本文關(guān)鍵詞：RNAi干擾黑色素瘤細(xì)胞Notch1基因表達(dá)對小鼠腫瘤免疫機制影響

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【摘要】：目的探討靶向Notch1的siRNA抑制惡性黑色素瘤Notch通路對小鼠機體抗腫瘤免疫的影響。方法采用RNA干擾小鼠黑色素瘤細(xì)胞B16F1Notch1基因的表達(dá),酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)法檢測轉(zhuǎn)染前后腫瘤細(xì)胞分泌免疫抑制因子轉(zhuǎn)化生長因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)、白細(xì)胞介素10(interleukin-10,IL-10)和血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的變化。制作小鼠黑色素瘤模型,在腫瘤生長過程中瘤內(nèi)注射siNotch1,記錄腫瘤生長情況,手術(shù)切除腫瘤組織,流式細(xì)胞術(shù)檢測腫瘤組織中g(shù)p100抗原特異性CD8+T細(xì)胞的比例,ELISA法比較各組腫瘤勻漿上清中IFN-γ和免疫抑制因子TGF-β的含量變化,免疫組化法分析腫瘤組織中FoxP3+Treg細(xì)胞的數(shù)量。結(jié)果 siNotch1轉(zhuǎn)染后,成功下調(diào)了黑色素瘤細(xì)胞Notch1基因的表達(dá)。ELISA實驗結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染后siNotch1組、siNC組和mock組細(xì)胞上清TGF-β分泌量分別為(0.665±0.242)、(1.413±0.153)和(1.623±0.111)ng/mL,F=40.237,P=0.000 48;VEGF的分泌量分別為(399.9±79.42)、(397.3±107.0)和(388.6±136.8)ρg/mL,差異無統(tǒng)計學(xué)意義,F=0.015,P=0.986;IL-10的分泌量為(38.93±12.45)、(41.84±9.85)和(45.81±9.36)ρg/mL,差異無統(tǒng)計學(xué)意義,F=0.525,P=0.604。siNotch1瘤內(nèi)注射之后,小鼠腫瘤生長明顯減慢。流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果顯示,siNotch1組、siNC組和mock組gp100抗原特異性CD8+T細(xì)胞的比例分別為(5.54±1.68)%、(2.43±1.09)%和(2.57±1.16)%,F=12.643,P=0.000 25。免疫組化結(jié)果顯示,FoxP3平均陽性細(xì)胞數(shù)分別為23.13±6.75、38.63±10.68和41.75±12.10,F=7.802,P=0.003。腫瘤組織勻漿ELISA結(jié)果顯示,siNotch1組、siNC組和mock組IFN-γ的濃度分別為(10.047±1.775)、(4.121±1.379)和(3.698±1.253)ng/mL,F=45.660,P=0.000 23;TGF-β的濃度分別為(3.738±1.203)、(7.663±2.114)和(7.545±2.080)ng/mL,F=11.687,P=0.000 39。結(jié)論 siNotch1抑制黑色素瘤細(xì)胞Notch通路后,可以降低其分泌TGF-β的含量,從而降低其對淋巴細(xì)胞的抑制作用,增加腫瘤組織中g(shù)p100抗原特異性CD8+T細(xì)胞的浸潤,促進(jìn)IFN-γ的分泌,降低Treg細(xì)胞的比例,增強機體抗腫瘤免疫功能。
【作者單位】： 南方醫(yī)科大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院腫瘤中心;懷化市第一人民醫(yī)院腫瘤中心;
【關(guān)鍵詞】： 惡性黑色素瘤 抗腫瘤免疫 siRNA瘤內(nèi)注射 siNotch
【基金】：廣東省自然科學(xué)基金(10251051501000008) 南方醫(yī)科大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院院長基金(1201301001)
【分類號】：R739.5
【正文快照】： 中華腫瘤防治雜志,2015,22(12):917-923Chin J Cancer Prev Treat,2015,22(12):917-923黑色素瘤的免疫治療在惡性黑色素瘤綜合治療中占有重要地位,免疫治療早期效果好,但腫瘤細(xì)胞具有免疫逃逸功能,阻礙了免疫治療療效的有效發(fā)揮,成為惡性黑色素瘤免疫治療方案急需跨越的最后障

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本文編號：1065311