經(jīng)UVB亞毒劑量、重復(fù)多次照射誘導(dǎo)后進(jìn)入SIPS狀態(tài)。2. UVB+0.02mmol/L TSG組、UVB+O.lmmol/L TSG組、UVB+0.5mmol/L TSG組以及UVB-SIPS組細(xì)胞增殖活性(A450)依次為0.3177±0.0175、0.3352±0.0289、0.3546±0.0221、0.2325±0.0296(F=89.12,P0.05),β-半乳糖苷酶染色陽性率依次為(85.33±3.82)%、(57.50±6.27)%、(47.00±4.82)%、(90.33±3.55)%(F=297.50,P0.05；與UVB-SIPS組比較,除UVB+0.02mmol/L TSG組外,其他兩組均P0.05)。與UVB-SIPS組相比,UVB+各濃度TSG組細(xì)胞MDA含量降低(F=775.8, P0.01), SOD活力增加(F=224.3,除UVB+0.02mmol/L TSG組P0.05外,其他各組均P0.05), MMP-1分泌減少(F=55.40,除UVB+0.02mmol/L TSG組P0.05外,其他各組均P0.05),各指標(biāo)檢測值的變化與TSG濃度之間呈一定依賴性。結(jié)論1.UVB小劑量、多次照射,累積劑量達(dá)到60mJ/cm2時,可誘導(dǎo)HSF細(xì)胞進(jìn)入SIPS狀態(tài),可作為光老化生物學(xué)研究的體外細(xì)胞模型之一。2.二苯乙烯苷對于UVB照射人皮膚成纖維細(xì)胞的增殖有一定促進(jìn)作用,并可有效抑制SA-β-Gal活化,減少細(xì)胞培養(yǎng)上清中MMP-1的含量,提高SOD抗氧化酶的活性,同時對抗UVB誘導(dǎo)的脂質(zhì)過氧化作用。故其能一定程度抑制UVB誘導(dǎo)的HSF光老化。
【學(xué)位授予單位】：浙江中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R751

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