本文關(guān)鍵詞：IL-17對小鼠黑色素瘤細(xì)胞體外VEGF-a表達(dá)和血管生成擬態(tài)的影響

  更多相關(guān)文章： IL-17 VEGF B16細(xì)胞 黑色素瘤 遷移 侵襲 血管生成 血管生成擬態(tài)

【摘要】：目的 在前期研究的基礎(chǔ)上,通過體外實(shí)驗(yàn)探討IL-17對B16細(xì)胞血管內(nèi)皮生長因子(vascularendothelial growth factor, VEGF)-a表達(dá)水平和對B16細(xì)胞血管生成擬態(tài)(vasculogenic mimicry, VM)的影響,從而闡明IL-17對黑色素瘤血管生成的影響。 方法 體外培養(yǎng)小鼠黑色素瘤B16細(xì)胞,用不同濃度重組鼠IL-17處理細(xì)胞,設(shè)空白對照組。分別采用MTT法和ELISA法檢測不同濃度IL-17對B16細(xì)胞增殖能力和VEGF-a表達(dá)水平的影響；通過Transwell遷移、侵襲實(shí)驗(yàn),明膠酶譜法和三維培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)觀察不同濃度IL-17對B16細(xì)胞遷移、侵襲能力,MMP-2、MMP-9和VM形成能力的影響；通過Western-blot和免疫熒光染色法檢測B16細(xì)胞中IL-17受體(IL-17receptor, IL-17R)的表達(dá)情況。 結(jié)果 1.MTT法檢測結(jié)果顯示,不同濃度(5、10、20、50、100ng/mL) IL-17處理組與對照組相比,B16細(xì)胞的增殖能力無明顯變化(P0.05)；ELISA法檢測結(jié)果顯示,不同濃度(10、50、100ng/mL)IL-17處理的B16細(xì)胞培養(yǎng)上清液中VEGF-a含量比對照組升高(P0.05),呈濃度依賴性。 2.觀察不同濃度IL-17(10、50、100ng/mL)對B16細(xì)胞遷移、侵襲能力,MMP-2和MMP-9活性及VM的影響。Transwell遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,不同濃度IL-17處理的B16細(xì)胞穿膜細(xì)胞數(shù)比對照組明顯增多(P0.05),呈濃度依賴性；Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,不同濃度IL-17處理的B16細(xì)胞穿膜細(xì)胞數(shù)比對照組明顯增多(P0.05),呈濃度依賴性；明膠酶譜法分析結(jié)果顯示,不同濃度IL-17處理的B16細(xì)胞MMP-9的活性比對照組增強(qiáng)(P0.05),呈濃度依賴性,lOng/mL IL-17組MMP-2活性無明顯變化(P0.05),50、100ng/mLIL-17組MMP-2活性增強(qiáng)(P0.05)；三維培養(yǎng)結(jié)果顯示,不同濃度IL-17處理的B16細(xì)胞體外VM形成能力與對照組相比無明顯變化(P0.05)。 3.Western-blot檢測結(jié)果顯示B16細(xì)胞高表達(dá)IL-17R,免疫熒光染色顯示B16細(xì)胞中可見IL-17R的陽性表達(dá),IL-17R主要定位表達(dá)于胞膜和胞漿。 結(jié)論 1.IL-17可以誘導(dǎo)B16細(xì)胞分泌VEGF-a。IL-17不直接影響B(tài)16細(xì)胞的增殖。 2.能力本研究中IL-17對B16細(xì)胞體外血管生成擬態(tài)無影響,但可通過增強(qiáng)MMP-2、MMP-9活性促進(jìn)B16細(xì)胞遷移和侵襲,具有促進(jìn)B16細(xì)胞轉(zhuǎn)移的潛能。 3.IL-17R表達(dá)于B16細(xì)胞中,IL-17可能通過IL-17R信號通路發(fā)揮其對B16細(xì)胞的上述調(diào)節(jié)作用,其具體機(jī)制尚待進(jìn)一步研究。
【關(guān)鍵詞】：IL-17 VEGF B16細(xì)胞 黑色素瘤 遷移 侵襲 血管生成 血管生成擬態(tài)
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R739.5
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 符號說明10-12
• 前言12-16
• 研究現(xiàn)狀、成果12-14
• 研究目的、方法14-16
• 一、IL-17對B16細(xì)胞增殖和VEGF-a表達(dá)的影響16-26
• 1.1 對象和方法16-20
• 1.1.1 細(xì)胞系16
• 1.1.2 主要材料與試劑16
• 1.1.3 主要器材與儀器16-17
• 1.1.4 主要溶液的配制17
• 1.1.5 主要實(shí)驗(yàn)方法17-19
• 1.1.6 統(tǒng)計(jì)方法19-20
• 1.2 結(jié)果20-21
• 1.3 討論21-25
• 1.4 小結(jié)25-26
• 二、IL-17對B16細(xì)胞遷移、侵襲和VM的影響26-45
• 2.1 對象和方法26-34
• 2.1.1 細(xì)胞系26
• 2.1.2 主要材料與試劑26
• 2.1.3 主要器材與儀器26-27
• 2.1.4 主要溶液的配制27-28
• 2.1.5 主要實(shí)驗(yàn)方法28-34
• 2.1.6 統(tǒng)計(jì)方法34
• 2.2 結(jié)果34-39
• 2.2.1 IL-17對B16細(xì)胞遷移能力的影響34-35
• 2.2.2 IL-17對B16細(xì)胞侵襲能力的影響35-36
• 2.2.3 IL-17對B16細(xì)胞MMP-2、MMP-9活性的影響36-38
• 2.2.4 IL-17對B16細(xì)胞體外VM形成能力影響的結(jié)果38
• 2.2.5 B16細(xì)胞中IL-17R的表達(dá)情況38-39
• 2.3 討論39-44
• 2.4 小結(jié)44-45
• 結(jié)論45-46
• 參考文獻(xiàn)46-50
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明50-51
• 綜述51-61
• 綜述參考文獻(xiàn)58-61
• 致謝61

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：1065368