本文關(guān)鍵詞：黑素瘤分泌的PAEP對體外T淋巴細(xì)胞免疫抑制作用的研究

  更多相關(guān)文章： PAEP基因 T淋巴細(xì)胞 免疫抑制 惡性黑素瘤

【摘要】：惡性黑素瘤是皮膚黑素細(xì)胞系統(tǒng)所發(fā)生的惡性程度最高的腫瘤之。盡管近年來生物科學(xué)在各個領(lǐng)域迅猛發(fā)展,黑素瘤的臨床治療手段卻沒有根本的改進(jìn),死亡病例高達(dá)皮膚癌所致死亡的80%,因此深入分析黑素瘤的發(fā)病機(jī)制,探索有效的治療方案非常重要。以往的研究表明,黑素瘤的發(fā)生發(fā)展與孕激素相關(guān)子宮內(nèi)膜蛋白(progestagen-associated endometrial protein, PAEP)表達(dá)量密切相關(guān),但是其作用機(jī)理尚不明確。本研究擬對PAEP促腫瘤發(fā)展的免疫機(jī)制進(jìn)行分析和探索。 PAEP又稱為glycodelin,最早是從人類胎盤、羊水、懷孕期子宮蛻膜中發(fā)現(xiàn)并分離出的一種糖蛋白。大量的研究表明,它能夠抑制T細(xì)胞的免疫活性,對妊娠期母體免疫耐受的建立和HLA半相合胚胎植入起重要的調(diào)節(jié)作用。我們以往的研究發(fā)現(xiàn)PAEP基因在惡性黑素瘤組織和及體外培養(yǎng)的細(xì)胞系中高水平表達(dá),對腫瘤細(xì)胞的遷移侵襲具有促進(jìn)作用。鑒于腫瘤侵襲和胚胎植入的相似性,我們推測存在這種可能：高表達(dá)的PAEP對T細(xì)胞具有負(fù)性調(diào)節(jié)作用,使得腫瘤細(xì)胞逃脫了免疫細(xì)胞的監(jiān)視和殺傷而迅速發(fā)生浸潤轉(zhuǎn)移。 為了證明這個假設(shè),我們從以下三方面進(jìn)行了研究：1.采用RT-PCR和Western blot檢測PAEP在黑素瘤細(xì)胞系中mRNA和蛋白的表達(dá)；2.利用化學(xué)合成的PAEP siRNA和PAEP shRNA重組慢病毒感染腫瘤細(xì)胞,下調(diào)PAEP的表達(dá)并通過藥物篩選獲得PAEP表達(dá)抑制的穩(wěn)定細(xì)胞系,為下一步實(shí)驗(yàn)提供蛋白樣品及細(xì)胞模型；3.分離人外周血單個核細(xì)胞及純化的CD8+T細(xì)胞,分別將PAEP蛋白或PAEP表達(dá)抑制的腫瘤細(xì)胞與淋巴細(xì)胞混合,與對照組相比觀察淋巴細(xì)胞的增殖、凋亡和腫瘤殺傷功能的變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：1.分別從mRNA和蛋白水平證實(shí)了PAEP基因在黑素瘤細(xì)胞系的表達(dá)；2. PAEP siRNA顯著降低了PAEP mRNA的表達(dá)；通過慢病毒轉(zhuǎn)染獲得了PAEP表達(dá)抑制的穩(wěn)定細(xì)胞系及非靶向shRNA對照細(xì)胞；3. PAEP條件培養(yǎng)上清加入體外活化的淋巴細(xì)胞后,細(xì)胞增殖明顯變慢,細(xì)胞凋亡比例增加；4.經(jīng)PAEP表達(dá)抑制的腫瘤細(xì)胞誘導(dǎo)的效應(yīng)琳巴細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的殺傷率明顯高于對照組。體外實(shí)驗(yàn)表明PAEP蛋白抑制淋巴細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒作用,增殖抑制作用可能由促凋亡引起。
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R739.5

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 趙滿倉;魏文青;安萍;劉晶;;MTT法檢測樹突狀細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞活性的實(shí)驗(yàn)研究[J];華北國防醫(yī)藥;2007年06期

2 趙燕;李成林;楊鶴鳴;付志臣;崔彥;;皮膚惡性黑色素瘤的臨床治療進(jìn)展[J];湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報;2011年04期

3 任素萍,孔繁華,金荔,陳興國,屠敏;HLA-A~*02等位基因分型技術(shù)及漢族HLA-A~*02多態(tài)性研究[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;1999年03期

4 謝啟超;王玲俐;陳正堂;;腫瘤微環(huán)境內(nèi)免疫耐受機(jī)制研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué);2008年05期

5 王貴強(qiáng);周業(yè)江;;腫瘤免疫耐受機(jī)制的研究進(jìn)展[J];實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志;2008年18期

6 馬芳;王智彪;;胚胎發(fā)育與腫瘤形成的研究進(jìn)展[J];腫瘤防治研究;2006年04期

，

本文編號：1237285